本技術(shù)屬于體外診斷領(lǐng)域，具體涉及一種樣本處理液和肌鈣蛋白復(fù)合物檢測試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、肌鈣蛋白復(fù)合物由肌鈣蛋白t（tnt）、肌鈣蛋白i（tni）和肌鈣蛋白c（tnc）三種亞基組成，是肌肉組織收縮的調(diào)節(jié)蛋白。人體中已發(fā)現(xiàn)三種不同的組織特異性肌鈣蛋白i亞型，分別是心肌型、慢速骨骼肌型和快速骨骼肌型。其中，心肌型肌鈣蛋白i（ctni）和心肌肌鈣蛋白t（ctnt）特異性地在心肌細(xì)胞中表達(dá)。正常生理狀態(tài)下，少量ctn（2%~8%）在細(xì)胞質(zhì)中以游離形式存在，具有可溶性；大部分以結(jié)構(gòu)蛋白形式固定于心肌肌纖維上，不具有可溶性。

2、在心肌細(xì)胞損傷時(shí)，心肌肌鈣蛋白從心肌纖維上降解下來，被釋放入血，主要以游離ctni、ctnt、ctni-ctnc復(fù)合物以及全分子量和低分子量ctnt-ctni-ctnc三聚體的形式存在于外周血中，血清中ctn含量升高反映了心肌細(xì)胞受損，可見急性心肌梗死、不穩(wěn)定性心絞痛、肺梗死、心力衰竭休克及其他導(dǎo)致心肌損傷的疾病如結(jié)締組織疾病、嚴(yán)重糖尿病酮癥酸中毒、胰腺炎等。在心肌損傷或者心肌梗死（mi）發(fā)生后ctni、ctnt可快速升高并持續(xù)數(shù)天，尤其是高敏肌鈣蛋白試劑通常在癥狀出現(xiàn)后3h內(nèi)即可檢測ctni水平升高。所以，ctni和ctnt是評(píng)估心肌損傷首選的生物標(biāo)志物，而高敏hs-ctn被推薦為常規(guī)臨床使用。

3、目前有研究表明，肌鈣蛋白進(jìn)入外周血后，完整的ctni單體易被水解成多種不同長度和片段的氨基酸殘基，從而影響其免疫檢測的準(zhǔn)確度。在ami患者的血液樣本中，能檢測到全片段ctni和11種主要的氨基酸殘基（aar.），其中>80%的ctni能被特異性識(shí)別aar.23-196片段的抗體檢測到，而100%的ctni能被特異性識(shí)別aar.34-126片段的抗體檢測到。然而，ctni-ctnc復(fù)合物以及ctnt-ctni-ctnc三聚體的主要結(jié)合位點(diǎn)也在aar.34-126片段中，導(dǎo)致針對(duì)這一段片段的抗體易受到ctnc和ctnt的遮蔽。

4、同時(shí)，心肌損傷后被釋放入血的肌鈣蛋白，可能會(huì)引發(fā)自身免疫反應(yīng)，在一些心臟病患者或者健康個(gè)體的血液中可檢測到抗肌鈣蛋白自身抗體，導(dǎo)致對(duì)ctni和ctnt的檢測出現(xiàn)假陰性結(jié)果而延誤治療時(shí)機(jī)。研究表明，自身抗體主要與ctnt-ctni-ctnc三聚體中的i-t空間構(gòu)象結(jié)合而形成肌鈣蛋白復(fù)合物，從而阻礙心肌肌鈣蛋白檢測試劑中識(shí)別相關(guān)位點(diǎn)的抗體對(duì)抗原的識(shí)別，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

5、目前，心肌肌鈣蛋白i、t在體外診斷領(lǐng)域的測定主要以雙抗體夾心法為主，作為捕獲抗體和標(biāo)記抗體，通常用兩種或以上識(shí)別不同單體的抗原表位、復(fù)合物抗原表位等復(fù)雜的組合，規(guī)避因位點(diǎn)遮蔽、氨基酸磷酸化、骨骼肌同源位點(diǎn)等導(dǎo)致的漏檢或假陽，以提高其檢測的敏感性和特異性。然而多種抗體的使用，也導(dǎo)致試劑成本高、穩(wěn)定性優(yōu)化困難、可制造性差，還容易出現(xiàn)批間差。同時(shí)，針對(duì)不同復(fù)合物檢測能力的不同，也導(dǎo)致不同試劑間檢測結(jié)果差異較大，給臨床應(yīng)用帶來困難。并且肌鈣蛋白在人體內(nèi)存在自身抗體，會(huì)形成巨肌鈣蛋白復(fù)合物，通過常規(guī)的抗體識(shí)別位點(diǎn)優(yōu)化、組合無法徹底解決巨肌鈣蛋白的影響，還會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致肌鈣蛋白的測值準(zhǔn)確性下降。

6、綜上，目前在鈣肌蛋白復(fù)合物的檢測中存在準(zhǔn)確性低的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，本技術(shù)一實(shí)施例提供一種樣本處理液和肌鈣蛋白復(fù)合物檢測試劑盒及應(yīng)用以提升鈣肌蛋白復(fù)合物檢測的準(zhǔn)確性。

2、本技術(shù)一方面提供一種樣本處理液，包括緩沖液和添加在緩沖液中的蛋白變性劑、表面活性劑、防腐劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑。

3、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液的ph為1~6或8~12。

4、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述蛋白變性劑在所述樣本處理液中的終濃度為0.2mol/l~20mol/l；所述表面活性劑在所述樣本處理液中質(zhì)量體積百分含量為0.01%~5%；所述防腐劑在所述樣本處理液中的質(zhì)量體積百分含量為0.01%~1%；所述滲透壓調(diào)節(jié)劑在所述樣本處理液中的質(zhì)量體積百分含量為0.5%~5%。

5、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述蛋白變性劑在所述樣本處理液中的終濃度為0.4mol/l~10mol/l；

6、所述表面活性劑在所述樣本處理液中質(zhì)量體積百分含量為0.1%~2?%；

7、所述防腐劑在所述樣本處理液中的質(zhì)量體積百分含量為0.05%~0.1%；

8、所述滲透壓調(diào)節(jié)劑在所述樣本處理液中的質(zhì)量體積百分含量為0.5%~2%。

9、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述蛋白變性劑包括尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍、sds-、ctab+和triton中的一種或多種。

10、可選地，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉和氯化鉀中的一種或兩種。

11、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述表面活性劑包括離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑中的一種或兩種。

12、可選地，所述離子型表面活性劑包括陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑和兩性表面活性劑中的一種或多種。

13、可選地，所述非離子型表面活性劑包括吐溫-20、吐溫-80、tritonx-405和brij35中的一種或多種。

14、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述防腐劑包括proclin300、疊氮鈉和5-溴-5-硝基-1,3-二惡烷中的一種或多種。

15、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖液中的緩沖介質(zhì)在所述樣本處理液中的終濃度為5mmol/l~500mmol/l。

16、可選地，所述緩沖介質(zhì)包括酸性緩沖介質(zhì)或堿性緩沖介質(zhì)。

17、可選地，所述酸性緩沖介質(zhì)包括檸檬酸-檸檬酸鹽、乙酸-乙酸鈉、磷酸氫二鈉-檸檬酸和甘氨酸-鹽酸中的一種或多種。

18、可選地，所述堿性緩沖介質(zhì)包括tris-鹽酸、硼砂-鹽酸、甘氨酸-氫氧化鈉、硼砂-氫氧化鈉、碳酸鈉-碳酸氫鈉和碳酸鈉-氫氧化鈉中的一種或多種。

19、本技術(shù)另一方面提供一種肌鈣蛋白復(fù)合物檢測試劑盒，包括上述的樣本處理液。

20、在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括固相載體。

21、可選地，固相載體包括磁珠包被物，所述磁珠包被物包被有抗心肌肌鈣蛋白抗體。

22、在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括發(fā)光標(biāo)記物。

23、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記有抗心肌肌鈣蛋白抗體。

24、可選地，所述發(fā)光標(biāo)記物包括金剛烷、魯米諾、異魯米諾、吖啶酯和吖啶酯衍生物中的一種或多種。

25、本技術(shù)另一方面提供一種肌鈣蛋白復(fù)合物的檢測方法，包括將待測樣本用樣本處理液處理，加入發(fā)光標(biāo)記物，進(jìn)行檢測；

26、所述樣本處理液為預(yù)制型組合物或現(xiàn)配型組合物，且所述樣本處理液滿足如上述的樣本處理液之定義。

27、本技術(shù)提供一種樣本處理液，包括緩沖液和添加在緩沖液中的蛋白變性劑、表面活性劑、防腐劑和氯化鈉，采用本技術(shù)提供的特定濃度比例的樣本處理液對(duì)樣本中肌鈣蛋白復(fù)合物的處理，能夠使肌鈣蛋白檢測物在樣本中的形態(tài)更均一，結(jié)構(gòu)更簡單，識(shí)別更容易，干擾更少，檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，同時(shí)降低成本。同時(shí)，采用本技術(shù)的樣本液不會(huì)破壞目標(biāo)蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)，配合檢測試劑使用，不會(huì)影響試劑本身的檢測能力，提升檢測的準(zhǔn)確性。