本發(fā)明屬于抗氧化活性產(chǎn)品，尤其是涉及一種大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法。

背景技術(shù)：

1、目前，抗氧化酶能對抗細胞內(nèi)活性氧引起的氧化應(yīng)激，并維持細胞內(nèi)氧化劑和抗氧化劑的良好平衡。一旦活性氧的產(chǎn)生超過降解，就會出現(xiàn)活性氧的積累，從而導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，其分解產(chǎn)物包括丙二醛(s?ies,1991；khan?and?khan,2021)。隨著丙二醛濃度的增加，其對機體的損害會加重。

2、研究表明，超氧化物歧化酶等抗氧化酶可能受t?l?r、dorsa?l、imd和re?l?i?sh等nf-κb信號通路關(guān)鍵基因的調(diào)控(yang?et?a?l.,2023)。t?l?r和imd信號通路在調(diào)節(jié)無脊椎動物抵御細菌和病毒感染入侵機體的反應(yīng)中起到不可或缺的作用(li?and?xiang,2013a,2013b)，同時也是激活一氧化氮合成酶活性的上游通路(lv?et?a?l.,2021)。上述指標是衡量機體抗氧化和免疫水平高低的重要指示劑。此外，肝胰腺作為一個重要的解毒代謝器官，其結(jié)構(gòu)的變化可以作為衡量甲殼動物生理機能是否正常的一項重要指標(鄭善堅，2007)；然而現(xiàn)有技術(shù)中低魚粉飼料會顯著抑制水產(chǎn)動物的抗氧化能力和免疫狀態(tài)，不利于水產(chǎn)動物的生長。

3、為此，本發(fā)明提供一種大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法，具有著提高抗氧化酶活性和其基因表達量的優(yōu)點。

2、本發(fā)明的目的可通過下列技術(shù)方案來實現(xiàn)：

3、大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法的測定工藝，包括以下步驟

4、(1)第一步、喂養(yǎng)：取適量的水產(chǎn)動物分六組養(yǎng)殖桶分別構(gòu)成參照組、對比例、實施例1、實施例2、實施例3以及實施例4，在實施例1、實施例2、實施例3以及實施例4中添加飼料中不同含量的含有生長活性肽喂養(yǎng)水產(chǎn)動物；

5、(2)第二步、樣品采集及處理：養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每組試驗均經(jīng)過禁食24h，采集完水產(chǎn)動物的血淋巴、肝胰腺等樣品的同時，每個養(yǎng)殖桶隨機采集水產(chǎn)動物的肝胰腺組織用4％中性甲醛固定，每組四管樣品，肝胰腺樣本保存在-20℃冰箱之中，備測；

6、(3)第三步、抗氧化酶和免疫指標測定：首先測定10％肝胰腺勻漿中的蛋白質(zhì)含量；然后使用各種試劑盒分別檢測肝胰腺中的抗氧化酶活性和免疫指標，其中包括超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、一氧化氮和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶；

7、基因表達測定：采用實時熒光定量分析來測定水產(chǎn)動物的肝胰腺抗氧化與免疫相關(guān)基因的表達；

8、肝胰臟組織結(jié)構(gòu)的觀察：包括水產(chǎn)動物的肝胰腺的組織取出固定、梯度脫水、脫脂透明、浸蠟、包埋、展片、染色、封片、光學顯微鏡下觀察、拍片；

9、(4)第四步、數(shù)據(jù)的處理：應(yīng)用exce?l軟件記錄數(shù)據(jù)，并計算每個養(yǎng)殖桶的平均值用于差異顯著性分析；數(shù)據(jù)利用spss20.0軟件進行析；先用萊文檢驗進行方差齊次性檢驗，用單因素方差分析比較不同飼料的影響；不同飼料的影響采用duncan’s多重比較，其中p<0.05為差異顯著；最后將分析數(shù)據(jù)以平均值±標準誤的方式呈現(xiàn)。

10、作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，生長活性肽是以大豆為發(fā)酵基底物而獲得的淺棕色膏狀物質(zhì)。

11、作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，在步驟(3)中采用的光學顯微鏡為400×倍光學顯微鏡。

12、如上所述，本發(fā)明涉及大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法，具有以下有益效果：

13、本發(fā)明申請的通過在魚粉飼料中添加不同水平的大豆生物活性肽，通過設(shè)置正常魚粉參照組，能夠說明大豆生物活性肽可以顯著降低水產(chǎn)動物的肝胰腺中的丙二醛含量，而其具有著提高抗氧化酶活性和其基因表達量的優(yōu)點，有助于水產(chǎn)動物的生長。

14、下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明作進一步的說明。

技術(shù)特征：

1.大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法的測定工藝，其特征在于，包括以下步驟

2.如權(quán)利要求1所述大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法的測定工藝，其特征在于：生長活性肽是以大豆為發(fā)酵基底物而獲得的淺棕色膏狀物質(zhì)。

3.如權(quán)利要求1或2所述大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法的測定工藝，其特征在于：在步驟(3)中采用的光學顯微鏡為400×倍光學顯微鏡。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于抗氧化活性產(chǎn)品技術(shù)領(lǐng)域，現(xiàn)提供一種大豆生物活性肽抗氧化活性的測定方法；包括以下步驟(1)第一步、喂養(yǎng)；(2)第二步、樣品采集及處理；(3)第三步、抗氧化酶和免疫指標測定：超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、一氧化氮和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶；基因表達測定：采用實時熒光定量分析來測定水產(chǎn)動物的肝胰腺抗氧化與免疫相關(guān)基因的表達；肝胰臟組織結(jié)構(gòu)的觀察：包括水產(chǎn)動物的肝胰腺的組織取出固定、梯度脫水、脫脂透明、浸蠟、包埋、展片、染色、封片、光學顯微鏡下觀察、拍片；(4)第四步、數(shù)據(jù)的處理。與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有著提高抗氧化酶活性和其基因表達量的優(yōu)點，有助于水產(chǎn)動物的生長。

技術(shù)研發(fā)人員：胡賀,劉茂
受保護的技術(shù)使用者：江蘇福潤德科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9