本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)，具體涉及一種基于cba法的自身免疫抗體檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)：

1、隨著自身抗體檢測(cè)需求的增加，自身抗體檢測(cè)技術(shù)也在不斷更新發(fā)展，間接免疫熒光技術(shù)（iift）以其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì)成為自身抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，也是公認(rèn)的國(guó)內(nèi)外自身抗體篩查首選方法。根據(jù)檢測(cè)基質(zhì)的不同，iift分為以組織為基質(zhì)的tba法和以細(xì)胞為基質(zhì)的cba法。cba法以靶抗原轉(zhuǎn)染細(xì)胞為基質(zhì)，保留了抗原譜的完整性；同時(shí)通過(guò)靶抗原細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)，可以使原本含量較低的靶抗原以天然構(gòu)象大量表達(dá)在細(xì)胞表面，極大提高特異性抗體檢測(cè)的敏感性和特異性。但傳統(tǒng)cba法多是在具有細(xì)胞培養(yǎng)條件的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，許多醫(yī)院難以實(shí)現(xiàn)該檢測(cè)條件，且傳統(tǒng)cba法大多需要在檢測(cè)前重新構(gòu)建質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型，再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、檢測(cè)，大大降低了檢測(cè)的時(shí)效性，無(wú)法做到對(duì)臨床診療的及時(shí)有效指導(dǎo)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明提供了一種基于cba法的自身免疫抗體檢測(cè)試劑盒，能夠進(jìn)行長(zhǎng)期保存，使用起來(lái)快速便捷。避免每次使用前臨時(shí)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，構(gòu)建細(xì)胞株所導(dǎo)致的批次效應(yīng)，提高了檢測(cè)結(jié)果的可比性。且該試劑盒可同時(shí)檢測(cè)多指標(biāo)，節(jié)約檢測(cè)時(shí)間。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種基于cba法的自身免疫抗體檢測(cè)試劑盒，包括：

4、抗人igg-alex594熒光二抗，磷酸鹽緩沖鹽水，細(xì)胞芯片，陽(yáng)性質(zhì)控品以及，陰性質(zhì)控品。

5、優(yōu)選地，所述細(xì)胞芯片包括多個(gè)微孔，用于接種不同的穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株。

6、優(yōu)選地，所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株的制備方法為，將所需的靶抗原插入到lenti-cmv-mcs-3xflag-pgk-puro載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒，將所述重組質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染培養(yǎng)篩選后，獲得穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株。

7、優(yōu)選地，每個(gè)微孔接種的穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株的濃度為1x106cells/孔。

8、優(yōu)選地，所述試劑盒的保存溫度為-80℃。

9、優(yōu)選地，將所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株接種至所述細(xì)胞芯片微孔中的方法為，先將所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株接種至所述細(xì)胞芯片微孔中，待細(xì)胞芯片微孔中的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至80-90%時(shí)，用pbs洗滌2次后，加入甲醛固定細(xì)胞，固定后，棄去甲醛固定液后，用pbs洗滌細(xì)胞，完成所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株的接種。

10、優(yōu)選地，pbs洗滌的濃度為0.01m。

11、優(yōu)選地，加入甲醛固定細(xì)胞時(shí)，每次加入的甲醛體積為200μl。

12、優(yōu)選地，加入甲醛固定細(xì)胞時(shí)，固定的溫度為4℃，固定的時(shí)間為10min。

13、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

14、（2）本發(fā)明的細(xì)胞芯片具有多個(gè)微孔，能夠接種一種或多種穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株，制成單指標(biāo)細(xì)胞芯片或多檢測(cè)指標(biāo)細(xì)胞芯片，靈活搭配，即同一芯片可進(jìn)行多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)，提高檢測(cè)效率，滿足臨床不同診療需求。

15、（3）本發(fā)明的試劑盒，根據(jù)檢測(cè)指標(biāo)的不同，可應(yīng)用于各類自身免疫性疾病自身抗體的檢測(cè)，為自身抗體檢測(cè)提供穩(wěn)定的產(chǎn)品及技術(shù)支持。同時(shí)試劑盒有熒光標(biāo)記的二抗，提供抗體信息，細(xì)胞轉(zhuǎn)染的抗原也進(jìn)行了熒光標(biāo)記，通過(guò)雙重?zé)晒鈱?duì)結(jié)果進(jìn)行定位判讀，有效排除血清基質(zhì)造成的假陽(yáng)性結(jié)果，提高檢測(cè)特異性，進(jìn)而提升臨床診斷準(zhǔn)確率。

技術(shù)特征：

1.一種基于cba法的自身免疫抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述細(xì)胞芯片包括多個(gè)微孔，用于接種不同的穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株。

3.根據(jù)權(quán)利2所述的試劑盒，其特征在于，所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株的制備方法為，將所需的靶抗原插入到lenti-cmv-mcs-3xflag-pgk-puro載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒，將所述重組質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染培養(yǎng)篩選后，獲得穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，每個(gè)微孔接種的穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株的濃度為1x106cells/孔。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的保存溫度為-80℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，將所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株接種至所述細(xì)胞芯片微孔中的方法為，先將所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株接種至所述細(xì)胞芯片微孔中，待細(xì)胞芯片微孔中的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至80-90%時(shí)，用pbs洗滌2次后，加入甲醛固定細(xì)胞，固定后，棄去甲醛固定液后，用pbs洗滌細(xì)胞，完成所述穩(wěn)定表達(dá)靶抗原蛋白的細(xì)胞株的接種。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，pbs洗滌的濃度為0.01m。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，加入甲醛固定細(xì)胞時(shí)，每次加入的甲醛體積為200μl。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，加入甲醛固定細(xì)胞時(shí)，固定的溫度為4℃，固定的時(shí)間為10min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種基于CBA法的自身免疫抗體檢測(cè)試劑盒，包括：抗人IgG?Alex594熒光二抗，磷酸鹽緩沖鹽水，細(xì)胞芯片，陽(yáng)性質(zhì)控品以及，陰性質(zhì)控品。本發(fā)明能夠進(jìn)行長(zhǎng)期保存，使用起來(lái)快速便捷。避免每次使用前臨時(shí)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，構(gòu)建細(xì)胞株所導(dǎo)致的批次效應(yīng)，提高了檢測(cè)結(jié)果的可比性。

技術(shù)研發(fā)人員：周勇,曹盼
受保護(hù)的技術(shù)使用者：邁諾（武漢）醫(yī)學(xué)生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2