本發(fā)明屬于生物，具體涉及神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在制備胃癌預(yù)后評(píng)估產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、胃癌是最常見的癌癥之一，也是癌癥相關(guān)死亡的最常見原因之一[1]。盡管在診斷和治療方面取得了一些進(jìn)展，但許多患者仍預(yù)后不良，這可能與胃癌的生物學(xué)特征以及個(gè)體差異有關(guān)[2]。當(dāng)前，有眾多研究關(guān)注胃癌患者的預(yù)后情況。已探索多種方法來預(yù)測(cè)胃癌患者的預(yù)后狀況。臨床常見的腫瘤標(biāo)記物，如cea、ca199、ca724等組合輔助診斷與預(yù)后，新型臨床生物標(biāo)記物ctdna用作疾病監(jiān)控[3–5]。另外，異常dna甲基化和組蛋白修飾等表觀遺傳改變作為預(yù)后標(biāo)志物，采用的是rt-pcr和分子病理學(xué)方法來確認(rèn)與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和分期相關(guān)的特定基因表達(dá)[6]。將病理組學(xué)特征作為胃癌預(yù)后預(yù)測(cè)因子，與tnm分期相結(jié)合可提高預(yù)測(cè)效果[7]，此外，采用共識(shí)聚類算法、cibersort等算法可構(gòu)建腫瘤微環(huán)境特征來比較不同亞型之間胃癌的預(yù)后情況[8]。利用ai建立預(yù)測(cè)模型，以評(píng)估胃癌對(duì)藥物治療的反應(yīng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后情況[9]。huang等人開發(fā)了深度學(xué)習(xí)模型，通過分析h&e染色病理圖像來診斷gc并預(yù)測(cè)gc患者的生存結(jié)果[10]

2、然而，最近幾年，神經(jīng)系統(tǒng)的作用被認(rèn)為是癌癥發(fā)展和轉(zhuǎn)移的主要因素[11]。從致癌到惡性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)可以控制癌癥的發(fā)生，并有力地影響癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[12]。此外，神經(jīng)免疫相互作用在胃癌的發(fā)展中也發(fā)揮著重要作用。神經(jīng)與胃癌的相互作用是由許多神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)因子介導(dǎo)的，這些因子不僅可以由癌細(xì)胞和神經(jīng)末梢合成和釋放，還參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、血管生成等[13]。神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體是一類針對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)組織或抗原的自身免疫抗體，其可引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病，也可能參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。這一抗體推動(dòng)了副腫瘤性神經(jīng)綜合征(pns)的研究。然而，目前關(guān)于神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在胃癌預(yù)后預(yù)測(cè)中的作用尚未報(bào)道[14]。目前大多數(shù)胃癌患者在診斷時(shí)已處于晚期，此時(shí)他們的治療選擇有限且預(yù)后不良，臨床眾多預(yù)后指標(biāo)靈敏度不高，特異性較差。亟待發(fā)掘新的方法用于胃癌診斷、預(yù)后和指導(dǎo)治療。

3、ijms|free?full-text|gastric?cancer:epidemiology,risk?factors,classification,genomic?characteristics?and?treatment?strategies[internet].[cited?2024apr?15].available?from:https://www.mdpi.com/1422-0067/21/11/4012.

4、gastric?cancer-the?lancet[internet].[cited?2024?apr?15].availablefrom:https://www.thelancet.com/article/s0140-6736(20)31288-5/abstract.

5、shen?m,wang?h,wei?k,zhang?j,you?c.five?common?tumor?biomarkers?andcea?fordiagnosing?early?gastric?cancer:a?protocol?for?a?network?meta-analysisof?diagnostic?test?accuracy.medicine.2018；97:e0577.

6、yang?j,gong?y,lam?vk,shi?y,guan?y,zhang?y,et?al.deep?sequencing?ofcirculating?tumordnadetects?molecular?residual?disease?and?predictsrecurrence?in?gastric?cancer.cell?death?dis.2020；11:1–9.

7、chen?x-z,zhang?w-k,yang?k,wang?l-l,liu?j,wang?l,et?al.correlationbetween?serumca724?and?gastric?cancer:multiple?analyses?based?on?chinesepopulation.mol?biol?rep.2012；39:9031–9039.

8、yasui?w,oue?n,aung?pp,matsumura?s,shutoh?m,nakayama?h.molecular-pathologicalprognostic?factors?of?gastric?cancer:a?review.gastriccancer.2005；8:86–94.

9、chen?d,fu?m,chi?l,lin?l,cheng?j,xue?w,et?al.prognostic?and?predictivevalue?of?apathomics?signature?in?gastric?cancer.nat?commun.2022；13:6903.

10、zeng?d,li?m,zhou?r,zhang?j,sun?h,shi?m,et?al.tumor?microenvironmentcharacterization?in?gastric?cancer?identifies?prognostic?andimmunotherapeutically?relevant?genesignatures.cancer?immunol?res.2019；7:737–750.

11、jin?p,ji?x,kang?w,li?y,liu?h,ma?f,et?al.artificial?intelligence?ingastric?cancer:asystematic?review.j?cancer?res?clin?oncol.2020；146:2339–2350.

12、huang?b,tian?s,zhan?n,ma?j,huang?z,zhang?c,et?al.accurate?diagnosisand?prognosisprediction?of?gastric?cancer?using?deep?learning?on?digitalpathological?images:aretrospectivemulticentre?study.ebiomedicine[internet].2021[cited?2024?apr?15]；73.available?from:https://www.thelancet.com/journals/ebiom/article/piis2352-3964(21)00424-2/fulltext.

13、kuol?n,stojanovska?l,apostolopoulos?v,nurgali?k.role?of?the?nervoussystem?in?cancermetastasis.j?exp?clin?cancer?res.2018；37:5.

14、wang?h,zheng?q,lu?z,wang?l,ding?l,xia?l,et?al.role?of?the?nervoussystemin?cancers:a?review.cell?death?discov.2021；7:1–12.

15、wang?k,zhao?x,liu?j,zhang?r,li?j.nervous?system?and?gastriccancer.biochimica?et?biophysica?acta(bba)-reviews?on?cancer.2020；1873:188313.

16、aurello?p,berardi?g,tierno?sm,rampioni?vinciguerra?gl,socciarelli?f,laracca?gg,et?al.influence?of?perineural?invasion?in?predicting?overallsurvival?and?disease-free?survival?in?patients?with?locally?advanced?gastriccancer.the?american?journal?of?surgery.2017；213:748–753.

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明第一方面的目的，在于提供神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明第二方面的目的，在于提供一種標(biāo)志物組合。

3、本發(fā)明第三方面的目的，在于提供一種試劑盒。

4、本發(fā)明第四方面的目的，在于提供一種應(yīng)用。

5、本發(fā)明第五方面的目的，在于提供一種用于胃癌預(yù)后評(píng)估的模型的構(gòu)建方法。

6、本發(fā)明第六方面的目的，在于提供一種用于胃癌預(yù)后評(píng)估的系統(tǒng)。

7、為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述的目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

8、本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用。

9、所述產(chǎn)品用于胃癌的診斷、治療、預(yù)后評(píng)估。

10、優(yōu)選地，所述胃癌包括胃癌的全周期；進(jìn)一步優(yōu)選地，所述胃癌包括i-iv期胃癌；更進(jìn)一步優(yōu)選地，為ⅲ-iv期胃癌。

11、優(yōu)選地，所述神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體包括：胞內(nèi)抗原抗體，如amph、ma2、ri、yo、hu、cv2、gad等；神經(jīng)元表面抗原抗體，如nmdar、glyr、mglur、lgi1、caspr2、gabar、ampar等；副腫瘤綜合征相關(guān)抗體，如hu、yo、ri、cv2、ma2、amph、anna-3、tr(dner)、pca2、zic4、recoverin等；僵人綜合征相關(guān)抗體，如gad、amph、glyr；自身免疫性腦炎相關(guān)抗體，如nmdar、ampar1/2、gababr、lgi1、caspr2、dppx、iglon5、glyr、mglur1、mglur5、d2r；視神經(jīng)脊髓炎譜系病相關(guān)抗體，如nmo(aqp4)、mog、mbp；免疫介導(dǎo)的周圍神經(jīng)病相關(guān)抗體，如gm1、gm2、gm3、gd1a、gd1b、gt1b、gq1b、mag、硫酯；免疫介導(dǎo)的神經(jīng)肌肉接頭病相關(guān)抗體，如achr、musk、lrp4、titin、sox1、vgcc；免疫介導(dǎo)的肌炎相關(guān)抗體，如mi-2α、mi-2β、tif1γ、mda5、nxp2、sae1、ku、pm-scl100、pm-scl75、jo-1、srp、pl-7、pl-12、ej、oj、ro-52。

12、優(yōu)選地，所述神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體包括yo、sox1、ri、amph、pca2、ma2中的至少一種。

13、本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體包括但不限于上述列出的內(nèi)容。本發(fā)明是通過tba法檢測(cè)的廣譜神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體，并以tba陽(yáng)性(廣譜神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了roc曲線等相關(guān)分析，證明了廣譜神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在胃癌預(yù)后中的有效性、特異性、靈敏性，因此廣譜神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體能夠得到說明書支持。本發(fā)明進(jìn)一步列舉的yo、sox1、ri、amph、pca2、ma2屬于一種具體的優(yōu)選方案，并不構(gòu)成本發(fā)明的限制。

14、優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包括試劑、試劑盒、試紙、芯片、系統(tǒng)中的至少一種。

15、優(yōu)選地，所述試劑包含用于選自下組的一種或多種檢測(cè)方法的試劑：pcr、elisa、免疫印跡、化學(xué)發(fā)光、放射免疫法、液相芯片法、側(cè)向?qū)游?、電化學(xué)、流式細(xì)胞儀、免疫熒光。

16、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括間接免疫熒光法(indirect?immunofluorescence，iif)、基于細(xì)胞底物的免疫熒光法(cell?based?assay，cba)、基于組織底物的免疫熒光法(tissue?based?assay，tba)。

17、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括tba法。

18、優(yōu)選地，所述tba法的組織底物來源包括但不限于鼠腦、兔腦、猴腦。

19、優(yōu)選地，所述試劑包含對(duì)所述標(biāo)志物具有特異性的引物、探針、適配體、抗體中的至少一種。

20、優(yōu)選地，所述產(chǎn)品的受試樣品選自待測(cè)對(duì)象的體液、組織、細(xì)胞中的至少一種。

21、優(yōu)選地，所述體液包括血液、消化液中的至少一種。

22、優(yōu)選地所述組織包括胃活檢組織。

23、在本發(fā)明的第一個(gè)方面中，所述神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體是指，在神經(jīng)系統(tǒng)中抗自身組織、器官、細(xì)胞及其成分的抗體。

24、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，本發(fā)明通過tba法證明了神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在評(píng)估胃癌預(yù)后中的可行性。由于腦組織(嚙齒動(dòng)物或靈長(zhǎng)類動(dòng)物)中包含所有天然靶抗原，檢測(cè)樣本中的抗體會(huì)與腦組織切片進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。因此，tba可以保留原基質(zhì)全抗原譜的完整性，具有更好的評(píng)估效果。雖然本發(fā)明具體使用的是鼠腦tba法，但鑒于基因同源性并不代表其他組織來源的tba法不可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的效果。此外，也不代表iif、cba等其他免疫熒光法不可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的效果。

25、需要進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)的是：本發(fā)明的核心為神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在檢測(cè)、治療、預(yù)后評(píng)估胃癌的準(zhǔn)確性、靈敏性、特異性，至于如何檢測(cè)神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體的方法、手段不應(yīng)成為本發(fā)明的限制。基因水平的檢測(cè)或蛋白水平的檢測(cè)的方法均可以實(shí)現(xiàn)發(fā)明的預(yù)期效果。

26、具體的，在本發(fā)明的第一個(gè)方面中，神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體陽(yáng)性的患者具有更低的總生存率，其預(yù)后效果更差。

27、本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供一種標(biāo)志物組合，所述標(biāo)志物組合包括yo、sox1、ri、amph、pca2、和ma2。

28、本發(fā)明的第二個(gè)方面是基于本發(fā)明第一個(gè)方面的進(jìn)一步補(bǔ)充。在本發(fā)明第一個(gè)方面中，已經(jīng)基于tba的全抗原譜確認(rèn)了神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體的全抗體譜在診斷、治療、預(yù)后評(píng)估胃癌中的作用。本發(fā)明的第二個(gè)方面在第一個(gè)方面的基礎(chǔ)上，以一組特異性的抗體標(biāo)志物組合進(jìn)一步確認(rèn)了神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在胃癌的診斷、治療、預(yù)后評(píng)估中的效果。本發(fā)明收集了399例胃癌初診患者中，其中并非所有患者均進(jìn)行了全部神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體的檢測(cè)，為了得到足夠的可進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的樣本數(shù)據(jù)，本發(fā)明的第二個(gè)方面選擇了該6種神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體進(jìn)行生物信息學(xué)分析。但并不表只有這6種神經(jīng)自身性抗體能夠用于胃癌的診斷、治療、預(yù)后評(píng)估，其他神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體也能預(yù)期具有相似的診斷鑒定效果。在tba法已經(jīng)證明廣譜的神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體可以用于胃癌診斷、治療、預(yù)后評(píng)估的基礎(chǔ)上，具體的神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體種類不應(yīng)該成為本發(fā)明的限制。

29、本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供一種試劑盒，包含檢測(cè)本發(fā)明第二個(gè)方面的標(biāo)志物組合的試劑。

30、優(yōu)選地，所述試劑盒包含檢測(cè)所述標(biāo)志物組合中的標(biāo)志物的含量或豐度的試劑。

31、優(yōu)選地，所述試劑包含用于選自下組的一種或多種檢測(cè)方法的試劑：pcr、elisa、免疫印跡、化學(xué)發(fā)光、放射免疫法、液相芯片法、側(cè)向?qū)游觥㈦娀瘜W(xué)、流式細(xì)胞儀、免疫熒光。

32、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括間接免疫熒光法(indirect?immunofluorescence，iif)、基于細(xì)胞底物的免疫熒光法(cell?based?assay，cba)、基于組織底物的免疫熒光法(tissue?based?assay，tba)。

33、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括tba法。

34、優(yōu)選地，所述tba法的組織底物來源包括但不限于鼠腦、兔腦、猴腦、海馬。

35、優(yōu)選地，所述試劑包含對(duì)所述標(biāo)志物具有特異性的引物、探針、適配體、抗體中的至少一種。

36、優(yōu)選地，所述產(chǎn)品的受試樣品選自待測(cè)對(duì)象的體液、組織、細(xì)胞中的至少一種。

37、優(yōu)選地，所述體液包括血液、消化液中的至少一種。

38、優(yōu)選地所述組織包括胃活檢組織。

39、本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供本發(fā)明第一個(gè)方面應(yīng)用中的神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體、本發(fā)明第三個(gè)方面所述的試劑盒在a1)～a3)中的應(yīng)用：

40、a1)制備診斷胃癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

41、a2)制備治療胃癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

42、a3)制備胃癌預(yù)后評(píng)估的產(chǎn)品中的應(yīng)用；

43、優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包括試劑、試劑盒、試紙、芯片、系統(tǒng)中的至少一種。

44、優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包含檢測(cè)所述標(biāo)志物組合中的標(biāo)志物的含量或豐度的試劑。

45、優(yōu)選地，所述試劑包含用于選自下組的一種或多種檢測(cè)方法的試劑：pcr、elisa、免疫印跡、化學(xué)發(fā)光、放射免疫法、液相芯片法、側(cè)向?qū)游?、電化學(xué)、流式細(xì)胞儀、免疫熒光。

46、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括間接免疫熒光法(indirect?immunofluorescence，iif)、基于細(xì)胞底物的免疫熒光法(cell?based?assay，cba)、基于組織底物的免疫熒光法(tissue?based?assay，tba)。

47、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括tba法。

48、優(yōu)選地，所述tba法的組織底物來源包括但不限于鼠腦、兔腦、猴腦、海馬。

49、優(yōu)選地，所述試劑包含對(duì)所述標(biāo)志物具有特異性的引物、探針、適配體、抗體中的至少一種。

50、優(yōu)選地，所述產(chǎn)品的受試樣品選自待測(cè)對(duì)象的體液、組織、細(xì)胞中的至少一種。

51、優(yōu)選地，所述體液包括血液、消化液中的至少一種。

52、優(yōu)選地所述組織包括胃活檢組織。

53、具體的，在本發(fā)明的第四個(gè)方面中，神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體陽(yáng)性的患者具有更低的總生存率，其預(yù)后效果更差。具有yo、sox1、ri、amph、pca2、和ma2陽(yáng)性的患者具有更低的總生存率，其預(yù)后效果更差。

54、本發(fā)明的第五個(gè)方面，提供一種用于胃癌預(yù)后評(píng)估的模型的構(gòu)建方法，其特征在于：

55、所述方法包括使用b1)～b2)進(jìn)行模型構(gòu)建；

56、b1)本發(fā)明第一個(gè)方面所述應(yīng)用中的神經(jīng)自身免疫抗體；

57、b2)本發(fā)明第二個(gè)方面所述的標(biāo)志物組合。

58、優(yōu)選地，所述模型構(gòu)建的算法包括回歸分析、線性判別分析、支持向量機(jī)、貝葉斯網(wǎng)絡(luò)、決策樹中的至少一種。

59、本發(fā)明的第六個(gè)方面，提供一種用于胃癌預(yù)后評(píng)估的系統(tǒng)，其特征在于

60、所述系統(tǒng)中包含根據(jù)對(duì)b1)～b2)的檢測(cè)結(jié)果判斷胃癌預(yù)后情況的計(jì)算裝置；

61、b1)本發(fā)明第一個(gè)方面所述應(yīng)用中的神經(jīng)自身免疫抗體；

62、b2)本發(fā)明第二個(gè)方面所述的標(biāo)志物組合。

63、優(yōu)選地，所述檢測(cè)結(jié)果是針對(duì)來自待測(cè)對(duì)象的受試樣本進(jìn)行檢測(cè)得到。

64、優(yōu)選地，所述受試樣品選自待測(cè)對(duì)象的體液、組織、細(xì)胞中的至少一種。

65、優(yōu)選地，所述體液包括血液、消化液中的至少一種。

66、優(yōu)選地所述組織包括胃活檢組織。

67、優(yōu)選地，所述系統(tǒng)還包括檢測(cè)裝置。

68、優(yōu)選地，所述檢測(cè)裝置包括試劑、試劑盒、試紙、芯片、系統(tǒng)中的至少一種。

69、優(yōu)選地，所述檢測(cè)裝置包含檢測(cè)所述標(biāo)志物組合中的標(biāo)志物的含量或豐度的試劑。

70、優(yōu)選地，所述試劑包含用于選自下組的一種或多種檢測(cè)方法的試劑：pcr、elisa、免疫印跡、化學(xué)發(fā)光、放射免疫法、液相芯片法、側(cè)向?qū)游?、電化學(xué)、流式細(xì)胞儀、免疫熒光。

71、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括間接免疫熒光法(indirect?immunofluorescence，iif)、基于細(xì)胞底物的免疫熒光法(cell?based?assay，cba)、基于組織底物的免疫熒光法(tissue?based?assay，tba)。

72、優(yōu)選地，所述免疫熒光包括tba法。

73、優(yōu)選地，所述tba法的組織底物來源包括但不限于鼠腦、兔腦、猴腦、海馬。

74、優(yōu)選地，所述試劑包含對(duì)所述標(biāo)志物具有特異性的引物、探針、適配體、抗體中的至少一種。

75、優(yōu)選地，所述檢測(cè)裝置包括本發(fā)明第三個(gè)方面所述的試劑盒。

76、優(yōu)選地，所述系統(tǒng)還包括以下任意一種或多種：

77、1)檢測(cè)結(jié)果收集裝置，也可稱為檢測(cè)結(jié)果輸入裝置，具體地可以是鼠標(biāo)、鍵盤、觸摸屏顯示器、一個(gè)或多個(gè)按鈕、一個(gè)或多個(gè)開關(guān)、一個(gè)或多個(gè)觸發(fā)器等等中的一個(gè)或多個(gè)；

78、2)診斷結(jié)果輸出裝置，也可稱為診斷結(jié)果顯示裝置，具體地可以是液晶顯示器(lcd)、發(fā)光二極管(led)顯示器、等離子體顯示器、投影顯示器、觸摸屏顯示器等等中的一個(gè)或多個(gè)；

79、3)診斷結(jié)果發(fā)送裝置，所述結(jié)果發(fā)送裝置可以將受試者的是強(qiáng)或弱風(fēng)險(xiǎn)人群的分辨結(jié)果發(fā)送到患者或醫(yī)護(hù)人員可以查閱的信息通信終端裝置。

80、本發(fā)明的有益效果是：

81、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在胃癌的診斷、檢測(cè)、預(yù)后評(píng)估中具有良好的特異性和敏感性，可用于制備診斷、檢測(cè)、預(yù)后評(píng)估胃癌的產(chǎn)品。以鼠腦tba法檢測(cè)廣譜神經(jīng)系統(tǒng)自身抗體在胃癌預(yù)后中的效果，其tba陰性的患者具有更高的總生存率，胃癌預(yù)后效果更好，其roc曲線下面積為0.784，敏感性和特性性分別為0.684和0.765，顯示出其作為標(biāo)志物的良好特性。進(jìn)一步的，本發(fā)明發(fā)明以抗體yo、sox1、ri、amph、pca2、ma2為標(biāo)志物組合進(jìn)行胃癌預(yù)后效果評(píng)估，其roc虛線下面積為0.855，敏感性和特性性分別為0.829和0.762，具有更好的預(yù)測(cè)性能。