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檢測樣本中TAU蛋白片段的方法與流程

文檔序號:40570999發(fā)布日期:2025-01-03 11:31閱讀:11來源:國知局
檢測樣本中TAU蛋白片段的方法與流程

本發(fā)明涉及一種用于檢測患者的樣本中tau蛋白片段的體外方法,其中該片段的氨基酸序列由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。該方法可以使用針對tau關鍵表位的特異性結(jié)合分子(例如抗體)。本發(fā)明可用于tau蛋白病的診斷。


背景技術:

1、與tau相關的疾病統(tǒng)稱為神經(jīng)退行性tau蛋白病。阿爾茨海默病(ad)屬于這類神經(jīng)退行性疾病。癡呆癥如阿爾茨海默病(ad)的常見特征是在受影響的患者腦內(nèi)逐漸積累由tau組成的蛋白質(zhì)結(jié)構(如β-淀粉樣斑塊和神經(jīng)原纖維纏結(jié)(nft))的細胞內(nèi)和/或細胞外沉積。tau聚集病變的出現(xiàn)與病理性神經(jīng)原纖維變性和腦萎縮以及認知障礙有很大關聯(lián)。在ad中,tau蛋白自組裝以形成成對螺旋細絲(phf)和直細絲,它們構成腦中神經(jīng)元和營養(yǎng)不良性神經(jīng)突內(nèi)的神經(jīng)原纖維纏結(jié)。蛋白質(zhì)錯誤折疊形成淀粉樣蛋白原纖維是許多不同疾病的特點,這些疾病統(tǒng)稱為淀粉樣變性,每種疾病都以特定前體蛋白為特征。

2、對ad和其他蛋白質(zhì)構象障礙的病因的長期研究并未帶來所期望的在診斷或治療方面的重大進展。有限進展的一個原因認為是缺乏靶向tau關鍵表位的高親和力特異性結(jié)合分子。這個缺陷通過以威士達實驗室有限公司(wista?laboratories?ltd)的名義遞交的pct申請第pct/ep2021/069160號(其全部內(nèi)容通過引用并入本文)中描述的、所公開的產(chǎn)生特異性結(jié)合分子得以解決。所公開的特異性結(jié)合分子源自用全長tau蛋白和來自phf核心的截短tau片段免疫接種的綿羊中分離出的抗體。使用綿羊作為特異性結(jié)合分子的來源被認為對本發(fā)明特異性結(jié)合分子的高親和力做出貢獻。pct/ep2021/069160描述了對例如ad模型和ad或輕度認知障礙(mci)患者的腦裂解物和血漿樣本中的tau進行基于特異性結(jié)合分子的檢測。但是,pct/ep2021/069160沒有公開在患者樣本中檢測到的片段的身份。chen等人(2019)alzheimers?dement.15(3):487–496綜述了細胞外tau的復雜性以及開發(fā)基于血液篩查阿爾茨海默病的有限進展。chen等人得出結(jié)論,“大多數(shù)血漿tau是全長的”,并且提議在診斷背景下使用n-末端測定法。描述了兩種n-末端測定法(nt1和nt2)。nt1需要全長tau的殘基6至198的最小序列。nt2需要全長tau的殘基6至224的較長序列。chen等人提議在診斷背景下更多使用n-末端nt1測定法,而不是nt2測定法(其檢測較長的片段)。

3、發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)出用于檢測患者的樣本中tau蛋白片段的測定法,其中該片段的氨基酸序列由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。發(fā)明人已進行多項測定以及質(zhì)譜分析,以檢測人血漿的tau水平,結(jié)果都表明tau的“延伸核心”片段(具有僅在seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的殘基)釋放到血漿中似乎是tau蛋白正常加工的一部分。發(fā)明人已證明,與認知未受損對照血漿相比,此類片段在阿爾茨海默病血漿樣本中顯著減少。這些測定法可以使用pct申請第pct/ep2021/069160號中描述的一種或多種特異性結(jié)合分子,該特異性結(jié)合分子可以提供包括高親和力帶來靈敏度提高的優(yōu)勢。發(fā)明人還出乎意料地發(fā)現(xiàn),使用與seq?id?no:1的殘基297至391結(jié)合的第一特異性結(jié)合分子使得第二特異性結(jié)合分子能夠穩(wěn)健地檢測tau片段,但是逆向使用(第一特異性結(jié)合分子與seq?idno:1的殘基297至391外結(jié)合以及第二特異性結(jié)合分子與seq?id?no:1的殘基297至391內(nèi)結(jié)合)可能無法檢測到tau片段,即使使用了與seq?id?no:1的殘基297至391結(jié)合的高親和力的特異性結(jié)合分子。


技術實現(xiàn)思路

1、根據(jù)第一方面,本發(fā)明提供了一種用于檢測患者的樣本中tau蛋白片段的體外方法,其中該片段的氨基酸序列由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。

2、根據(jù)第二方面,本發(fā)明提供了一種診斷方法,包括檢測患者的樣本中tau蛋白片段,其中該片段的氨基酸序列由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。

3、根據(jù)第三方面,本發(fā)明提供了一種用于根據(jù)第一方面或第二方面的方法的裝置。

4、根據(jù)第四方面,本發(fā)明提供了一種試劑盒,其包含適合用于根據(jù)第一方面或第二方面的方法的特異性結(jié)合分子和用于檢測患者的樣本中tau蛋白片段的試劑,其中該片段的氨基酸序列由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。



技術特征:

1.一種用于檢測患者的樣本中tau蛋白片段的體外方法,其中,所述片段的氨基酸序列由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。

2.一種診斷方法,包括檢測患者的樣本中tau蛋白片段,其中,所述片段的氨基酸序列由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。

3.根據(jù)權利要求2所述的診斷方法,其中,所述方法用于診斷tau蛋白病。

4.根據(jù)權利要求3所述的診斷方法,其中,所述tau蛋白病選自由以下組成的組:阿爾茨海默病、原發(fā)性年齡相關tau蛋白病(part)、神經(jīng)原纖維纏結(jié)為主的老年性癡呆、慢性創(chuàng)傷性腦病(cte)、進行性核上性麻痹(psp)、皮質(zhì)基底節(jié)變性(cbd)、額顳葉癡呆(ftd)、行為變異型額顳葉癡呆(bvftd)、與17號染色體關聯(lián)的額顳葉癡呆伴帕金森綜合征(ftdp-17)、皮克病、去抑制-癡呆-帕金森綜合征-肌萎縮征群(ddpac)、蒼白球-腦橋-黑質(zhì)變性(ppnd)、關島型als綜合征、蒼白球-黑質(zhì)-丘腦底核變性(pnld)、嗜銀顆粒性癡呆(agd)、唐氏綜合征(ds)、路易體癡呆(dlb)、腦炎后帕金森綜合征(pep)、拳擊員癡呆(dp)、創(chuàng)傷性腦損傷(tbi)、中風、局部缺血、lytico-bodig病(關島型帕金森癡呆征群)、神經(jīng)節(jié)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)節(jié)細胞瘤、腦膜血管瘤病、腦炎后帕金森病、亞急性硬化性全腦炎(sspe)、鉛毒性腦病、結(jié)節(jié)性硬化癥、泛酸激酶相關神經(jīng)變性、脂褐質(zhì)沉積癥和輕度認知障礙(mci)。

5.根據(jù)權利要求2至4中任一項所述的診斷方法,其中,所述方法用于診斷阿爾茨海默病。

6.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段由seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。

7.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基297至391中的至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個、至少93個、至少94個或95個連續(xù)氨基酸殘基。

8.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基151至243中的至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個或93個連續(xù)氨基酸殘基。

9.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的至少30個連續(xù)氨基酸殘基,以及

10.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基297至391中的至少30個連續(xù)氨基酸殘基和/或seq?id?no:1的殘基151至243中的至少30個連續(xù)氨基酸殘基。

11.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的氨基酸殘基337至349和/或seq?id?no:1的氨基酸殘基370至374。

12.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的氨基酸殘基194至198和/或seq?id?no:1的氨基酸殘基159至163。

13.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少95個、至少100個、至少105個、至少110個、至少115個、至少120個、至少125個、至少130個、至少135個、至少140個、至少145個、至少150個、至少155個、至少160個、至少165個、至少170個、至少175個、至少180個、至少185個、至少190個、至少195個、至少200個、至少205個、至少210個、至少215個、至少220個、至少225個、至少230個、至少235個、至少240個、至少245個、至少250個、至少255個、至少260個、至少261個、至少262個、至少263個、至少264個、至少265個、至少266個或267個連續(xù)氨基酸殘基。

14.根據(jù)權利要求1至13中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的至少156個連續(xù)氨基酸殘基,以及

15.根據(jù)權利要求1至13中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的至少181個連續(xù)氨基酸殘基,以及

16.根據(jù)權利要求1至13中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的至少191個連續(xù)氨基酸殘基,以及

17.根據(jù)權利要求1至13中任一項所述的方法,其中,所述片段包含seq?id?no:1的殘基113至379內(nèi)的至少216個連續(xù)氨基酸殘基,以及

18.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段包含以下氨基酸殘基:

19.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段的氨基酸序列由以下殘基內(nèi)的氨基酸殘基組成:

20.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述片段的氨基酸序列由seq?idno:1的氨基酸殘基113至379組成。

21.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述樣本是血漿樣本、全血樣本、腦裂解物樣本或腦脊液(csf)樣本。

22.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述樣本是血漿樣本。

23.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述樣本是血漿樣本,并且其中所述片段包含seq?id?no:1的氨基酸殘基194至349。

24.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,包括將所述樣本與第一特異性結(jié)合分子接觸。

25.根據(jù)權利要求24所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與seq?id?no:1的殘基297至391內(nèi)的表位結(jié)合。

26.根據(jù)權利要求24或25所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與seq?id?no:1的殘基307至391內(nèi)的表位結(jié)合。

27.根據(jù)權利要求24至26中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與seqid?no:1的殘基337至379內(nèi)的表位結(jié)合。

28.根據(jù)權利要求24至27中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與由seq?id?no:1的殘基337至349組成的表位結(jié)合。

29.根據(jù)權利要求24至28中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與由seq?id?no:1的殘基337至355組成的表位結(jié)合。

30.根據(jù)權利要求24至29中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

31.根據(jù)權利要求24至30中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

32.根據(jù)權利要求24至31中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含框架區(qū)(fr):vhfr1、vhfr2、vhfr3、vhfr4、vlfr1、vlfr2、vlfr3和vlfr4,其中所述fr中的每個fr包含如下氨基酸序列:

33.根據(jù)權利要求24至32中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含如下、或其人源化變體:

34.根據(jù)權利要求24至33中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子以小于約500pm的kd與包含含有seq?id?no:1的殘基337至355的氨基酸序列的多肽或蛋白質(zhì)分子特異性結(jié)合,任選地其中,所述特異性結(jié)合通過表面等離子共振(spr)測量,并且任選地其中

35.根據(jù)權利要求24至27中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與由seq?id?no:1的殘基367至379組成的表位結(jié)合。

36.根據(jù)權利要求24至27、或35中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

37.根據(jù)權利要求24至27、或35至36中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

38.根據(jù)權利要求24至27、或35至37中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含框架區(qū)(fr):vhfr1、vhfr2、vhfr3、vhfr4、vlfr1、vlfr2、vlfr3和vlfr4,其中所述fr中的每個fr包含如下氨基酸序列:

39.根據(jù)權利要求24至27、或35至38中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含如下、或其人源化變體:

40.根據(jù)權利要求24至27、或35至39中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子以小于約500pm的kd與包含含有seq?id?no:1的殘基367至379的氨基酸序列的多肽或蛋白質(zhì)分子特異性結(jié)合,任選地其中,所述特異性結(jié)合通過表面等離子共振(spr)測量,并且任選地其中

41.根據(jù)權利要求24至27中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與由seq?id?no:1的殘基355至367組成的表位結(jié)合。

42.根據(jù)權利要求24至27、或41中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

43.根據(jù)權利要求24至27、或41至42中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

44.根據(jù)權利要求24至27、或41至43中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含框架區(qū)(fr):vhfr1、vhfr2、vhfr3、vhfr4、vlfr1、vlfr2、vlfr3和vlfr4,其中所述fr中的每個fr包含如下氨基酸序列:

45.根據(jù)權利要求24至27、或41至44中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子包含如下、或其人源化變體:

46.根據(jù)權利要求24至45中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子與s1d12、s1g2或ca4競爭以與seq?id?no:1結(jié)合。

47.根據(jù)權利要求24至46中任一項所述的方法,還包括將所述樣本與第二特異性結(jié)合分子接觸。

48.根據(jù)權利要求47所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子與seq?id?no:1的殘基151至243內(nèi)的表位結(jié)合。

49.根據(jù)權利要求47至48中任一項所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子與由seq?id?no:1的殘基194至198組成的表位結(jié)合。

50.根據(jù)權利要求47至49中任一項所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子是bt2。

51.根據(jù)權利要求47至48中任一項所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子與由seq?id?no:1的殘基159至163組成的表位結(jié)合。

52.根據(jù)權利要求47、48或51中任一項所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子是ht7。

53.根據(jù)權利要求47至49、或51中任一項所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子與bt2或ht7競爭以與seq?id?no:1結(jié)合。

54.根據(jù)權利要求47至52中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子是s1d12或s1g2,并且所述第二特異性結(jié)合分子是bt2或ht7。

55.根據(jù)權利要求47所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

56.根據(jù)權利要求47所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,

57.根據(jù)權利要求47所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子包含cdr:vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3,其中所述cdr中的每個cdr包含如下氨基酸序列:

58.根據(jù)權利要求57所述的方法,其中,所述第二特異性結(jié)合分子包含選自由3bd11、cb11、ca2、cb6、ca7、ca8、cb10、cc7、cb12、cc3、ca1、ca3、cd2、cc4、cd1和cc5組成的組的克隆的cdr。

59.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,所述第一特異性結(jié)合分子和/或所述第二特異性結(jié)合分子是免疫球蛋白、免疫球蛋白fab區(qū)、fab'、fv、fv-fc、單鏈fv(scfv)、scfv-fc、(scfv)2、雙抗體、三抗體、四抗體、雙特異性t細胞接合子(bite)、內(nèi)含肽、vnar結(jié)構域、單結(jié)構域抗體(sdab)或vh結(jié)構域。

60.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,還包括確定所述樣本中所述tau蛋白片段的濃度,并且任選地將所述樣本中所述tau蛋白片段的濃度與健康對照的樣本中所述tau蛋白片段的濃度或指示健康對象的所述tau蛋白片段的預定濃度進行比較。

61.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,當在患者的樣本中檢測到低濃度的所述tau蛋白片段時診斷為tau蛋白病,任選地其中所述低濃度是相對于健康對照的樣本中所述tau蛋白片段的濃度或指示健康對象的所述tau蛋白片段的預定濃度確定的。

62.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,當在血漿中檢測到所述tau蛋白片段小于約1300pg/ml、小于約1200pg/ml、小于約1100pg/ml、或小于約1000pg/ml時,診斷為tau蛋白病。

63.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法,其中,當檢測到所述tau蛋白片段的濃度降低為相對于健康對照的樣本中所述tau蛋白片段的濃度或指示健康對象的所述tau蛋白片段的預定濃度的至少約1/10、至少約1/10.5、至少約1/11、或至少約1/11.5時,診斷為tau蛋白病。

64.根據(jù)權利要求60至63中任一項所述的方法,其中,所述tau蛋白病是阿爾茨海默病或額顳葉癡呆,任選為行為變異型額顳葉癡呆(bvftd)。

65.一種診斷裝置,用于在根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法中使用。

66.一種試劑盒,包含適合用于根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法的特異性結(jié)合分子和用于檢測患者的樣本中tau蛋白片段的試劑,其中所述片段的氨基酸序列由seq?idno:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。


技術總結(jié)
本發(fā)明涉及一種檢測患者樣本中tau蛋白片段的體外方法,其中該片段的氨基酸序列由SEQ?ID?NO:1的殘基113至379內(nèi)的氨基酸殘基組成。該方法可使用針對tau關鍵表位的特異性結(jié)合分子(例如抗體)。本發(fā)明可用于tau蛋白病的診斷。

技術研發(fā)人員:R·洛夫特豪斯,L·K·潘妮,M·阿拉斯托,S·帕利里·索曼,A·J·R·波特,克勞德·M·維???br/>受保護的技術使用者:GT創(chuàng)新公司
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/1/2
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