本申請涉及醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)，尤其涉及一種心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法。

背景技術(shù)：

1、在梗死心臟內(nèi)，可以從形態(tài)學(xué)上區(qū)分三個(gè)區(qū)域：心肌梗死邊界區(qū)、未受傷的遠(yuǎn)端心肌區(qū)域、心肌梗死區(qū)，心肌梗死區(qū)的特征是損傷和細(xì)胞死亡。心肌梗死通常是由于動脈粥樣硬化斑塊形成導(dǎo)致冠狀動脈閉塞而引發(fā)的。阻塞會阻礙血液和氧氣流向心肌組織的局部部位，導(dǎo)致缺氧和大量心肌細(xì)胞死亡。受傷的缺氧組織與周圍存活的含氧量正常組織之間的界面處會形成陡峭的氧氣梯度，該區(qū)域稱為心肌梗死邊界區(qū)。

2、心肌梗死邊界區(qū)域?qū)π募」Ｋ篮蟮闹厮苓^程特別重要，在接下來的幾天、幾周和幾個(gè)月里，受傷的心肌，尤其是心肌梗死邊界區(qū)的邊界區(qū)域，其心電特性會經(jīng)歷廣泛的重塑，可能導(dǎo)致心力衰竭。體內(nèi)和離體模型表明，邊界區(qū)組織是心律失常的已知基質(zhì)，并且產(chǎn)生的力比遠(yuǎn)端心肌小。這些觀察結(jié)果表明，邊界區(qū)特別容易受到病理生理學(xué)重塑的影響，可能是由于細(xì)胞的異質(zhì)性微環(huán)境。各種研究表明它參與梗塞的擴(kuò)張、纖維化、肥大和修復(fù)，以及引發(fā)心律失常和突發(fā)性心臟病的電不穩(wěn)定過程。在受傷的缺氧組織和鄰近的存活的含氧量正常的組織之間的邊界（心肌梗死邊界區(qū)）的特征是氧梯度。

3、然而，由于現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷木窒扌?，人們對心肌梗死邊界區(qū)對心臟組織功能的影響知之甚少。但是心肌梗死邊界區(qū)這些變化與暴露于均勻常氧或缺氧的組織中觀察到的變化不同，表明氧梯度對心臟組織表型的不同調(diào)節(jié)。從解剖上角度，也沒有明確的提出心肌梗死邊界區(qū)的組織鑒定方法，不能明確邊界區(qū)的功能。因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待改進(jìn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本申請的目的在于提供一種心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中缺乏心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法的問題。

2、本申請的技術(shù)方案如下：

3、本申請的第一方面，提供一種心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，包括步驟：

4、對待鑒定心臟組織進(jìn)行雙軸力學(xué)拉伸測試：介于正常心肌組織剛度和心肌梗死組織剛度之間的組織為第一潛在邊界區(qū)；對待鑒定心臟組織進(jìn)行雙染色鑒定：先使用伊文斯藍(lán)染色液進(jìn)行染色，再使用2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色液進(jìn)行染色，觀察染色結(jié)果，紅色區(qū)域?yàn)榈诙撛谶吔鐓^(qū)；所述第一潛在邊界區(qū)和所述第二潛在邊界區(qū)的重合部分為所述心肌梗死邊界區(qū)。

5、可選地，所述雙軸力學(xué)拉伸測試的步驟包括：

6、獲取心臟組織樣品，沿第一方向和第二方向所述心臟組織樣品施加拉伸力，并測定心臟組織樣品的剛度值；所述第一方向和所述第二方向的夾角為90°。

7、可選地，所述第一方向的拉伸力和所述第二方向的拉伸力的應(yīng)變比為2：1、4：3或1：1中的至少一種。

8、可選地，所述伊文斯藍(lán)染色液中伊文斯藍(lán)染料的質(zhì)量比為0.5-3%；所述2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色液中2，3，5-氯化三苯基四氮唑的質(zhì)量比為1-3%。

9、本申請的第二方面，提供一種雙軸力學(xué)拉伸測試裝置，包括底座和設(shè)于所述底座上的x軸力學(xué)拉伸組件、y軸力學(xué)拉伸組件以及樣品檢測平臺，所述x軸力學(xué)拉伸組件的延伸方向與所述y軸力學(xué)拉伸組件的延伸方向形成的夾角為90°；所述x軸力學(xué)拉伸組件包括以所述樣品檢測平臺為對稱中心，中心對稱設(shè)置的第一拉伸組件和第二拉伸組件，所述y軸力學(xué)拉伸組件包括以所述樣品檢測平臺為對稱中心，中心對稱設(shè)置的第三拉伸組件和第四拉伸組件；所述第一拉伸組件、所述第二拉伸組件、所述第三拉伸組件和所述第四拉伸組件靠近所述樣品檢測平臺的一側(cè)均設(shè)置有夾持部，所述第一拉伸組件的夾持部和所述第二拉伸組件的夾持部中的至少一者能夠沿所述x軸力學(xué)拉伸組件的延伸方向移動，所述第三拉伸組件的夾持部和所述第四拉伸組件的夾持部中的至少一者能夠沿所述y軸力學(xué)拉伸組件的延伸方向移動；所述第一拉伸組件和所述第二拉伸組件中的至少一者設(shè)有力傳感器，所述第三拉伸組件和所述第四拉伸組件中的至少一者設(shè)有力傳感器，所述力傳感器被配置為記錄力值。

10、可選地，所述第一拉伸組件、所述第二拉伸組件、所述第三拉伸組件和所述第四拉伸組件均包括位移驅(qū)動器和連接桿，所述位移驅(qū)動器、所述連接桿和所述夾持部依次固定連接。

11、可選地，所述底座上設(shè)有水浴槽，所述x軸力學(xué)拉伸組件、y軸力學(xué)拉伸組件以及樣品檢測平臺設(shè)置在所述水浴槽中。

12、本申請的第三方面，提供一種本申請第二方面的雙軸力學(xué)拉伸測試裝置在心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定中的應(yīng)用。

13、本申請的第四方面，提供一種使用本申請第二方面的雙軸力學(xué)拉伸測試裝置鑒定心肌梗死邊界區(qū)的方法，包括：獲取心臟組織樣品；在所述心臟組織樣品的9個(gè)不同的位置采用百分表測量真實(shí)厚度；將心臟組織樣品平鋪放置在所述樣品檢測平臺上，沿著所述樣品檢測平臺的邊緣除多余的組織，使用所述夾持部固定所述心臟組織樣品；?沿x軸和y軸施加10?mn的預(yù)加載力，接著以x軸30%的應(yīng)變量和10?μm/s的拉伸速度為參考，在x軸和y軸上分別施加雙軸拉伸力，所有加載結(jié)束后進(jìn)行300?s應(yīng)力松弛，通過傳感器記錄力值變化并記錄力值變化與時(shí)間的關(guān)系曲線。

14、可選地，所述雙軸拉伸力應(yīng)變比為2：1、4：3或1：1中的至少一種。

15、本申請的有益效果：本申請的心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，包括對待鑒定心臟組織進(jìn)行雙軸力學(xué)拉伸測試、雙染色鑒定和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析，結(jié)合力學(xué)性能、化學(xué)染色顯色和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析，從宏觀和微觀的角度，對心肌梗死邊界區(qū)進(jìn)行多維度的鑒定，以保證鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

16、附圖說明

17、為了更清楚地說明本申請實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

18、圖1為本申請實(shí)施例提供的雙軸力學(xué)拉伸測試裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；

19、圖2為本申請實(shí)施例提供的雙軸力學(xué)拉伸測試裝置的實(shí)物圖；

20、圖3為本申請實(shí)施例提供的小鼠心梗超聲結(jié)果圖；

21、圖4為本申請實(shí)施例提供的雙軸力學(xué)拉伸測試圖：

22、a為沿著心肌纖維方向拉伸應(yīng)力應(yīng)變曲線；b為沿著心肌纖維方向蠕變應(yīng)力松弛曲線；c為垂直心肌纖維方向拉伸應(yīng)力應(yīng)變曲線；d為垂直心肌纖維方向蠕變應(yīng)力松弛曲線；

23、圖5為本申請實(shí)施例提供的雙染色鑒定圖。

技術(shù)特征：

1.一種心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，其特征在于，包括步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，其特征在于，所述雙軸力學(xué)拉伸測試的步驟包括：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，其特征在于，所述第一方向的拉伸力和所述第二方向的拉伸力的應(yīng)變比為2：1、4：3或1：1中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，其特征在于，所述伊文斯藍(lán)染色液中伊文斯藍(lán)染料的質(zhì)量比為0.5-3%；

5.一種雙軸力學(xué)拉伸測試裝置，其特征在于，包括：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雙軸力學(xué)拉伸測試裝置，其特征在于，所述第一拉伸組件、所述第二拉伸組件、所述第三拉伸組件和所述第四拉伸組件均包括位移驅(qū)動器和連接桿，所述位移驅(qū)動器、所述連接桿和所述夾持部依次固定連接。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雙軸力學(xué)拉伸測試裝置，其特征在于，所述底座上設(shè)有水浴槽，所述x軸力學(xué)拉伸組件、y軸力學(xué)拉伸組件以及樣品檢測平臺設(shè)置在所述水浴槽中。

8.一種權(quán)利要求5至7任一項(xiàng)所述的雙軸力學(xué)拉伸測試裝置在心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定中的應(yīng)用。

9.一種使用權(quán)利要求5至7任一項(xiàng)所述雙軸力學(xué)拉伸測試裝置鑒定心肌梗死邊界區(qū)的方法，其特征在于，包括：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述雙軸拉伸力的應(yīng)變比為2：1、4：3或1：1中的至少一種。

技術(shù)總結(jié)
本申請涉及醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開一種心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，包括：對待鑒定心臟組織進(jìn)行雙軸力學(xué)拉伸測試：介于正常心肌組織剛度和心肌梗死組織剛度之間的組織為第一潛在邊界區(qū)；對待鑒定心臟組織進(jìn)行雙染色鑒定：先使用伊文斯藍(lán)染色液進(jìn)行染色，再使用2，3，5?氯化三苯基四氮唑染色液進(jìn)行染色，觀察染色結(jié)果，紅色區(qū)域?yàn)榈诙撛谶吔鐓^(qū)，所述第一潛在邊界區(qū)和所述第二潛在邊界區(qū)的重合部分為所述心肌梗死邊界區(qū)。本申請的心肌梗死邊界區(qū)組織鑒定方法，從物理和化學(xué)的角度，對心肌梗死邊界區(qū)進(jìn)行多維度的鑒定，以保證鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

技術(shù)研發(fā)人員：趙東良,譚文長
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京大學(xué)深圳研究生院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30