本發(fā)明涉及含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的試樣溶液的制備方法及神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的分析方法。

背景技術(shù)：

1、阿爾茨海默病是癡呆癥的主要臨床實(shí)體(clinical?entity)，其罹患者近年來逐漸增加，該病的研究日益變得重要。阿爾茨海默病的發(fā)病與通過淀粉樣前體蛋白(app；amyloid?precursorprotein)的切斷而產(chǎn)生的β淀粉樣蛋白(aβ)等aβ相關(guān)肽密切相關(guān)。并且，有報(bào)道指出，將免疫沉淀法與質(zhì)譜分析法組合來檢測血液內(nèi)的多種aβ相關(guān)肽，其所檢測出的特定的aβ相關(guān)肽比能夠有效地作為腦內(nèi)淀粉樣物質(zhì)積累的血液生物標(biāo)志物來利用(非專利文獻(xiàn)1～2、專利文獻(xiàn)1～3)。

2、另一方面，為了監(jiān)控阿爾茨海默病的病情進(jìn)展，需要各種生物標(biāo)志物，除了用于反映淀粉樣物質(zhì)積累的生物標(biāo)志物以外，還需要用于反映tau積累、神經(jīng)變性等各過程的生物標(biāo)志物。其中，神經(jīng)顆粒蛋白(neurogranin)為神經(jīng)變性的生物標(biāo)志物之一，據(jù)報(bào)道在阿爾茨海默病患者的腦脊髓液(csf)中是增加的(非專利文獻(xiàn)3、非專利文獻(xiàn)4)。另外，還有報(bào)道指出，在阿爾茨海默病患者的腦內(nèi)，神經(jīng)顆粒蛋白的碎片化得到促進(jìn)，其片段肽存在于血液中，進(jìn)而還存在乙?；蚬入赘孰幕冉?jīng)翻譯及修飾的神經(jīng)顆粒蛋白(非專利文獻(xiàn)5)。因此，期待通過由血液、csf等生物試樣檢測神經(jīng)顆粒蛋白或其片段肽等神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽來確認(rèn)神經(jīng)變性的手段。

3、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

4、專利文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)1:wo2015/178398

6、專利文獻(xiàn)2:wo2017/47529

7、專利文獻(xiàn)3:日本特開2017-20980號公報(bào)

8、非專利文獻(xiàn)

9、非專利文獻(xiàn)1:kaneko?n,nakamura?a,washimi?y,kato?t,sakurai?t,arahata?y,bundo?m,takeda?a,niida?s,ito?k,toba?k,tanaka?k,yanagisawa?k.:novel?plasmabiomarker?surrogating?cerebral?amyloid?deposition.proc?jpn?acad?ser?b?physbiol?sci.2014；90(9):353-364.

10、非專利文獻(xiàn)2:nakamura?a,kaneko?n,villemagne?vl,kato?t,doecke?j,dore?v,fowler?c,li?qx,martins?r,rowe?c,tomita?t,matsuzaki?k,ishii?k,ishii?k,arahatay,iwamoto?s,ito?k,tanaka?k,masters?cl,yanagisawa?k.:high?performance?plasmaamyloid-βbiomarkers?for?alzheimer's?disease.nature.2018；554(7691):249-254.

11、非專利文獻(xiàn)3:portelius?e,olsson?b,hoglund?k,cullen?nc,kvartsberg?h,andreasson?u,zetterberg?h,sandelius?a,shaw?lm,lee?vmy,irwin?dj,grossman?m,weintraub?d,chen-plotkin?a,wolk?da,mccluskey?l,elman?l,mcbride?j,toledo?jb,trojanowski?jq,blennow?k.:cerebrospinal?fluid?neurogranin?concentration?inneurodegeneration:relation?to?clinical?phenotypes?and?neuropathology.actaneuropathol.2018；136(3):363-376.

12、非專利文獻(xiàn)4:thorsell?a,bjerke?m,gobom?j,brunhage?e,vanmechelen?e,andreasen?n,hansson?o,minthon?l,zetterberg?h,blennow?k.:neurogranin?incerebrospinal?fluid?as?a?marker?of?synaptic?degeneration?in?alzheimer'sdisease.brain?res.2010；1362:13-22.

13、非專利文獻(xiàn)5:kvartsberg?h,lashley?t,murray?ce,brinkmalm?g,cullen?nc,hoglund?k,zetterberg?h,blennow?k,portelius?e.:the?intact?postsynaptic?proteinneurogranin?is?reduced?in?brain?tissue?from?patients?with?familial?andsporadic?alzheimer’s?disease.acta?neuropathol.2019；137(1):89-102.

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明要解決的問題

2、另外，作為分析神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的生物試樣，從能夠通過常規(guī)檢查來采集、低侵入性的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選血液試樣。但是，血液等中存在的神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽是微量的，因此存在如下不利情況：根據(jù)分析方法的不同，即使是同一血液樣品，其分析結(jié)果值也會產(chǎn)生較大偏差。

3、本發(fā)明的目的在于，提供能夠抑制分析結(jié)果的偏差的神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的分析方法、及該方法中使用的含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的生物試樣的制備方法。

4、用于解決問題的方案

5、本發(fā)明的第1方式的制備方法涉及含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的生物試樣的制備方法，其中，將含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的生物試樣和相對極性為0.200以上且0.700以下的有機(jī)溶劑混合，制備上述有機(jī)溶劑的終濃度為5.0(v/v)％以上的試樣溶液。

6、使用本發(fā)明的第1方式的制備方法的第1方式的分析方法涉及神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的分析方法，其具備：制備工序，實(shí)施第1方式的制備方法；和，測定工序，使用上述試樣溶液實(shí)施質(zhì)譜分析法、液相色譜法、免疫測定法或表面等離子體共振法。

7、發(fā)明的效果

8、根據(jù)本發(fā)明的第1方式的制備方法，能夠抑制生物試樣中所含的神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的分解。另外，根據(jù)本發(fā)明的第1方式的分析方法，能夠抑制神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的分析結(jié)果的偏差。

技術(shù)特征：

1.一種含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的試樣溶液的制備方法，其中，將含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的生物試樣和相對極性為0.200以上且0.700以下的有機(jī)溶劑混合，制備所述有機(jī)溶劑的終濃度為5.0(v/v)％以上的試樣溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述有機(jī)溶劑的終濃度為5.0(v/v)％以上且20.0(v/v)％以下。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述生物試樣為血液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，還向所述生物試樣中混合緩沖液。

5.一種神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的分析方法，其具備：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分析方法，其中，所述測定工序具備：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分析方法，其中，所述質(zhì)譜分析法的電離方法為基質(zhì)輔助激光解吸電離方法。

技術(shù)總結(jié)
提供能夠抑制分析結(jié)果的偏差的神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的分析方法、及該方法中使用的含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的生物試樣的制備方法。含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的試樣溶液的制備方法將含有神經(jīng)顆粒蛋白相關(guān)肽的生物試樣和相對極性為0.200以上且0.700以下的有機(jī)溶劑混合，制備上述有機(jī)溶劑的終濃度為5.0(v/v)％以上的試樣溶液。

技術(shù)研發(fā)人員：金子直樹
受保護(hù)的技術(shù)使用者：株式會社島津制作所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2