本發(fā)明屬于醫(yī)療化驗，具體涉及一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法。

背景技術(shù)：

1、20世紀70年代德國hausen教授發(fā)現(xiàn)子宮頸癌的發(fā)生與hpv感染直接相關(guān)，自此，子宮頸癌的研究開始由細胞學(xué)向分子學(xué)轉(zhuǎn)變。hpv是球形dna病毒，可引起生殖器疣和生殖器癌，目前分離出的高危型和低危型hpv多達130種，子宮頸癌的主要發(fā)病因素是hpv的持續(xù)感染，幾乎所有的癌前病變及子宮頸癌組織標(biāo)本中均能檢測到hpv，不同型別的hpv有不同的致癌能力，鑒于致癌活性的差異，檢測hpv感染和識別高危hpv類型在臨床上很重要。因此，在子宮頸癌的篩查中使用hpv檢測有助于提高篩查率。

2、目前，對hpv陽性人群需要進行兩次宮頸細胞取樣方可完成宮頸初篩工作，其原因是：在檢測時所用到的hpv細胞保存液和tct液基細胞保存液的主要成分不同，造成同一個采樣管不能同時使用在hpv-dna檢測和tct液基細胞檢測中。而且通過上述方法，存在如下問題：1.tct宮頸細胞學(xué)的陽性率下降：這是由于宮頸癌篩查所需要的樣本主要來自宮頸表面的脫落細胞，而脫落細胞主要來自宮頸表面的鱗狀上皮，做一次hpv檢測需要采集足量的宮頸脫落細胞，而宮頸表皮鱗狀上皮細胞至少需要30天左右才能再度生成足量的成熟細胞；如果多次取樣的間隔時間較短，就會出現(xiàn)有效細胞太少或沒有的情況，結(jié)果就是假陰性，所以兩次采樣要間隔20天以上；2.增加基層醫(yī)生重復(fù)采樣和召回陽性人群的工作量；3.短期內(nèi)重復(fù)陰道采樣，受檢人群陰道損傷的概率增大，造成受檢人群的配合度下降，召回率下降；4.hpv陽性人群完成初篩的時間會比較長，容易造成漏篩。

3、因此，本發(fā)明提供一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法解決上述技術(shù)問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法，其可以達到一管雙檢的目的，同時減少患者采樣的痛苦。

2、本發(fā)明提供一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法，其包括如下步驟：

3、s1，提取待測樣本，并將所述待測樣本放置于具有tct液基細胞保存液的tct液基細胞采樣管中進行保存；其中，所述待測樣本為宮頸脫落細胞，所述tct液基細胞保存液的成分包括有機溶劑、水和固定劑；

4、s2，將保存有所述宮頸脫落細胞的所述tct液基細胞采樣管放置于離心機中，在2500r/min的轉(zhuǎn)速下震蕩混勻5分鐘至10分鐘，得到第一樣本；

5、s3，提取500ul的所述第一樣本放置于離心機中，在13000r/min-15000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘至10分鐘用于沉淀所述宮頸脫落細胞，得到第二樣本；

6、s4，在所述第二樣本中加入1ml無水乙醇用于去除所述第二樣本中的所述有機溶劑，得到第三樣本；

7、s5，將所述第三樣本放入離心機中，在13000r/min-15000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘至10分鐘，棄上清取沉淀，得到第四樣本；

8、s6，在所述第四樣本中加入1ml生理鹽水用于純化所述宮頸脫落細胞，得到第五樣本；

9、s7，將所述第五樣本放入離心機中，在13000r/min-15000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘至10分鐘，棄上清取沉淀，得到第六樣本；

10、s8，在所述第六樣本中加入120ul細胞裂解液，并將加入有所述細胞裂解液的所述第六樣本放置于加熱設(shè)備中，在95攝氏度至100攝氏度的溫度下加熱10分鐘至15分鐘，得到第七樣本；

11、s9，將所述第七樣本放入離心機中，在13000r/min-15000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘至10分鐘，取上清得到檢測樣本供pcr擴增用。

12、優(yōu)選的，所述有機溶劑包括乙醇、甲醇和異丙醇；所述細胞裂解液包括氯化鉀、三羥甲基氨基和聚乙二醇辛基苯基醚。

13、優(yōu)選的，所述加熱設(shè)備為干式恒溫儀；所述s9中pcr擴增用的試劑為人乳頭瘤病毒基因分型(23型)擴增試劑。

14、與相關(guān)技術(shù)相比，本發(fā)明提供的一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法，通過步驟s4加入無水乙醇，把tct液基細胞保存液中的有機溶劑溶解到無水乙醇中，利用有機溶劑的相似相溶原理溶解有機溶劑，再通過步驟s5離心棄上清的方式，棄除廢液，保存宮頸脫落細胞；通過步驟s6加入生理鹽水，利用無水乙醇能與水以任意比例互溶的特性，再通過步驟s7離心棄上清的方式，棄除廢液，進一步純化細胞；經(jīng)過兩輪的離心純化，tct液基細胞保存液中殘留的有機溶劑已基本清除，從而不影響下游的pcr擴增。本法明通過優(yōu)化hpv檢測的流程，使得tct液基細胞保存液中的采樣標(biāo)本，既可以用于tct液基細胞檢測，又可以用于hpv-dna檢測，達到一管雙檢的目的，其不需要進行兩次采樣，進而縮短了子宮頸癌的篩查周期，降低了漏診概率和采樣成本，同時還減少患者采樣的痛苦。

技術(shù)特征：

1.一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法，其特征在于，所述有機溶劑包括乙醇、甲醇和異丙醇；所述細胞裂解液包括氯化鉀、三羥甲基氨基和聚乙二醇辛基苯基醚。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于tct檢測的宮頸癌篩查方法，其特征在于，所述加熱設(shè)備為干式恒溫儀；所述s9中pcr擴增用的試劑為人乳頭瘤病毒基因分型(23型)擴增試劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種基于TCT檢測的宮頸癌篩查方法，包括以下步驟：S1，取宮頸脫落細胞，將宮頸脫落細胞置于TCT液基細胞采樣管中保存；S2，將TCT液基細胞采樣管置于離心機中震蕩混勻得到第一樣本；取500ul的第一樣本進行離心處理得到第二樣本；S4，在第二樣本中加入1ml無水乙醇得到第三樣本；S5，將第三樣本進行離心處理，棄上清取沉淀得到第四樣本；S6，在第四樣本中加入1mL生理鹽水得到第五樣本；S7，將第五樣本進行離心處理，棄上清取沉淀得到第六樣本；S8，在第六樣本中加入120ul細胞裂解液，并加熱處理，得到第七樣本；S9，將所述第七樣本進行離心處理，取上清得到檢測樣本供PCR擴增用。本發(fā)明的篩查方法可以達到一管雙檢的目的，同時減少患者采樣的痛苦。

技術(shù)研發(fā)人員：黎玉鳳,葉小聰,何玉霞
受保護的技術(shù)使用者：廣州康都醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6