本發(fā)明涉及體外診斷領(lǐng)域，尤其涉及一種類似物蛋白及其制備方法、體外診斷試劑。

背景技術(shù)：

1、在臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，試劑的穩(wěn)定性是體外診斷試劑產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)重要參數(shù)。例如，校準(zhǔn)品或質(zhì)控品試劑的穩(wěn)定性影響到試劑經(jīng)過校準(zhǔn)后測(cè)值的準(zhǔn)確性，當(dāng)校準(zhǔn)品穩(wěn)定性不佳時(shí)，會(huì)導(dǎo)致測(cè)值偏差較大，影響測(cè)量結(jié)果的客觀性。

2、導(dǎo)致上述體外診斷試劑穩(wěn)定性較差的因素較多，其中，體外診斷試劑中參加免疫反應(yīng)的抗原穩(wěn)定性較差，容易出現(xiàn)聚集和降解是較為常見的因素。以saa(serum?amyloida，saa)全稱血清淀粉樣蛋白a為例，saa是一種由肝細(xì)胞產(chǎn)生后被分泌到血清中的一種急性時(shí)相蛋白，臨床上血常規(guī)與crp、saa聯(lián)合檢測(cè)。saa對(duì)病毒性感染和細(xì)菌性感染都有升高，對(duì)局部炎癥也有靈敏反應(yīng)；伴隨著感染的康復(fù)或炎癥消失，saa濃度會(huì)迅速下降到正常水平，在臨床上通常被用于提示炎癥反應(yīng)和鑒別感染類型。但是，saa抗原作為較不穩(wěn)定的蛋白，在體外穩(wěn)定性較差，重組表達(dá)的saa抗原在體外容易發(fā)生聚集和降解，是導(dǎo)致saa穩(wěn)定性差的主要原因，直接影響到saa相關(guān)診斷試劑產(chǎn)品的使用期限及產(chǎn)品質(zhì)量。

3、在現(xiàn)有技術(shù)中，有通過使用穩(wěn)定的saa突變體作為免疫原，獲得穩(wěn)定的診斷試劑產(chǎn)品；此外，亦有報(bào)道使用蛋白交聯(lián)劑處理獲取saa多聚體作為免疫原，從而獲得穩(wěn)定性提高的saa免疫原。但上述兩種方法均直接改變了參與免疫反應(yīng)的抗原結(jié)構(gòu)，可能導(dǎo)致反應(yīng)性與真實(shí)樣本的差異。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的在于提供一種類似物蛋白及其制備方法、體外診斷試劑，解決體外診斷試劑穩(wěn)定性差的的技術(shù)問題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種體外診斷試劑，所述體外診斷試劑含有蛋白穩(wěn)定劑，所述蛋白穩(wěn)定劑包括類似物蛋白，所述類似物蛋白由目標(biāo)穩(wěn)定蛋白突變得到。

3、在本技術(shù)的一些實(shí)施例中，所述類似物蛋白的氨基酸序列與所述目標(biāo)穩(wěn)定蛋白的氨基酸序列重合率為80％以上；

4、和/或，所述目標(biāo)穩(wěn)定蛋白包括血清淀粉樣蛋白a、c反應(yīng)蛋白、降鈣素原、白介素6、腦鈉素或肌紅蛋白。

5、在本技術(shù)的一些實(shí)施例中，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中的第3位苯丙氨酸突變?yōu)楸彼?，?4位的丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸，第66位的谷氨酰胺突變?yōu)楦彼岬玫桨被嵝蛄腥鐂eq?id?no.1所示的類似物蛋白；

6、和/或，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第4位苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼?，?7位的蛋氨酸突變?yōu)榱涟彼幔?6位的谷氨酰胺突變位脯氨酸，第68位苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼岬玫桨被嵝蛄腥鐂eq?id?no.2所示的類似物蛋白；

7、和/或，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中，使第17位的蛋氨酸突變?yōu)榱涟彼?，使?6位的谷氨酰胺突變位脯氨酸，使第68位苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼幔沟?2位甘氨酸突變?yōu)樘於彼岬玫桨被嵝蛄腥鐂eq?id?no.3所示的類似物蛋白；

8、和/或，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第3位氨基酸和第4位氨基酸中的至少一種氨基酸突變?yōu)槌奖彼嶂獾娜我庖环N氨基酸得到所述類似物蛋白；

9、和/或，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第17位的氨基酸突變?yōu)槌鞍彼嶂獾娜我庖环N氨基酸得到所述類似物蛋白；

10、和/或，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第44位的氨基酸突變?yōu)槌彼嶂獾娜我庖环N氨基酸得到所述類似物蛋白；

11、和/或，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第66至68位的氨基酸突變?yōu)槌鲅宓矸蹣拥鞍譨序列氨基酸之外的任意一種氨基酸得到所述類似物蛋白。

12、在本技術(shù)的一些實(shí)施例中，所述類似物蛋白和所述目標(biāo)穩(wěn)定蛋白的質(zhì)量比為(1:10)-(10:1)；

13、或，所述目標(biāo)穩(wěn)定蛋白為液態(tài)，以所述液態(tài)目標(biāo)穩(wěn)定蛋白的總體積l為基準(zhǔn)，所述類似物蛋白的添加量為(1.0-100)mg/l。

14、在本技術(shù)的一些實(shí)施例中，所述體外診斷試劑包括質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或試劑盒；

15、和/或，所述體外診斷試劑為比濁法、酶聯(lián)免疫法、放射免疫法或化學(xué)發(fā)光法所用的診斷試劑；

16、和/或，所述體外診斷試劑的檢測(cè)樣本包括血清、血漿、全血或體液。

17、在本技術(shù)的一些實(shí)施例中，所述體外診斷試劑為試劑盒，所述試劑盒包括血清淀粉樣蛋白a檢測(cè)試劑盒、c反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒、降鈣素原檢測(cè)試劑盒、白介素6檢測(cè)試劑盒、腦鈉素檢測(cè)試劑盒或肌紅蛋白檢測(cè)試劑盒。

18、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提供一種類似物蛋白的制備方法，通過對(duì)野生型蛋白氨基酸序列中20％以下的氨基酸進(jìn)行突變，獲得類似物蛋白。

19、在本技術(shù)的一些實(shí)施例中，所述野生型蛋白包括血清淀粉樣蛋白a、c反應(yīng)蛋白、降鈣素原、白介素6、腦鈉素或肌紅蛋白；

20、和/或，所述野生型蛋白為血清淀粉樣蛋白a，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中的第3位苯丙氨酸突變?yōu)楸彼幔?4位的丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸，第66位的谷氨酰胺突變?yōu)楦彼岬玫桨被嵝蛄腥鐂eq?id?no.1所示的類似物蛋白；

21、和/或，所述野生型蛋白為血清淀粉樣蛋白a，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第4位苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼?，?7位的蛋氨酸突變?yōu)榱涟彼?，?6位的谷氨酰胺突變位脯氨酸，第68位苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼岬玫桨被嵝蛄腥鐂eq?idno.2所示的類似物蛋白；

22、和/或，所述野生型蛋白為血清淀粉樣蛋白a，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中，使第17位的蛋氨酸突變?yōu)榱涟彼?，使?6位的谷氨酰胺突變位脯氨酸，使第68位苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼?，使?2位甘氨酸突變?yōu)樘於彼岬玫桨被嵝蛄腥鐂eq?id?no.3所示的類似物蛋白；

23、和/或，所述野生型蛋白為血清淀粉樣蛋白a，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第3位氨基酸和第4位氨基酸中的至少一種氨基酸突變?yōu)槌奖彼嶂獾娜我庖环N氨基酸得到所述類似物蛋白；

24、和/或，所述野生型蛋白為血清淀粉樣蛋白a，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第17位的氨基酸突變?yōu)槌鞍彼嶂獾娜我庖环N氨基酸得到所述類似物蛋白；

25、和/或，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第44位的氨基酸突變?yōu)槌彼嶂獾娜我庖环N氨基酸得到所述類似物蛋白；

26、和/或，所述野生型蛋白為血清淀粉樣蛋白a，以所述血清淀粉樣蛋白a為模板，將所述血清淀粉樣蛋白a中第66至68位的氨基酸突變?yōu)槌鲅宓矸蹣拥鞍譨序列氨基酸之外的任意一種氨基酸得到所述類似物蛋白。

27、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提供一種類似物蛋白，所述類似物蛋白由野生型蛋白突變得到，所述類似物蛋白的氨基酸序列和所述野生型蛋白的氨基酸序列的重合率在80％以上。

28、在本技術(shù)的一些實(shí)施例中，所述類似物蛋白具有如seq?id?no.1所示的氨基酸序列；

29、和/或，所述類似物蛋白具有如seq?id?no.2所示的氨基酸序列；

30、和/或，所述類似物蛋白具有如seq?id?no.3所示的氨基酸序列；

31、和/或，所述類似物蛋白具有如seq?id?no.4所示的氨基酸序列；

32、和/或，所述類似物蛋白具有如seq?id?no.5所示的氨基酸序列；

33、和/或，所述類似物蛋白具有如seq?id?no.6所示的氨基酸序列；

34、和/或，所述類似物蛋白具有如seq?id?no.7所示的氨基酸序列。

35、本發(fā)明所能實(shí)現(xiàn)的有益效果：

36、本發(fā)明以由目標(biāo)穩(wěn)定蛋白突變獲得的類似物蛋白作為蛋白穩(wěn)定劑添加到體外診斷試劑中，類似物蛋白相比目標(biāo)穩(wěn)定蛋白具有較低的反應(yīng)活性，若目標(biāo)穩(wěn)定蛋白應(yīng)用于參與抗原抗體免疫反應(yīng)，如作為抗原或者抗體參與用于診斷試劑的免疫反應(yīng)中，則類似物蛋白在相應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)中較目標(biāo)穩(wěn)定蛋白的活性可降低90％以上，使其具有增強(qiáng)目標(biāo)蛋白穩(wěn)定性的作用，防止目標(biāo)穩(wěn)定蛋白出現(xiàn)聚集和降解；若目標(biāo)穩(wěn)定蛋白應(yīng)用于酶催化反應(yīng)，類似物蛋白相應(yīng)的酶催化活性可降低90％以上，使其具有增強(qiáng)目標(biāo)酶穩(wěn)定性的作用，防止目標(biāo)酶出現(xiàn)聚集和降解。