本發(fā)明屬于藥物化學，涉及司美格魯肽中間體的分析，尤其涉及一種快速測定一系列司美格魯肽中間體手性純度的手性分析方法。

背景技術(shù)：

1、司美格魯肽是一種胰高血糖素樣肽受體激動劑即glp-1受體激動劑，人體的glp-1是由腸道l細胞分泌的一種肽類激素。它的作用機制是作用于胰島β細胞，促進胰島素的合成和分泌，刺激胰島β細胞的增值和分化，抑制胰島β細胞的凋亡，增加胰島β細胞數(shù)量，具有保護胰島功能的作用。還可以作用于胰島α細胞，抑制胰高血糖素的釋放，減少肝糖的釋放。作用于胰島δ細胞，促進生長抑素的分泌，參與抑制胰高血糖素的分泌。增強胰島素的敏感性，減慢胃的排空，作用于下丘腦抑制食欲，減少體重，通過這些作用共同達到降糖的效果。司美格魯肽將肽鏈第26位的賴氨酸位置連接上18碳脂肪二酸側(cè)鏈或其衍生物(簡稱司美格魯肽側(cè)鏈，如下化合物1所示)，其可介導(dǎo)和促進司美格魯肽與白蛋白的強結(jié)合，降低腎清除率，相比c16側(cè)鏈的利拉魯肽，司美格魯肽側(cè)鏈對白蛋白的親和力增強了5～6倍，與白蛋白結(jié)合可以增大了本品的分子量，能夠避免快速被腎臟清除并防止代謝性降解，延長體內(nèi)半衰期。

2、因此，司美格魯肽作為一種重要的降糖和減肥藥物，其在制備過程中會用到多個手性氨基酸，使得其分子結(jié)構(gòu)中含有多個手性中心。在司美格魯肽的制備過程中，手性氨基酸存在消旋的可能性，確保中間體的手性純度對于最終藥物的質(zhì)量和療效至關(guān)重要。

3、因此，開發(fā)一種準確、高效的手性分析方法對于監(jiān)控司美格魯肽中間體的手性純度具有重要意義。

4、目前手性分析方法主要包括核磁共振法、圓二色光譜法、旋光法、高效液相色譜法等，除高效液相色譜或氣相色譜法外的其他方法存在成本高、儀器通用性不強、靈敏度低等缺點，限制了其在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。司美格魯肽系列中間體目前未見高效液相色譜或氣相色譜法的相關(guān)報告。司美格魯肽系列中間體均存在手性異構(gòu)體，手性純度是中間體質(zhì)量控制的重要指標，開發(fā)通用性手性純度檢查方法為生產(chǎn)過程中中間體質(zhì)量控制提升了便捷性。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，本發(fā)明的分析方法用于快速測定一系列司美格魯肽中間體手性純度，采用高效液相色譜法(hplc)結(jié)合手性柱，通過優(yōu)化色譜條件和洗脫程序，實現(xiàn)了對司美格魯肽系列中間體的高效、準確手性分離和分析，具有分析速度快、準確度高、操作簡便等優(yōu)點。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，所述手性分析方法為采用高效液相色譜法結(jié)合手性柱進行分析；

4、所述的司美格魯肽系列中間體的結(jié)構(gòu)式如式i所示：

5、式中，所述的r1為氫、c1-c4的烷基、乙氧基、叔丁基氧基、芐基、叔丁基甲氧基或叔丁基乙氧基，所述的r2為fmoc或cbz；所述的r3為氫、c1-c4的烷基，所述的r4為氫、c1-c4的烷基、甲酸叔丁酯基、乙酸叔丁酯基、三苯甲基甲酰胺基、三苯甲基乙酰胺基或?qū)κ宥』矫鸦?/p>

6、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，所述手性柱為以硅膠表面涂覆纖維素-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)為填充劑。

7、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，所述分析方法具體步驟包括：

8、1)準備樣品：取司美格魯肽中間體，加入稀釋劑制備成供試品溶液；

9、2)進樣分析：取步驟1)得到的供試品溶液注入高效液相色譜儀進行分析，記錄色譜圖。

10、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，步驟1)中，供試品溶液的濃度為0.5mg/ml-3.0mg/ml，稀釋劑為80％-100％乙醇。

11、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，步驟2)中，高效液相色譜的色譜條件為：柱溫為20℃-45℃，流速為0.5ml/min-2.0ml/min，檢測波長為205nm-285nm，進樣體積為5μl-50μl。

12、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，柱溫為25℃-40℃，流速為0.8ml/min-1.5ml/min，檢測波長為210nm-254nm。

13、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，高效液相色譜的流動相由流動a和流動相b組成，進行等度或梯度洗脫，所述流動相a為磷酸鹽或醋酸鹽緩沖液，所述流動相b為乙腈。

14、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，流動相a中緩沖鹽的摩爾濃度為5mmol/l-50mmol/l。

15、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，等度洗脫時，流動相a與流動相b的比例為70:30-30：70。

16、作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，梯度洗脫程序為：0min，70％流動相a，30％流動相b；15min，15％流動相a，85％流動相b；20min，15％流動相a，85％流動相b；20.1min，70％流動相a，30％流動相b；25min，70％流動相a，30％流動相b。

17、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

18、1)本發(fā)明采用高效液相色譜法結(jié)合手性柱，實現(xiàn)了對一系列司美格魯肽中間體的高效、準確手性分離和分析。

19、2)本發(fā)明通過優(yōu)化色譜條件和洗脫程序，提高了手性分離的效果和分辨率。

20、3)本發(fā)明的分析方法操作簡便、快速，通用性強，適用于式1所示司美格魯肽系列中間體的手性質(zhì)量控制。

技術(shù)特征：

1.一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，所述手性分析方法為采用高效液相色譜法結(jié)合手性柱進行分析；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，所述手性柱為以硅膠表面涂覆纖維素-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)為填充劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，所述分析方法具體步驟包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，步驟1)中，供試品溶液的濃度為0.5mg/ml-3.0mg/ml，稀釋劑為80％-100％乙醇。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，步驟2)中，高效液相色譜的色譜條件為：柱溫為20℃-45℃，流速為0.5ml/min-2.0ml/min，檢測波長為205nm-285nm，進樣體積為5μl-50μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，柱溫為25℃-40℃，流速為0.8ml/min-1.5ml/min，檢測波長為210nm-254nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，高效液相色譜的流動相由流動a和流動相b組成，進行等度或梯度洗脫，所述流動相a為磷酸鹽或醋酸鹽緩沖液，所述流動相b為乙腈。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，流動相a中緩沖鹽的摩爾濃度為5mmol/l-50mmol/l。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，等度洗脫時，流動相a與流動相b的比例為70:30-30：70。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，其特征在于，梯度洗脫程序為：0min，70％流動相a，30％流動相b；15min，15％流動相a，85％流動相b；20min，15％流動相a，85％流動相b；20.1min，70％流動相a，30％流動相b；25min，70％流動相a，30％流動相b。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種司美格魯肽系列中間體的手性分析方法，本發(fā)明的分析方法用于快速測定一系列司美格魯肽中間體手性純度，采用高效液相色譜法(HPLC)結(jié)合手性柱，通過優(yōu)化色譜條件和洗脫程序，本發(fā)明的分析方法操作簡便、快速，通用性強，優(yōu)化色譜條件和洗脫程序，提高了手性分離的效果和分辨率，實現(xiàn)了對式1所示司美格魯肽系列中間體的高效、準確手性分離和分析，適用于式1所示司美格魯肽系列中間體的手性質(zhì)量控制。

技術(shù)研發(fā)人員：靳小舜,周天,林曉兵,靳震停,王宇
受保護的技術(shù)使用者：杭州澳賽諾醫(yī)藥技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6