本申請(qǐng)涉及免疫檢驗(yàn)，具體涉及一封閉液、蛋白芯片的制備方法以及改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾的方法。

背景技術(shù)：

1、生物芯片技術(shù)是20世紀(jì)90年代初逐步發(fā)展起來(lái)的一種新型分子檢測(cè)技術(shù)，是通過(guò)縮微技術(shù)，根據(jù)分子間特異性地相互作用的原理，將生命科學(xué)領(lǐng)域中不連續(xù)的分析過(guò)程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因及其它生物組分的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測(cè)。利用生物芯片技術(shù)，一次可以對(duì)被檢測(cè)對(duì)象進(jìn)行多個(gè)指標(biāo)的檢驗(yàn)。其中，又分為基因芯片、蛋白芯片、縮微實(shí)驗(yàn)室等。

2、蛋白芯片是一項(xiàng)正在發(fā)展的新興技術(shù)，它提供了一個(gè)通用的平臺(tái)，以高并行和高通量的方式表征成千上萬(wàn)的蛋白質(zhì)。已知的蛋白質(zhì)作為探針，利用微距陣點(diǎn)樣的方法，固定于固相載體上。抗體或抗原用熒光物質(zhì)、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記物標(biāo)記，在芯片上與探針發(fā)生反應(yīng)，通過(guò)蛋白質(zhì)之間的相互作用與被檢測(cè)的蛋白相結(jié)合，然后眼觀或通過(guò)特定的裝置對(duì)雜交結(jié)果進(jìn)行掃描，最后進(jìn)行定性或定量的分析。

3、檢測(cè)標(biāo)志物抗體的免疫學(xué)方法為間接法。固定捕獲抗體的抗原是以玻璃為載體的芯片基質(zhì)，每種標(biāo)志物的抗原是用點(diǎn)樣液稀釋后以矩陣方式按順序用壓電式點(diǎn)樣儀將抗原噴到相應(yīng)的位置。這些用點(diǎn)樣液稀釋后的抗原可以捕獲被測(cè)樣本中特異性的抗體，被捕獲的抗體與標(biāo)記有hrp的第二抗體相結(jié)合，形成復(fù)合物。hrp可以催化化學(xué)發(fā)光底物，其光信號(hào)通過(guò)ccd攝像頭采集，通過(guò)光信號(hào)的強(qiáng)弱可以判斷被測(cè)樣本中特定標(biāo)志物抗體的濃度。

4、蛋白芯片在生物醫(yī)學(xué)研究中廣泛應(yīng)用，但在測(cè)試過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)個(gè)別指標(biāo)點(diǎn)形拖尾問(wèn)題，引起結(jié)果異?！，F(xiàn)有技術(shù)中的封閉方法未能有效解決這一問(wèn)題，因此需要一種方法來(lái)改善芯片的點(diǎn)形圖案質(zhì)量和穩(wěn)定性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，本申請(qǐng)一實(shí)施方式有必要提供一種封閉液，以改善芯片的點(diǎn)形圖案質(zhì)量和穩(wěn)定性。

2、技術(shù)方案包括如下：

3、一種改善蛋白芯片拖尾現(xiàn)象的封閉液，所述封閉液的組分包括曲拉通x-100?0.1%v/v～0.5%?v/v、蔗糖?10g/l～100g/l、硫酸銨0.1mol/l～0.2mol/l、生物緩沖液0.01%v/v～0.1%v/v?、山羊血清5%v/v～15%v/v和魚精蛋白0.05g/l~1g/l，ph值為6.5~7.5。

4、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述封閉液的組分包括曲拉通x-100?0.1%v/v～0.2%v/v、蔗糖50g/l～100g/l、硫酸銨0.1mol/l～0.15mol/l、生物緩沖液0.05%v/v?~0.1%v/v、山羊血清5%v/v～10%v/v和魚精蛋白0.25g/l~1g/l。

5、在其中一個(gè)實(shí)施例中，生物緩沖液包括磷酸鹽緩沖液。

6、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述磷酸鹽緩沖液中磷酸鹽的濃度為0.5mmol/l~5mmol/l。

7、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述磷酸鹽為磷酸氫二鈉。

8、所述的封閉液的制備方法，包括：將所述的曲拉通x-100、蔗糖、硫酸銨、生物緩沖液、山羊血清和魚精蛋白與水混合，制備封閉液。

9、蛋白芯片的制備方法，包括：

10、將抗原或抗體點(diǎn)樣于芯片載體上，靜置；

11、用所述的封閉液對(duì)靜置后的芯片載體進(jìn)行封閉，制備蛋白芯片。

12、在其中一個(gè)實(shí)施例中，靜置的時(shí)間為0.5h～1h；和/或，封閉的時(shí)間為12h～20h。

13、一種試劑盒，包括所述的制備方法制得的蛋白芯片。

14、在其中一個(gè)實(shí)施例中，還包括標(biāo)記有酶的第二抗體和酶促化學(xué)發(fā)光劑。

15、所述的制備方法制得的蛋白芯片在制備檢測(cè)抗原或抗體的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

16、一種改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾的方法，包括：

17、將所述的制備方法制得的蛋白芯片與待測(cè)樣本進(jìn)行免疫反應(yīng)，用生物芯片分析儀捕獲圖像。

18、在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述方法是基于化學(xué)發(fā)光法?？蛇x地，所述化學(xué)發(fā)光法包括酶促化學(xué)發(fā)光法。

19、在其中一個(gè)實(shí)施例中，酶促化學(xué)發(fā)光法包括將所述蛋白芯片與待測(cè)樣本進(jìn)行免疫反應(yīng)，反應(yīng)后加入標(biāo)記有酶的第二抗體反應(yīng)，反應(yīng)后加入酶促化學(xué)發(fā)光劑。

20、相對(duì)于傳統(tǒng)技術(shù)，本申請(qǐng)具備如下有益效果：

21、本申請(qǐng)將表面活性劑曲拉通x-100、保護(hù)劑蔗糖、硫酸銨溶液、生物緩沖液、山羊血清和魚精蛋白組合形成特定配方的封閉液。芯片載體點(diǎn)樣完成后，用該封閉液封閉點(diǎn)樣完成后的芯片載體，能夠改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾問(wèn)題，從而提高免疫檢測(cè)試劑的準(zhǔn)確度。

22、基于上述封閉液，提供一種夠改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾的方法，改善芯片的點(diǎn)形圖案質(zhì)量和穩(wěn)定性，從而提高免疫檢測(cè)試劑的準(zhǔn)確度。

23、進(jìn)一步，通過(guò)蛋白芯片點(diǎn)樣完成后，對(duì)靜置時(shí)間和/或封閉時(shí)間的調(diào)節(jié)，進(jìn)一步改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾。

技術(shù)特征：

1.一種改善蛋白芯片拖尾現(xiàn)象的封閉液，其特征在于，所述封閉液的組分包括曲拉通x-100?0.1%v/v～0.5%?v/v、蔗糖?10g/l～100g/l、硫酸銨0.1mol/l～0.2mol/l、生物緩沖液0.01%v/v～0.1%v/v?、山羊血清5%v/v～15%v/v和魚精蛋白0.05g/l~1g/l，ph值為6.5~7.5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的封閉液，其特征在于，所述封閉液的組分包括曲拉通x-1000.1%v/v～0.2%v/v、蔗糖50g/l～100g/l、硫酸銨0.1mol/l～0.15mol/l、生物緩沖液0.05%v/v?~0.1%v/v、山羊血清5%v/v～10%v/v和魚精蛋白0.25g/l~1g/l。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的封閉液，其特征在于，生物緩沖液包括磷酸鹽緩沖液；

4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的封閉液的制備方法，其特征在于，包括：將所述的曲拉通x-100、蔗糖、硫酸銨、生物緩沖液、山羊血清和魚精蛋白與水混合，制備封閉液。

5.蛋白芯片的制備方法，其特征在于，包括：

6.權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，靜置的時(shí)間為0.5h～1h；和/或，封閉的時(shí)間為12h～20h。

7.一種試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求5至6中任一項(xiàng)所述的制備方法制得的蛋白芯片；

8.權(quán)利要求5至6中任一項(xiàng)所述的制備方法制得的蛋白芯片在制備檢測(cè)抗原或抗體的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

9.一種改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾的方法，其特征在于，包括：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法是基于化學(xué)發(fā)光法，可選地，所述化學(xué)發(fā)光法包括酶促化學(xué)發(fā)光法；

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)涉及封閉液、蛋白芯片的制備方法以及改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾的方法。所述封閉液的組分包括曲拉通X?100?0.1%v/v～0.5%v/v、蔗糖10g/L～100g/L、硫酸銨0.1mol/L～0.2mol/L、生物緩沖液0.01%v/v～0.1%v/v、山羊血清5%v/v～15%v/v和魚精蛋白0.05g/L~1g/L，pH值為6.5~7.5。蛋白芯片點(diǎn)樣完成后，用該封閉液封閉芯片能夠改善蛋白芯片點(diǎn)形拖尾的方法。

技術(shù)研發(fā)人員：潘維華,徐一凡,趙雯雯,潘成佳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：江蘇三聯(lián)生物工程股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26