本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，具體涉及一種血漿中交沙霉素的濃度的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、交沙霉素是單一組分的14碳大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，化學(xué)式為c42h69no15，其藥理特點(diǎn)和臨床應(yīng)用與麥迪霉素、螺旋霉素相仿，適用于化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎，敏感菌所致的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎及口腔膿腫，肺炎支原體所致的肺炎，敏感細(xì)菌引起的皮膚軟組織感染，也可用于對(duì)青霉素、紅霉素耐藥的葡萄球菌的感染。主要是與細(xì)菌50s核糖體亞基結(jié)合，通過阻斷轉(zhuǎn)肽作用和mrna移位而抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，從而起抗菌作用。對(duì)腦膜炎球菌、百日咳桿菌、消化球菌、消化鏈球菌、丙酸桿菌、真桿菌等具有良好抗菌作用。交沙霉素的當(dāng)血藥濃度＞5.0mg/l時(shí)，毒副作用增強(qiáng)，可引起惡心、嘔吐、食欲不振、腹脹、腹瀉等胃腸道反應(yīng)。由于vcmc治療窗較窄，體內(nèi)代謝過程存在較大的個(gè)體差異，所以對(duì)其血藥濃度的監(jiān)測(cè)是調(diào)整劑量、減少不良反應(yīng)的重要參考，在臨床用藥中具有重大意義。

2、現(xiàn)有技術(shù)中，微生物培養(yǎng)操作麻煩，血樣用量大，前處理復(fù)雜，整體檢測(cè)時(shí)間較長，準(zhǔn)確性以及重現(xiàn)性相對(duì)較差，定量下限較高。如何解決上述技術(shù)問題，提高血液中交沙霉素的檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性，方便操作，同時(shí)降低檢測(cè)樣品用量和分析時(shí)間成為本領(lǐng)域技術(shù)人員急需解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題和不足，本發(fā)明提供一種血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，通過使用蛋白沉淀法對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行前處理，采用同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，最終提高檢測(cè)的穩(wěn)定性和靈敏度，操作簡(jiǎn)單方便，降低檢測(cè)樣品用量和分析時(shí)間。

2、具體地，本發(fā)明提供一種血漿中交沙霉素濃度方法，所述制備方法包括以下步驟：

3、稱取交沙霉素溶入第一溶劑配制待測(cè)物儲(chǔ)備液；

4、稱取交沙霉素-13c-d3溶入所述第一溶劑配制內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；

5、使用第二溶劑，將所述待測(cè)物儲(chǔ)備液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液和質(zhì)控工作液；

6、使用第二溶劑，將所述內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液稀釋成內(nèi)標(biāo)工作液；

7、使用空白血漿加入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液稀釋得到標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品，使用空白血漿加入所述質(zhì)控工作液稀釋得到質(zhì)控樣品；所述空白血漿中加有抗凝劑；

8、采用蛋白沉淀法對(duì)血漿樣品(所述標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和所述質(zhì)控樣品)進(jìn)行前處理，加沉淀劑進(jìn)行沉淀、離心后，取上清液進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)分析。

9、可選地，所述第一溶劑為二甲亞砜；

10、所述第二溶劑為50％的甲醇水溶液。

11、可選地，所述待測(cè)物儲(chǔ)備液的濃度為1.00mg/ml；

12、所述內(nèi)標(biāo)工作液的濃度為1.00ng/ml；

13、所述標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液的濃度范圍為1.00～500ng/ml；

14、所述質(zhì)控工作液的濃度范圍為3.0～400ng/ml。

15、可選地，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的濃度范圍為50.0～25000pg/ml；

16、所述質(zhì)控樣品的濃度范圍為150.0～20000pg/ml。

17、可選地，所述沉淀劑為純甲醇。

18、可選地，液相條件為a相是0.1％甲酸水溶液，b相為純甲醇，色譜柱為waters?c18色譜柱，進(jìn)樣量5ul，進(jìn)行梯度洗脫。

19、可選地，所述梯度洗脫條件為：

20、

21、可選地，質(zhì)譜條件為：

22、檢測(cè)離子對(duì)：交沙霉素：828.3/174.1；交沙霉素-13c-d3：832.5/178.2。

23、可選地，單針檢測(cè)時(shí)長為2～5分鐘。

24、在本發(fā)明中，采用蛋白沉淀法對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行前處理，之后用同位素內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行待測(cè)樣品中交沙霉素的定量測(cè)量。不僅操作簡(jiǎn)單，血漿使用量少，而且檢測(cè)結(jié)果誤差小，分析結(jié)果具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性和可重現(xiàn)性。從而提高了血漿中交沙霉素檢測(cè)的靈敏度和穩(wěn)定性。

25、根據(jù)下文結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施例的詳細(xì)描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)更加明了本發(fā)明的上述以及其他目的、優(yōu)點(diǎn)和特征。

技術(shù)特征：

1.一種血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，所述沉淀劑為純甲醇。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，液相條件為a相是0.1％甲酸水溶液，b相為純甲醇，色譜柱為waters?c18色譜柱，進(jìn)樣量5ul，進(jìn)行梯度洗脫。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，所述梯度洗脫條件為：

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，質(zhì)譜條件為：

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血漿中交沙霉素濃度的檢測(cè)方法，其特征在于，

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種血漿中交沙霉素的濃度的檢測(cè)方法。采用蛋白沉淀法處理待測(cè)樣品，操作簡(jiǎn)便，血漿用量少，滿足靈敏度檢測(cè)的需求。采用同位素內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)，減少儀器、環(huán)境等因素對(duì)分析結(jié)果的影響，從而減小實(shí)驗(yàn)誤差，增加分析結(jié)果的穩(wěn)定性。

技術(shù)研發(fā)人員：王圓輝,吳世文,郭丹丹,桑瑛瑛
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河南康貝欣生物醫(yī)藥科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9