本發(fā)明涉及醫(yī)藥檢測，具體涉及一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、梅毒是一種由梅毒螺旋體引起的慢性傳染病，其臨床表現(xiàn)多樣，診斷較為復(fù)雜。目前，臨床上常用的梅毒檢測方法主要包括血清學(xué)檢測、暗視野顯微鏡檢查、分子生物學(xué)檢測等。其中，血清學(xué)檢測是最常見的篩查手段之一，通過檢測患者血液或尿液中的梅毒螺旋體抗體來進行診斷。然而，傳統(tǒng)的血清學(xué)檢測方法存在一些局限性，尤其是在早期診斷和不同感染階段的覆蓋方面。

2、傳統(tǒng)試劑盒通常僅針對一種或少數(shù)幾種抗原進行檢測，由于梅毒螺旋體在不同感染階段會產(chǎn)生針對不同抗原的抗體，單一抗原檢測容易漏檢某些感染階段的樣本，導(dǎo)致較高的假陰性率；另外，單一抗體檢測時，容易受到非特異性結(jié)合的影響，導(dǎo)致假陽性結(jié)果；且單一抗原檢測的靈敏度較低，尤其是在感染早期或晚期階段，抗體水平較低的情況下，單一抗原檢測無法準確識別感染狀態(tài)。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒及其制備方法。

2、一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，由以下組成：

3、針對梅毒螺旋體特異性抗原(tpn15、tp47、tp92)的一種或多種單克隆抗體、熒光物質(zhì)標記的一種或多種單克隆抗體、固相載體、樣品處理液、熒光檢測液、洗滌液、終止液、陽性對照品、陰性對照品；

4、所述固相載體包括硝酸纖維素膜(nc膜)或塑料微孔板；

5、所述樣品處理液包含緩沖液a、蛋白酶抑制劑、防腐劑和封閉劑a；

6、所述熒光檢測液包含緩沖液b、增強劑、穩(wěn)定劑和封閉劑a；

7、所述洗滌液包含緩沖液b和洗滌劑；

8、所述陽性對照品含有已知梅毒螺旋體抗體的尿液樣品；

9、所述陰性對照品不含梅毒螺旋體抗體的尿液樣品。

10、優(yōu)選的，所述單克隆抗體通過雜交瘤技術(shù)制備，并通過親和層析法純化。

11、優(yōu)選的，所述單克隆抗體通過western?blot和elisa技術(shù)驗證其特異性。

12、優(yōu)選的，所述熒光物質(zhì)包括熒光素異硫氰酸酯(fitc)。

13、優(yōu)選的，所述固相載體上的單克隆抗體通過噴霧法或其他方法固定，并確保固定后的抗體具有良好的穩(wěn)定性和活性。

14、優(yōu)選的，所述樣品處理液的緩沖液a為tris-hcl，蛋白酶抑制劑為pmsf，防腐劑為疊氮鈉，封閉劑a為bsa。

15、優(yōu)選的，所述熒光檢測液的緩沖液b為pbs?ph?7.4，增強劑為tween-20，穩(wěn)定劑為甘油，封閉劑a為bsa。

16、優(yōu)選的，所述洗滌液的緩沖液b為pbs?ph?7.4，洗滌劑為tween-20。

17、優(yōu)選的，所述終止液為0.5mol/l硫酸。

18、一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

19、(1)制備單克隆抗體：選取balb/c小鼠，注射含有tpn15、tp47、tp92單一或組合抗原的免疫原，進行免疫；

20、提取免疫小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合，形成雜交瘤細胞；

21、通過elisa篩選出能夠分泌高產(chǎn)率和高特異性抗體的雜交瘤細胞；

22、使用親和層析法純化單克隆抗體；

23、(2)熒光標記單克隆抗體：

24、使用熒光素異硫氰酸酯(fitc)；

25、將純化的單克隆抗體與熒光物質(zhì)(如fitc)進行偶聯(lián)；

26、通過紫外吸收法測定標記效率；

27、(3)準備固相載體并固定檢測抗體：

28、選擇硝酸纖維素膜(nc膜)或塑料微孔板作為固相載體；

29、使用噴霧法或其他合適的方法將檢測抗體固定在固相載體上；

30、(4)配制樣品處理液、熒光檢測液；

31、(5)配制洗滌液、終止液；

32、(6)制備陽性對照品和陰性對照品：

33、(7)組裝試劑盒：將制備好的單克隆抗體(1mg)、熒光標記的單克隆抗體(1mg)、固相載體(nc膜或塑料微孔板)、樣品處理液(100ml)、洗滌液(200ml)、熒光檢測液(100ml)、終止液(50ml)、陽性對照品(1ml)和陰性對照品(1ml)按照比例和順序裝入試劑盒中，密封保存。

34、tpn15位于梅毒螺旋體的外膜，是梅毒螺旋體的一個重要抗原；tp47與梅毒螺旋體的致病性有關(guān)，是另一個重要的抗原；tp92與梅毒螺旋體的感染過程密切相關(guān)。

35、試劑盒利用針對梅毒螺旋體特異性抗原(tpn15、tp47、tp92)的單克隆抗體，由于不同抗原在感染的不同階段表達不同，通過多種抗原識別，多靶點檢測可以覆蓋更廣泛的感染階段，提高檢測的覆蓋面，減少假陰性結(jié)果。

36、使用熒光素異硫氰酸酯(fitc)標記抗體，通過熒光信號的強度來定量檢測梅毒螺旋體抗體的存在，能夠準確區(qū)分陽性與陰性樣本，減少背景干擾。

37、熒光檢測液用于增強熒光信號，穩(wěn)定標記抗體，并減少背景信號，提高檢測的靈敏度和特異性，增強信號的穩(wěn)定性。

38、本發(fā)明達到的有益效果為：1、本發(fā)明通過使用針對tpn15、tp47、tp92抗原的單克隆抗體組合，針對不同抗原的特異性識別，減少非特異性結(jié)合，可以顯著提高檢測的靈敏度和特異性，從而提高試劑盒的準確性，有助于檢測到不同階段的梅毒感染。

39、2、本發(fā)明利用不同抗原在梅毒感染的不同階段表達不同，使用多種抗原對應(yīng)的抗體可以覆蓋更廣泛的感染階段，提高檢測的全面性。

40、3、本發(fā)明能夠克服單一抗原檢測可能會漏檢某些感染樣本，而多抗原檢測可以減少假陰性結(jié)果，提高檢測的可靠性。

41、4、本發(fā)明確保每種抗體的濃度和質(zhì)量一致，通過純化和標記方法保持組合的一致性和穩(wěn)定性，從而提高試劑盒的可重復(fù)性和可靠性。

42、5、本發(fā)明通過合理設(shè)計樣品處理液、熒光檢測液、洗滌液和終止液，選擇固相載體和固定方法，能夠簡化實際檢測流程，使試劑盒的操作更為簡便快捷。

技術(shù)特征：

1.一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，由以下組成：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述單克隆抗體通過雜交瘤技術(shù)制備，并通過親和層析法純化。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述單克隆抗體通過western?blot和elisa技術(shù)驗證其特異性。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述熒光物質(zhì)包括熒光素異硫氰酸酯。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述固相載體上的單克隆抗體通過噴霧法或其他方法固定。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述樣品處理液的緩沖液a為tris-hcl，蛋白酶抑制劑為pmsf，防腐劑為疊氮鈉，封閉劑a為bsa。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述熒光檢測液的緩沖液b為pbs?ph?7.4，增強劑為tween-20，穩(wěn)定劑為甘油，封閉劑a為bsa。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述洗滌液的緩沖液b為pbs?ph?7.4，洗滌劑為tween-20。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，其特征在于，所述終止液為0.5mol/l硫酸。

10.一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)制備單克隆抗體：選取balb/c小鼠，注射含有tpn15、tp47、tp92單一或組合抗原的免疫原，進行免疫；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及醫(yī)藥檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒及其制備方法。一種檢測尿液中梅毒螺旋體抗體的試劑盒，由以下組成：針對梅毒螺旋體特異性抗原(TpN15、Tp47、Tp92)的一種或多種單克隆抗體、熒光物質(zhì)標記的一種或多種單克隆抗體、固相載體、樣品處理液、熒光檢測液、洗滌液、終止液、陽性對照品、陰性對照品。本發(fā)明通過使用針對TpN15、Tp47、Tp92抗原的單克隆抗體組合，針對不同抗原的特異性識別，減少非特異性結(jié)合，可以顯著提高檢測的靈敏度和特異性，從而提高試劑盒的準確性，利用不同抗原在梅毒感染的不同階段表達不同，可以覆蓋更廣泛的感染階段。

技術(shù)研發(fā)人員：朱云楓,明宏艷,栗召輝,劉盛瑩
受保護的技術(shù)使用者：廣州國際旅行衛(wèi)生保健中心（廣州海關(guān)口岸門診部）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6