本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)，尤其涉及一種镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

1、镥[177lu]標(biāo)記放射性藥物制備過(guò)程中會(huì)添加金屬螯合劑dtpa。dtpa作為一種高效螯合劑，劑量過(guò)大時(shí)會(huì)使機(jī)體微量元素排除而引起毒副反應(yīng)，造成身體機(jī)能損傷。為保證藥物的質(zhì)量和安全性，需要對(duì)藥物中dtpa進(jìn)行含量控制。

2、目前，dtpa含量測(cè)定的主要方法有：滴定法、高效液相色譜法和紫外-可見(jiàn)分光光度法，具體為：

3、滴定法是在待測(cè)溶液中加入一定量的氨-氯化銨緩沖液，然后再加入適量的鉻黑t指示劑，用鋅滴定液進(jìn)行絡(luò)合滴定，反應(yīng)至溶液顯紫紅色，即為滴定終點(diǎn)，該方法一般適用于含量高、成分相對(duì)簡(jiǎn)單的物質(zhì)，如用于注射用亞錫噴替酸中dtpa含量的測(cè)定，而對(duì)于低含量的dtpa測(cè)定誤差大。

4、高效液相色譜法(hplc法)是目前最有效的分析測(cè)試手段，其檢測(cè)器主要有紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和示差折光檢測(cè)器等，常規(guī)的hplc法采用紫外檢測(cè)器，也是目前液相色譜使用最廣泛的一種檢測(cè)器，它根據(jù)物質(zhì)對(duì)紫外光的吸收能力來(lái)進(jìn)行分析，而dtpa無(wú)紫外吸收，因此用常規(guī)的hplc法測(cè)定時(shí)需要對(duì)其進(jìn)行衍生化處理，即將dtpa與金屬離子進(jìn)行絡(luò)合，形成的穩(wěn)定絡(luò)合物在特定波長(zhǎng)處有穩(wěn)定的紫外吸收。

5、紫外-可見(jiàn)分光光度法的原理與常規(guī)的hplc法一致，加入金屬離子對(duì)dtpa進(jìn)行衍生化處理，然后采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行含量測(cè)定，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算得到dtpa的含量。

6、hplc法和紫外-可見(jiàn)分光光度法由于需要進(jìn)行衍生化處理的問(wèn)題，會(huì)受到制劑中其它輔料的干擾，影響測(cè)量結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

7、鑒于此，提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供一種镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，用以解決現(xiàn)有技術(shù)中測(cè)定方法存在的測(cè)量結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性不足的缺陷，基于cad的高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法，同時(shí)在該檢測(cè)中設(shè)計(jì)特定的流動(dòng)相、梯度洗脫程度和色譜柱，實(shí)現(xiàn)對(duì)镥[177lu]放射性藥物制劑中dtpa含量進(jìn)行檢測(cè)，該檢測(cè)方法具有較好的系統(tǒng)適用性、專屬性、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和可靠性。

2、具體地，本發(fā)明提供一種镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，包括：采用高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法進(jìn)行測(cè)試，其中，色譜柱采用多孔石墨碳作為填充劑，并采用梯度方式洗脫，流動(dòng)相a為甲酸、三氟乙酸或全氟戊酸的水溶液，流動(dòng)相b為甲酸、三氟乙酸或全氟戊酸的乙腈溶液，梯度洗脫程序如下：

3、 時(shí)間/min 流動(dòng)相a/％ 流動(dòng)相b/％ -5 100 0 0 100 0 3 100 0 18 55 45 20 55 45

4、。

5、hplc法為本領(lǐng)域常見(jiàn)分析檢測(cè)方法，其具有較好的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性。但在采用常規(guī)的hplc法檢測(cè)dtpa時(shí)，由于dtpa沒(méi)有紫外吸收，一般分析方法只能通過(guò)衍生方式進(jìn)行測(cè)定，因此采用常規(guī)的hplc法分析時(shí)，無(wú)法將dtpa檢測(cè)出來(lái)，或者雖檢測(cè)出來(lái)但存在較大干擾，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果誤差較大，不穩(wěn)定。為此，本發(fā)明提出采用基于cad的高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法對(duì)镥[177lu]放射性藥物制劑中dtpa含量進(jìn)行檢測(cè)，電噴霧檢測(cè)器(cad)，是一種對(duì)無(wú)紫外吸收或弱紫外吸收物質(zhì)具有高靈敏度、高準(zhǔn)確度的重要工具和手段，其原理是：洗脫液經(jīng)霧化后形成顆粒，經(jīng)過(guò)蒸發(fā)管干燥后與帶電氮?dú)馀鲎?，使得分析物顆粒表面帶上正電荷，最后通過(guò)靜電計(jì)測(cè)量分析物顆粒表面的電荷量。因此，本發(fā)明中在進(jìn)行測(cè)定時(shí)，dtpa無(wú)需與金屬離子進(jìn)行絡(luò)合，從而避免了制劑中輔料對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。而且經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)，在采用高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法對(duì)镥[177lu]放射性藥物制劑中dtpa含量進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，為了有效分離dtpa和高極性雜質(zhì)，選擇多孔石墨碳作為填充劑的色譜柱是很有必要的。

6、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，流動(dòng)相a為三氟乙酸的水溶液，流動(dòng)相b為三氟乙酸的乙腈溶液。

7、本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)，以三氟乙酸的水溶液為流動(dòng)相a、以三氟乙酸的乙腈溶液為流動(dòng)相b進(jìn)行梯度洗脫程序，能實(shí)現(xiàn)更好的分離效果。

8、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，流動(dòng)相a中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.1～0.3％，流動(dòng)相b中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.1～0.3％。

9、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，流動(dòng)相a中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.3％，流動(dòng)相b中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.3％。

10、流動(dòng)相a和流動(dòng)相b的濃度對(duì)dtpa的分離效果會(huì)產(chǎn)生一定的影響，當(dāng)流動(dòng)相a中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.1～0.3％，流動(dòng)相b中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.1～0.3％時(shí)，有利于dtpa的分離，更優(yōu)選為流動(dòng)相a中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.3％，流動(dòng)相b中三氟乙酸的質(zhì)量濃度為0.3％，此時(shí)，按照上述梯度洗脫程序，分離度大于1.5，且有利于各峰趨向呈高斯分布，降低拖尾。

11、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，色譜柱是采用3.0μm多孔石墨碳填裝到c18柱中得到。

12、dtpa極性強(qiáng)，采用普通的c18柱實(shí)現(xiàn)dtpa與高極性雜質(zhì)分離存在一定難度，而本發(fā)明所使用的多孔石墨碳色譜柱，對(duì)極性化合物有優(yōu)異的保留和分離特性，能夠提供dtpa分離所需要的高選擇性。

13、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，色譜柱為hypercarb，具體規(guī)格為4.6mm×150mm。

14、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，采用高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法進(jìn)行測(cè)試時(shí)，流速為0.60～1.00ml/min。研究表明，控制流速在此范圍內(nèi)，有利于dtpa峰的保留時(shí)間在合適的范圍內(nèi)。

15、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，采用高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法進(jìn)行測(cè)試時(shí)，柱溫為20℃～40℃.

16、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，采用高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法進(jìn)行測(cè)試時(shí)，cad霧化溫度為30℃～40℃，cad采集頻率為2～10hz；cad濾波時(shí)間為2～10s。

17、根據(jù)本發(fā)明提供的镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，包括：

18、配制空白溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液；

19、所述空白溶液是質(zhì)量濃度為0.3％的tfa的水溶液或者水；

20、所述對(duì)照品溶液是將dtpa溶于水中得到；

21、所述供試品溶液為镥[177lu]放射性藥物制劑；

22、將空白溶液、對(duì)照溶液和供試品溶液分別注入色譜儀，記錄色譜圖；根據(jù)供試品色譜圖中的峰面積，通過(guò)外標(biāo)法計(jì)算供試品溶液的dtpa含量。

23、本發(fā)明提供的一種镥[177lu]放射性藥物制劑中二乙烯三胺五乙酸含量的測(cè)定方法，通過(guò)基于cad的高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法，同時(shí)在該檢測(cè)中設(shè)計(jì)特定的流動(dòng)相、梯度洗脫程度和色譜柱，實(shí)現(xiàn)對(duì)镥[177lu]放射性藥物制劑中dtpa含量進(jìn)行檢測(cè)，該檢測(cè)方法中，對(duì)dtpa的分離度達(dá)到1.5以上，而且按照中國(guó)藥典2020版《9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》進(jìn)行驗(yàn)證，本發(fā)明的方法具有較好的系統(tǒng)適用性、專屬性、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和可靠性，可用于dtpa含量的測(cè)定及質(zhì)量控制。該分析方法的建立實(shí)現(xiàn)了對(duì)镥[177lu]放射性藥物制劑中dtpa含量的精準(zhǔn)檢測(cè)，具有十分重要的意義。