本發(fā)明涉及生豬飼養(yǎng)，特別涉及sal1蛋白作為母豬早期妊娠診斷標(biāo)志物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、母豬配種后，及時且準(zhǔn)確的妊娠診斷是提高母豬繁殖效率和養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)效益的重要技術(shù)措施，盡早地進(jìn)行妊娠確診，能夠減少未妊娠母豬的空懷期或非繁殖天數(shù)，同時有利于對繁殖障礙母豬及早治療處理，及時淘汰屢配不孕的母豬；確定妊娠的母豬應(yīng)加強(qiáng)各方面的飼養(yǎng)管理，提高孕期管理精細(xì)化程度，保持母豬和胎兒的健康，避免“無效飼養(yǎng)”。因此，對配種后的母豬進(jìn)行早期妊娠診斷，可以減少母豬的空懷期、降低非生產(chǎn)天數(shù)、縮短其產(chǎn)仔間隔和降低飼養(yǎng)成本，進(jìn)而提高母豬繁殖率和養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)效益。

2、常見的母豬妊娠診斷方法有：外部觀察法、直腸觸診法、激素診斷法和超聲波診斷法，這些診斷方法有它們各自的優(yōu)勢與不足。外部觀察法是指通過觀察母豬是否出現(xiàn)返情來判斷其妊娠與否，若母豬配種后，經(jīng)過一個發(fā)情周期不再發(fā)情，則初步斷定已經(jīng)妊娠，該方法根據(jù)母豬發(fā)情規(guī)律來判斷，其判斷時限長，且部分品種豬發(fā)情征狀不明顯，易造成誤判。直腸觸診法是指經(jīng)直腸觸摸子宮、子宮頸以及子宮中動脈，此法對技術(shù)人員要求比較高，難度大，而且容易造成母豬的直腸傷害、感染，且在母豬配種早期準(zhǔn)確性不高，在生產(chǎn)中應(yīng)用逐漸減少。激素診斷法使用外源雌激素激素注射配種21天左右的母豬，如果母豬空懷，則在2-3天內(nèi)表現(xiàn)發(fā)情；如注射后2-3天無發(fā)情表現(xiàn)，說明已經(jīng)妊娠；此方法必須結(jié)合公豬試情和外觀表現(xiàn)來判斷是否妊娠，且注射激素對配種后的母豬是極大的應(yīng)激，容易造成實(shí)際已經(jīng)妊娠的母豬子宮收縮，使受精卵不易著床，且準(zhǔn)確性不高。超聲診斷法是通過高頻聲波探查母豬的子宮，并將其回波進(jìn)行放大，用此法來進(jìn)行母豬早期妊娠診斷一般在妊娠第28天以上才有較高的檢出率。因此，目前普遍采用的早期妊娠診斷方法存在癥狀診斷不明確、易錯失母豬最佳配種時期等問題，急需尋找一種更加經(jīng)濟(jì)、簡單且準(zhǔn)確的妊娠早期診斷方法。

3、隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，基于生物標(biāo)志物的母豬妊娠診斷技術(shù)得到了越來越多的推廣應(yīng)用。蛋白質(zhì)作為基因表達(dá)的最終產(chǎn)物，蛋白標(biāo)志物的水平變化通常反映了機(jī)體生理或病理狀態(tài)的改變。因此，利用分子診斷技術(shù)在早期敏感、特異地檢測妊娠母豬中的特定蛋白標(biāo)志物，有利于實(shí)現(xiàn)母豬妊娠的快速診斷。然而，目前關(guān)于母豬早期妊娠蛋白的研究較少，缺乏準(zhǔn)確、可靠的母豬早期妊娠診斷蛋白標(biāo)志物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題，本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)sal1蛋白表達(dá)水平與母豬是否妊娠高度相關(guān)，適于作為母豬早期妊娠的蛋白標(biāo)志物，通過檢測配種后母豬陰道分泌物中sal1蛋白含量可實(shí)現(xiàn)在早期快速判斷母豬妊娠狀態(tài)，具有靈敏度高、特異性好、準(zhǔn)確率高、誤診率低、檢測迅速、對母體和胎兒安全無害等優(yōu)點(diǎn)。

2、本發(fā)明第一方面提供了sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，所述sal1蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

3、本發(fā)明第二方面提供了檢測sal1蛋白表達(dá)水平的試劑在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，所述sal1蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

4、進(jìn)一步地，上述所述的試劑或試劑盒檢測所述母豬陰道分泌物中的sal1蛋白。

5、更進(jìn)一步地，上述所述的陰道分泌物的采集時間為所述母豬配種后第15天。

6、更進(jìn)一步地，上述所述的陰道分泌物的制備方法包括：將采集的陰道分泌物加入到2ml?pbs溶液中，靜置30min后渦旋2min，之后1000g離心15min，取上清作為檢測對象。

7、進(jìn)一步地，上述所述的母豬為長白豬、約克郡豬或其雜交后代。

8、進(jìn)一步地，上述所述的檢測所述sal1蛋白表達(dá)水平的試劑為特異性結(jié)合sal1蛋白的抗體。

9、進(jìn)一步地，上述所述的試劑或試劑盒為酶聯(lián)免疫吸附試劑或試劑盒。

10、本發(fā)明第三方面提供了一種用于非診斷目的的母豬早期妊娠診斷方法，包括以下步驟：

11、采集配種后的待檢測母豬陰道分泌物，檢測所述陰道分泌物中sal1蛋白的含量，根據(jù)所述sal1蛋白的含量判斷所述待檢測母豬是否妊娠；

12、當(dāng)檢測到所述sal1蛋白相比于未妊娠母豬高表達(dá)，判定所述待檢測母豬處于妊娠狀態(tài)，當(dāng)檢測到所述sal1蛋白相比于未妊娠母豬低表達(dá)，判定所述待檢測母豬處于非妊娠狀態(tài)。

13、本發(fā)明相比于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的有益效果：

14、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)sal1蛋白表達(dá)水平與母豬是否妊娠高度相關(guān)，適于作為母豬早期妊娠的蛋白標(biāo)志物用于母豬早期妊娠診斷，其在妊娠組和非妊娠組母豬陰道分泌物中表達(dá)水平差異顯著且在妊娠組中顯著低表達(dá)，通過檢測配種后母豬陰道分泌物中sal1蛋白含量可實(shí)現(xiàn)在早期快速判斷母豬妊娠狀態(tài)，具有靈敏度高、特異性好、準(zhǔn)確率高、誤診率低、檢測迅速、對母體和胎兒安全無害等優(yōu)點(diǎn)，為母豬早期妊娠診斷提供了新的方向和途徑，對提高生豬養(yǎng)殖企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

技術(shù)特征：

1.sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述sal1蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑或試劑盒檢測所述母豬陰道分泌物中的sal1蛋白。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述陰道分泌物的采集時間為所述母豬配種后第15天。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述陰道分泌物的制備方法包括：

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述母豬為長白豬、約克郡豬或其雜交后代。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sal1蛋白作為診斷標(biāo)志物在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑或試劑盒為酶聯(lián)免疫吸附試劑或試劑盒。

8.檢測sal1蛋白表達(dá)水平的試劑在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述sal1蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測sal1蛋白表達(dá)水平的試劑在制備母豬早期妊娠診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，檢測所述sal1蛋白表達(dá)水平的試劑為特異性結(jié)合sal1蛋白的抗體。

10.一種用于非診斷目的的母豬早期妊娠診斷方法，其特征在于，包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生豬飼養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及SAL1蛋白作為母豬早期妊娠診斷標(biāo)志物的應(yīng)用，所述SAL1蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)SAL1蛋白表達(dá)水平與母豬是否妊娠高度相關(guān)，適于作為母豬早期妊娠的蛋白標(biāo)志物，通過檢測配種后母豬陰道分泌物中SAL1蛋白含量可實(shí)現(xiàn)在早期快速判斷母豬妊娠狀態(tài)，具有靈敏度高、特異性好、準(zhǔn)確率高、誤診率低、檢測迅速、對母體和胎兒安全無害等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)研發(fā)人員：黃濤,艾子凱,董靜陽,何仁偉,符彬彬,何凡,祁夢凡,閆坤,馮赟,任玉軍,楊法輝,李建幸,趙海超,李亞威
受保護(hù)的技術(shù)使用者：石河子大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23