本發(fā)明涉及植物優(yōu)良單株篩選方法，具體為一種基于單株茶樹氨基酸和茶多酚含量快速初篩的方法。

背景技術(shù)：

1、兒茶素，英文名為catechin，又名兒茶酸、兒茶精(caredhieacid)，系從茶葉等天然植物中提取出來的一類酚類活性物質(zhì)，分子式為c15h14o6，相對分子質(zhì)量為290.28。為白色針狀結(jié)晶(水-醋酸)，熔點(diǎn)212～216℃，溶于熱水、乙醇、冰醋酸、丙酮，微溶于冷水和乙醚，幾乎不溶于苯、氯仿及石油醚。

2、兒茶素約占茶多酚含量的75％到80％，具有抗腫瘤、抗氧化、抗病菌以及保護(hù)心腦器官等多種藥理作用，也是茶的苦澀味來源之一。氨基酸，是含有堿性氨基和酸性羧基的有機(jī)化合物。羧酸碳原子上的氫原子被氨基取代后形成的化合物。

3、茶葉中含有約1％～4％的氨基酸，已發(fā)現(xiàn)的有26種，包含20種蛋白質(zhì)氨基酸和6種非蛋白質(zhì)氨基酸，其中，最主要的有茶氨酸、谷氨酸、天門冬氨酸和精氨酸。尤其是茶氨酸，幾乎為茶葉所特有，占茶葉干物質(zhì)的1％～2％，約占所有氨基酸含量的50％。茶葉中的氨基酸也是茶葉鮮爽口感的主要來源之一。高茶多酚和高氨基酸含量的茶樹資源對改良我國茶樹品種有較大的潛在應(yīng)用價值。

4、所以在茶樹種質(zhì)野外資源調(diào)查、優(yōu)異種質(zhì)資源篩選鑒定及創(chuàng)制的過程中，非常需要一種快速地，能夠在野外簡易設(shè)備條件下能夠使用的茶多酚和高氨基酸含量的篩選方法。

5、但迄今為止，國內(nèi)外茶葉茶多酚和氨基酸含量的鑒定大都采取高效液相色譜儀測定方法，該方法受茶樹發(fā)育時期和生存環(huán)境影響、對檢測設(shè)備要求較高、檢測時間較長且需要一定量的茶樹葉片，無法做到對野外尤其是大量單株資源的快速鑒定。

6、因此需要對以上問題提出一種新的解決方案。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種基于單株茶樹氨基酸和茶多酚含量快速初篩的方法，利用相對便攜的儀器設(shè)備，在茶樹鮮葉采集地快速完成氨基酸和茶多酚含量差異單株茶樹的初步篩選，也可應(yīng)用于茶樹新品種選育過程中的早期鑒定，目的在于大量減少檢測所用的茶鮮葉量，加快茶樹高品質(zhì)單株的篩選流程，降低物料成本和時間成本，以解決背景技術(shù)中提出的技術(shù)問題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，至少包括以下步驟：

3、s1：采用打孔器對茶鮮葉進(jìn)行打孔取樣，將取得的樣品放入1.5ml離心管中磨碎；

4、s2：在離心管中加入沸水，并在沸水中浸提一定時間后，進(jìn)行離心，獲得浸提母液；

5、s3：向八連管中依次加入磷酸鹽緩沖液、茚三酮顯色劑和浸提母液，在沸水浴中浸提一定時間后取出，觀察對比顏色變化，顏色越深表明氨基酸含量越高。

6、進(jìn)一步地，所述采用打孔器對茶鮮葉進(jìn)行打孔取樣的取樣部位為第二葉，所述取樣的質(zhì)量為0.03±0.005g。

7、進(jìn)一步地，所述s1中的1.5ml離心管為錐形離心管，所述1.5ml離心管中磨碎采用的為高速組織研磨器，所述高速組織研磨器的型號為ose-y30。

8、進(jìn)一步地，所述s1中進(jìn)行磨碎的過程中需要加入液氮輔助，粉碎時間在2-3min。

9、進(jìn)一步地，所述s2中在離心管中加入沸水的容積為0.75ml，所述s2中在沸水中浸提的時間為30min，在沸水中浸提每隔5min振蕩搖勻一次，所述沸水采用的為超純水，所述振蕩搖勻使用的振蕩器，所述振蕩器為便攜式漩渦混合器，所述振蕩搖勻的時間為15s。

10、進(jìn)一步地，所述s2中進(jìn)行離心的時間為3min，所述離心使用的為便攜式低速離心機(jī)，所述離心過程中的轉(zhuǎn)速為2000rpm。

11、進(jìn)一步地，所述s3中的八連管為200μl八連管，所述磷酸鹽緩沖液的加入量為40μl，所述茚三酮顯色劑的加入量為40μl，所述浸提母液的加入量為80μl，所述沸水浴的時間為15min。

12、一種基于單株茶樹茶多酚含量快速初篩的方法，至少包括以下步驟：

13、步驟一：采用打孔器對茶鮮葉進(jìn)行打孔取樣，取樣0.03±0.005g，放入1.5ml離心管中磨碎；

14、步驟二：在離心管中加入0.75ml的70％甲醇水溶液，且所述70％甲醇水溶液在加入離心管前需要進(jìn)行70℃水浴預(yù)熱；

15、步驟三：離心管內(nèi)混勻后移入70℃水浴鍋水浴，浸提10min，在浸提過程中每5min進(jìn)行一次振蕩搖勻，在浸提后離心3min，獲得浸提母液；

16、步驟四：在八連管中，依次加入10％福林酚和浸提母液，搖勻，放置反應(yīng)5min，再加入7.5％碳酸鈉溶液，靜置10min，觀察對比顏色變化，顏色越深表明茶多酚含量越高。

17、進(jìn)一步地，所述步驟一中的1.5ml離心管為錐形離心管，所述1.5ml離心管中磨碎采用的為高速組織研磨器，所述高速組織研磨器的型號為ose-y30，所述步驟一中進(jìn)行磨碎的過程中需要加入液氮輔助，粉碎時間在2-3min。

18、進(jìn)一步地，所述步驟二中的八連管為200μl八連管，所述10％福林酚試劑的加入量為100μl，所述浸提母液的加入量為2.5μl，所述7.5％碳酸鈉溶液的加入量為80μl。

19、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

20、本發(fā)明通過整體方法的設(shè)計，可以大量減少檢測所用的茶鮮葉數(shù)量，并且采用相對便攜的儀器設(shè)備，可以做到在茶樹鮮葉采集地進(jìn)行快速初步篩選，加快了高品質(zhì)單株的篩選流程，降低了物料成本和時間成本。

技術(shù)特征：

1.一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，其特征在于：至少包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，其特征在于：所述采用打孔器對茶鮮葉進(jìn)行打孔取樣的取樣部位為第二葉，所述取樣的質(zhì)量為0.03±0.005g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，其特征在于：所述s1中的1.5ml離心管為錐形離心管，所述1.5ml離心管中磨碎采用的為高速組織研磨器，所述高速組織研磨器的型號為ose-y30。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，其特征在于：所述s1中進(jìn)行磨碎的過程中需要加入液氮輔助，粉碎時間在2-3min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，其特征在于：所述s2中在離心管中加入沸水的容積為0.75ml，所述s2中在沸水中浸提的時間為30min，在沸水中浸提每隔5min振蕩搖勻一次，所述沸水采用的為超純水，所述振蕩搖勻使用的振蕩器，所述振蕩器為便攜式漩渦混合器，所述振蕩搖勻的時間為15s。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，其特征在于：所述s2中進(jìn)行離心的時間為3min，所述離心使用的為便攜式低速離心機(jī)，所述離心過程中的轉(zhuǎn)速為2000rpm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于單株茶樹氨基酸含量快速初篩的方法，其特征在于：所述s3中的八連管為200μl八連管，所述磷酸鹽緩沖液的加入量為40μl，所述茚三酮顯色劑的加入量為40μl，所述浸提母液的加入量為80μl，所述沸水浴的時間為15min。

8.一種基于單株茶樹茶多酚含量快速初篩的方法，其特征在于：至少包括以下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種基于單株茶樹茶多酚含量快速初篩的方法，其特征在于：所述步驟一中的1.5ml離心管為錐形離心管，所述1.5ml離心管中磨碎采用的為高速組織研磨器，所述高速組織研磨器的型號為ose-y30，所述步驟一中進(jìn)行磨碎的過程中需要加入液氮輔助，粉碎時間在2-3min。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種基于單株茶樹茶多酚含量快速初篩的方法，其特征在于：所述步驟二中的八連管為200μl八連管，所述10％福林酚試劑的加入量為100μl，所述浸提母液的加入量為2.5μl，所述7.5％碳酸鈉溶液的加入量為80μl。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于單株茶樹氨基酸和茶多酚含量快速初篩的方法，涉及植物優(yōu)良單株篩選方法技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明利用相對便攜的儀器設(shè)備，在茶樹鮮葉采集地快速完成氨基酸和茶多酚含量差異單株茶樹的初步篩選，也可應(yīng)用于茶樹新品種選育過程中的早期鑒定，目的在于大量減少檢測所用的茶鮮葉量，加快茶樹高品質(zhì)單株的篩選流程，降低物料成本和時間成本。

技術(shù)研發(fā)人員：童華榮,袁連玉,魏昊,代洪葦
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23