本發(fā)明涉及藥物化學(xué)成分分析檢測(cè)，具體為一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、n-亞硝胺是一類(lèi)含亞硝基的基因毒性物質(zhì)，化學(xué)通式為r1(r2)n-n＝o。在已知的亞硝胺中，n-亞硝基二甲胺(ndma)和n-亞硝基二乙胺(ndea)會(huì)導(dǎo)致肝癌和鼻竇癌等疾病，已被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)定為2a類(lèi)致癌物。美國(guó)環(huán)境保護(hù)署綜合風(fēng)險(xiǎn)信息系統(tǒng)級(jí)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將ndma、ndea、n-亞硝基甲基乙胺(nmea)、n-亞硝基吡咯烷(npyr)、n-亞硝基嗎啉(nmor)、n-亞硝基哌啶(npip)、n-亞硝基正丙胺(ndpa)、n-亞硝基二苯胺(ndpha)和n-亞硝基正丁胺(ndba)評(píng)定為可能得人體致癌物。藥品中亞硝胺化合物雜質(zhì)污染引起了藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)和公眾的廣泛關(guān)注，如纈沙坦原料、鹽酸二甲雙胍制劑等檢測(cè)出了ndma雜質(zhì)。

2、目前，藥品中亞硝胺雜質(zhì)的定量分析方法主要有g(shù)c-ms法、gc-ms/ms法和lc-ms/ms法，然而目前的這些方法存在取樣量多，使用試劑多，精度差等問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、(一)解決的技術(shù)問(wèn)題

2、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，解決了上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

3、(二)技術(shù)方案

4、為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

5、根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

6、(1)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備：吸取亞硝胺化合物混標(biāo)溶液于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配置成1.00μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；

7、(2)標(biāo)準(zhǔn)系列儲(chǔ)備液的制備：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于容量瓶中，加入不同體積的甲醇，定容成具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)系列儲(chǔ)備液；

8、(3)將標(biāo)準(zhǔn)系列儲(chǔ)備液分別注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測(cè)，獲取相應(yīng)的亞硝胺化合物的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量色譜圖，以亞硝胺化合物的定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)系列儲(chǔ)備液中亞硝胺化合物的濃度為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

9、(4)樣本提?。悍Q取感冒藥劑并提取，將提取液進(jìn)行渦旋、超聲、震蕩、離心并過(guò)濾，得到凈化樣本；

10、(5)將凈化樣本注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中獲取凈化樣本的質(zhì)量色譜圖，若凈化樣本的質(zhì)量色譜圖中存在與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量色譜圖對(duì)應(yīng)的色譜峰，則帶入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中，獲取凈化樣本中的亞硝胺化合物的種類(lèi)及含量。

11、優(yōu)選的，步驟(1)中，所述亞硝胺化合物包括n-亞硝基二甲胺、n-亞硝基甲基乙基胺、n-亞硝基二乙胺、n-亞硝基二丙胺、n-亞硝基二丁胺、n-甲基-n-亞硝基苯胺、n-亞硝基-n-乙基苯胺、n-亞硝基哌啶、n-亞硝基吡咯烷、n-亞硝基嗎啉、n-亞硝基二苯胺、n-亞硝基二芐基胺。

12、優(yōu)選的，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的色譜柱為db-waxetr毛細(xì)管色譜柱。

13、優(yōu)選的，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的升溫程序?yàn)椋?0℃進(jìn)樣保持1min，以10℃/min升溫至160℃保持1min，以40℃/min升溫至250℃保持7.25min。

14、優(yōu)選的，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的載氣為氦氣，采用恒流模式，載氣流量為1.2ml/min。

15、優(yōu)選的，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口溫度為250℃，傳輸線溫度為260℃，進(jìn)樣體積為1μl，采用不分流進(jìn)樣模式。

16、優(yōu)選的，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的質(zhì)譜條件為：離子源為ei源，離子源溫度為230℃，四級(jí)桿溫度為150℃，em電壓為70ev，溶劑延遲為5min，碰撞氣為氮?dú)猓瑨呙枘Ｊ綖閐mrm模式。

17、優(yōu)選的，所述溶劑選自二氯甲烷。

18、優(yōu)選的，所述標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如下：

19、ndma：y＝11349x-299，相關(guān)系數(shù)為0.999；

20、nmea：y＝10050x+154，相關(guān)系數(shù)為0.999；

21、ndea：y＝5890x+22.3，相關(guān)系數(shù)為0.998；

22、ndpa：y＝7372x+107，相關(guān)系數(shù)為0.999；

23、ndba：y＝6280x+436，相關(guān)系數(shù)為0.999；

24、nmpha：y＝83099x+5291，相關(guān)系數(shù)為0.999；

25、nepha：y＝27340x+2033，相關(guān)系數(shù)為0.999；

26、npip：y＝8437x+339，相關(guān)系數(shù)為0.999；

27、npyr：y＝4269x+93.8，相關(guān)系數(shù)為0.999；

28、nmor：y＝7167x+283，相關(guān)系數(shù)為0.999；

29、ndpha：y＝33230x+1905，相關(guān)系數(shù)為0.999；

30、ndbza：y＝3778x+428，相關(guān)系數(shù)為0.999。

31、優(yōu)選的，所述亞硝胺化合物的檢測(cè)限為0.3～0.6μg/kg，所述亞硝胺化合物的定量限為1.0～2.0μg/kg。

32、(三)有益效果

33、本發(fā)明提供了一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法。具備以下有益效果：

34、(1)本方案提供的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，通過(guò)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)感冒藥中的亞硝胺類(lèi)化合物進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)精度高，速度快，結(jié)果準(zhǔn)確，有效降低假陽(yáng)性。

35、(2)本方案提供的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，取樣量少，有機(jī)試劑使用種類(lèi)少，前處理簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性高。

36、(3)本方案提供的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，在0.2～4.0ng·ml-1范圍內(nèi)，可對(duì)12中亞硝胺類(lèi)化合物進(jìn)行定量測(cè)定，12中亞硝胺類(lèi)化合物的離子對(duì)峰面積與濃度線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，本申請(qǐng)的檢測(cè)方法檢出限為0.3～0.6μg/kg，定量限為1.0～2.0μg/kg，對(duì)感冒藥進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，平均加標(biāo)回收率為81～102％，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7～4.9％(n＝6)。

技術(shù)特征：

1.一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟(1)中，所述亞硝胺化合物包括n-亞硝基二甲胺、n-亞硝基甲基乙基胺、n-亞硝基二乙胺、n-亞硝基二丙胺、n-亞硝基二丁胺、n-甲基-n-亞硝基苯胺、n-亞硝基-n-乙基苯胺、n-亞硝基哌啶、n-亞硝基吡咯烷、n-亞硝基嗎啉、n-亞硝基二苯胺、n-亞硝基二芐基胺。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的色譜柱為db-waxetr毛細(xì)管色譜柱。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的升溫程序?yàn)椋?0℃進(jìn)樣保持1min，以10℃/min升溫至160℃保持1min，以40℃/min升溫至250℃保持7.25min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的載氣為氦氣，采用恒流模式，載氣流量為1.2ml/min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口溫度為250℃，傳輸線溫度為260℃，進(jìn)樣體積為1μl，采用不分流進(jìn)樣模式。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的質(zhì)譜條件為：離子源為ei源，離子源溫度為230℃，四級(jí)桿溫度為150℃，em電壓為70ev，溶劑延遲為5min，碰撞氣為氮?dú)?，掃描模式為dmrm模式。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述溶劑選自二氯甲烷。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如下：

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法，其特征在于：所述亞硝胺化合物的檢測(cè)限為0.3～0.6μg/kg，所述亞硝胺化合物的定量限為1.0～2.0μg/kg。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種基于氣相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定感冒藥中亞硝胺類(lèi)化合物的檢測(cè)方法。檢測(cè)方法包括以下步驟：(1)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備；(2)標(biāo)準(zhǔn)系列儲(chǔ)備液的制備；(3)將標(biāo)準(zhǔn)系列儲(chǔ)備液注入氣相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測(cè)，獲取相應(yīng)的亞硝胺化合物的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量色譜圖，以亞硝胺化合物的定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)系列儲(chǔ)備液中亞硝胺化合物的濃度為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；(4)樣本提取；(5)將凈化樣本注入氣相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用儀中獲取凈化樣本質(zhì)量色譜圖，若凈化樣本的質(zhì)量色譜圖中存在與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量色譜圖對(duì)應(yīng)的色譜峰，帶入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中，獲取凈化樣本中的亞硝胺化合物的種類(lèi)及含量。本發(fā)明的檢測(cè)方法精度高，速度快，結(jié)果準(zhǔn)確。

技術(shù)研發(fā)人員：吳紅苗,杜賽,高何剛
受保護(hù)的技術(shù)使用者：紹興市疾病預(yù)防控制中心
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2