本發(fā)明涉及納米材料應(yīng)用與化學(xué)檢測，特別是涉及基于pt/ti3c2tx納米材料檢測d-氨基酸含量的方法、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率分別居于惡性腫瘤的第五位和第三位。因此，早期發(fā)現(xiàn)和及時治療對于胃癌患者具有重要意義。目前，對于胃癌的臨床診斷方法是組織切片，該方法不僅檢測周期長，還會給病人帶來強烈的不適感甚至巨大的痛苦，還會造成感染風(fēng)險。因此，建立簡便、快速、非侵入性的方法來實現(xiàn)胃癌的早期篩查尤為重要且十分迫切。

2、據(jù)研究表明，唾液可以像血液一樣，作為“身體的鏡子”，反映個體的生理和病理狀態(tài)。分析和鑒定人類唾液中相關(guān)生物標志物的含量是發(fā)現(xiàn)和監(jiān)測與人類健康和疾病的重要步驟。同時，研究還表明，胃癌早期病人唾液中d-氨基酸(daa)的含量顯著高于正常人，健康人唾液中d-氨基酸含量為0～25.3μm?d-丙氨酸(d-ala)/0～11.3μm?d-脯氨酸(d-pro)，胃癌病人唾液中d-氨基酸含量為126.3～285.3μm?d-ala/46.1～114.5μm?d-pro。唾液中的d-氨基酸在d-氨基酸氧化酶(daao)的作用下可以被氧化為α-酮酸和氨，并同時產(chǎn)生大量過氧化氫(h2o2)。因此，通過檢測唾液中d-氨基酸的含量可以建立簡便、快速、非侵入性的方法以實現(xiàn)胃癌的早期篩查。

3、目前，唾液中d-氨基酸的檢測方法主要有表面增強拉曼散射傳感器、液相色譜法、生物傳感器和比色法等。這些方法中，比色法因具有操作簡便、快速、無創(chuàng)傷、成本低廉、結(jié)果直觀等優(yōu)勢而在臨床實驗室檢測中備受青睞，其檢測原理是：基于d-氨基酸氧化酶可以氧化唾液中的d-脯氨酸和d-丙氨酸分解為h2o2，聯(lián)合3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(tmb)比色檢測唾液中的d-氨基酸。但如何提高檢測靈敏度并保證高選擇性是比色法在臨床檢測中仍面臨的主要瓶頸。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供基于pt/ti3c2tx納米材料檢測d-氨基酸含量的方法、試劑盒及其應(yīng)用，通過自主開發(fā)的同時具有局域表面等離子體共振效應(yīng)和類過氧化物酶(pod-like)催化活性的pt/ti3c2tx納米材料作為納米探針，構(gòu)建了一種新的具有高靈敏度和高選擇性的唾液中胃癌標志物d-氨基酸的比色檢測法，突破了上述瓶頸。

2、為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種檢測d-氨基酸含量的方法，包括：

3、將待測樣本與d-氨基酸氧化酶一起進行孵育；

4、孵育完成后，加入pt/ti3c2tx納米材料和顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，并在激光輻照下進行反應(yīng)；反應(yīng)過程中，所述pt/ti3c2tx納米材料催化d-氨基酸與d-氨基酸氧化酶反應(yīng)產(chǎn)生的過氧化氫轉(zhuǎn)化為活性氧自由基(ros)，催化所述顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺氧化為氧化態(tài)tmb(oxtmb)；

5、反應(yīng)結(jié)束后，通過比色檢測法確定所述待測樣本中d-氨基酸的含量。

6、進一步，所述d-氨基酸包括d-脯氨酸和/或d-丙氨酸。

7、進一步，孵育過程和孵育完成后，還加入了緩沖液，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液和/或醋酸鹽緩沖液；優(yōu)選地，所述緩沖液選自ph為5～6.8的磷酸鹽緩沖液和ph為3.5～4.5的醋酸鹽緩沖液；更優(yōu)選地，所述緩沖液選自ph為6.0的磷酸鹽緩沖液和ph為4.0的醋酸鹽緩沖液。

8、進一步，孵育時，ph控制為4～7.5，優(yōu)選為5～6.8，更優(yōu)選為5～6.5。

9、進一步，所述顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺的濃度控制在0.1～0.35mm，優(yōu)選為0.15～0.35mm，更優(yōu)選為0.15～0.30mm。

10、進一步，所述pt/ti3c2tx納米材料的濃度控制在10～60μg/ml，優(yōu)選為10～40μg/ml，更優(yōu)選為10～35μg/ml。

11、進一步，所述激光輻照反應(yīng)時間為1～15min，優(yōu)選為3～12min，更優(yōu)選為4～8min。

12、進一步，所述激光選自近紅外光，優(yōu)選為780～850nm。

13、進一步，所述pt/ti3c2tx納米材料為pt/ti3c2tx納米片，包括二維納米片ti3c2tx以及生長在所述二維納米片ti3c2tx上的pt納米粒子(pt?nps)。

14、進一步，所述pt/ti3c2tx納米材料的制備方法包括：將聚乙烯吡咯烷酮、ti3c2tx溶液與pt源前驅(qū)體混合進行還原反應(yīng)；還原反應(yīng)結(jié)束后離心，洗滌沉淀，得到pt/ti3c2tx納米材料。

15、進一步，所述pt/ti3c2tx納米材料的制備方法包括：將聚乙烯吡咯烷酮、ti3c2tx溶液與pt源前驅(qū)體混合進行預(yù)反應(yīng)，再加入還原劑，進行還原反應(yīng)；還原反應(yīng)結(jié)束后離心，洗滌沉淀，得到pt/ti3c2tx納米材料。

16、進一步，所述還原劑選自硼氫化鈉、檸檬酸鈉、抗壞血酸中的任意一種。

17、進一步，所述pt源前驅(qū)體選自氯鉑酸、六水合氯鉑酸、氯鉑酸鈉、氯鉑酸鉀、氯鉑酸銨、氯化鉑及其他鉑的可溶性鹽中的任意一種。

18、本發(fā)明還提供一種檢測d-氨基酸含量的試劑盒，包括：d-氨基酸氧化酶、pt/ti3c2tx納米材料與顯色底物，所述顯色底物為3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺。

19、進一步，所述試劑盒還包括緩沖液，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液和/或醋酸鹽緩沖液。

20、進一步，所述試劑盒還包括ph為5～6.8的磷酸鹽緩沖液和ph為3.5～4.5的醋酸鹽緩沖液；優(yōu)選地，所述試劑盒還包括ph為6.0的磷酸鹽緩沖液和ph為4.0的醋酸鹽緩沖液。

21、本發(fā)明還提供pt/ti3c2tx納米材料在制備用于檢測唾液中胃癌標志物d-氨基酸含量的試劑盒中的應(yīng)用。

22、進一步，所述用于檢測唾液中胃癌標志物d-氨基酸含量的試劑盒還包括以下組分中的至少一種：d-氨基酸氧化酶、顯色底物與緩沖液；所述顯色底物為3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液和/或醋酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液ph為5～6.8，優(yōu)選為6.0，所述醋酸鹽緩沖液ph為3.5～4.5，優(yōu)選為4.0。

23、進一步，所述pt/ti3c2tx納米材料具有局域表面等離子體共振效應(yīng)和類過氧化物酶催化活性，所述pt/ti3c2tx納米材料用于催化d-氨基酸與d-氨基酸氧化酶反應(yīng)產(chǎn)生的過氧化氫轉(zhuǎn)化為活性氧自由基，催化所述顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺氧化為氧化態(tài)tmb。

24、如上所述，本發(fā)明的基于pt/ti3c2tx納米材料檢測d-氨基酸含量的方法、試劑盒及其應(yīng)用，具有以下有益效果：

25、本發(fā)明開發(fā)了一種在二維納米片ti3c2tx上生長小尺寸pt?nps的復(fù)合納米材料pt/ti3c2tx，該材料具有局域表面等離子體共振效應(yīng)和優(yōu)異的pod-like活性，可催化由d-氨基酸和d-氨基酸氧化酶反應(yīng)后產(chǎn)生的h2o2轉(zhuǎn)化為大量活性ros，顯著加速顯色底物分子tmb催化氧化為oxtmb，且在激光(如近紅外光)輻照下上述催化過程可得到進一步加速?；谠撛?，本發(fā)明為檢測人類唾液中d-氨基酸的含量搭建了一個具有高靈敏度和選擇性的比色平臺，且將該比色檢測平臺應(yīng)用于臨床唾液樣本的檢測中，取得了預(yù)期的效果。因此，本發(fā)明為人類篩查和診斷胃癌疾病提供了迅速、簡單、非侵入性、無痛的新路徑。