本發(fā)明涉及中藥分析檢測，涉及一種黑芝麻配方顆粒制劑的特征圖譜構(gòu)建方法、質(zhì)量檢測方法、含量測定方法。

背景技術(shù)：

1、黑芝麻為脂麻科植物脂麻sesamumindicum?l.的干燥成熟種子。本品性平，味甘，歸肝、腎、大腸經(jīng)。屬于滋補類中草藥，具有補肝腎，益精血，潤腸燥的功效。用于精血虧虛，頭暈眼花，耳鳴耳聾，須發(fā)早白，病后脫發(fā)，腸燥便秘。該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國藥典》2020年版一部，其中在黑芝麻項下無特征圖譜及含量測定檢測方法。目前，對于黑芝麻質(zhì)量研究文獻較少，多為黑芝麻化學(xué)成分及藥理作用研究，而關(guān)于黑芝麻制劑的研究更少，因此建立黑芝麻制劑的特征圖譜及含量測定檢測方法，為全面建立黑芝麻制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

2、目前，關(guān)于黑芝麻配方顆粒的特征圖譜研究中，存在檢測時間長、色譜峰較少，各特征峰分離效果不佳，含量測定中檢測方法較為復(fù)雜的缺陷，難以對黑芝麻制劑進行全面的質(zhì)量控制和有效成分含量測定。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、因此，本發(fā)明要解決的第一個技術(shù)問題在于提供一種黑芝麻制劑的特征圖譜構(gòu)建方法，所述特征圖譜方法能夠?qū)谥ヂ橹苿┻M行整體的質(zhì)量控制和鑒別，為全面建立黑芝麻配方顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

2、本發(fā)明要解決的第二個技術(shù)問題為提供一種黑芝麻制劑的含量檢測方法，不僅針對黑芝麻制劑中的的木脂素類成分建立含量測定指標(biāo)，并且針對含量較高的油脂類成分油酸、亞油酸含量建立檢測方法，該方法可簡便、快速、高效測定黑芝麻中有效成分含量。

3、本發(fā)明披露的實施方式涉及一種黑芝麻制劑的的特征圖譜構(gòu)建方法，包括采用超高效液相色譜法檢測，色譜條件包括：

4、以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，水為流動相b，進行梯度洗脫，洗脫程序如下：

5、

6、在一些實施方式中，所述色譜條件還包括如下條件中的至少一項：

7、1)、流速為每分鐘0.28～0.32ml；可選的，流速為每分鐘0.3ml；

8、2)、柱溫為33～37℃；可選的，柱溫為35℃；

9、3)、檢測波長為285nm～289nm；可選的，檢測波長為287nm；

10、4)、進樣量為1～3μl；可選的，進樣量為2μl；

11、5)、色譜柱規(guī)格為柱長為100mm，內(nèi)徑為2.1mm，粒徑為1.7μm。

12、在一些實施方式中，還包括供試品溶液的制備，包括：取供試品，加入提取溶劑，提取，固液分離，取液體。

13、在一些實施方式中，所述供試品溶液的制備包括如下條件中的至少一項：

14、1)、提取溶劑為水、30～100v/v％的甲醇或其水溶液、或30～100v/v％的乙醇或其水溶液；可選的，選擇70v/v％甲醇水溶液；

15、2)、提取步驟中采用的提取方式為超聲提取或回流提?。?/p>

16、3)、提取步驟中提取的時間為20-40min；

17、4)、供試品和提取溶劑的質(zhì)量體積比為0.5g:15～50ml。

18、在一些實施方式中，還包括參照物溶液的制備，包括：

19、對照藥材溶液制備：取對照藥材，加入提取溶劑，提取，固液分離，濾液蒸干，加復(fù)溶劑，取液體；

20、和/或，對照品溶液制備：取芝麻素對照品，加入溶劑制成1ml含20～40μg的溶液；可選的，為1ml含30μg的溶液；可選的，溶劑為50～100v/v％的甲醇或其水溶液；可選的，選擇70v/v％的甲醇水溶液。

21、在一些實施方式中，所述對照藥材溶液制備包括如下條件中的至少一項：

22、1)、提取溶劑為水、30～100v/v％的甲醇或其水溶液、或30～100v/v％的乙醇或其水溶液；

23、2)、提取步驟中采用的提取方式為超聲提取或回流提??；

24、3)、提取步驟中提取的次數(shù)為1～2次；

25、3)、提取步驟中提取的時間為20-40min；

26、4)、對照藥材和提取溶劑的質(zhì)量體積比為2g:25～50ml；

27、5)、復(fù)溶溶劑為50～100v/v％的甲醇或其水溶液；可選的，選擇70v/v％的甲醇水溶液；

28、6)、對照藥材和復(fù)溶溶劑的質(zhì)量體積比為2g:5～10ml。

29、本發(fā)明披露的實施方式涉及一種黑芝麻制劑的含量檢測方法，取供試品溶液和參照物溶液，分別采用所述的黑芝麻制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法中的超高效液相色譜法檢測；

30、對照品包括芝麻素。

31、在一些實施方式中，還包括油酸和/或亞油酸的含量檢測方法，包括采用超高效液相色譜法檢測，色譜條件包括：

32、以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相a，0.08～0.12v/v％乙酸溶液為流動相b，流動相a和流動相b的體積比79～81:21～19比例進行洗脫；

33、可選的，所述色譜條件還包括如下條件中的至少一項：

34、1)、流速為每分鐘0.28～0.32ml；可選的，流速為每分鐘0.3ml；

35、2)、柱溫為38～42℃；可選的，柱溫為40℃；

36、3)、檢測波長為203nm～207nm；可選的，檢測波長為205nm；

37、4)、進樣量為1～5μl；可選的，進樣量為3μl；

38、5)、色譜柱規(guī)格為柱長為100mm，內(nèi)徑為2.1mm，粒徑為1.7μm；

39、可選的，還包括供試品溶液制備：取供試品，加入提取溶劑，提取，固液分離，取液體；

40、可選的，所述供試品溶液的制備包括如下條件中的至少一項：

41、1)、提取溶劑為水、50～100v/v％的甲醇或其水溶液、或50～100v/v％的乙醇或其水溶液；可選的，選擇甲醇；

42、2)、提取步驟中采用的提取方式為超聲提取或回流提取；

43、3)、提取步驟中提取的時間為20-40min；

44、4)、供試品和提取溶劑的質(zhì)量體積比為0.2g:10～20ml；

45、可選的，還包括對照品溶液制備：取油酸對照品、亞油酸對照品，加溶劑制成每1ml含油酸65～75μg、亞油酸75～85μg的混合溶液；

46、可選的，所述溶劑為水、30～100v/v％的甲醇或其水溶液、或30～100v/v％的乙醇或其水溶液。

47、本發(fā)明披露的實施方式涉及一種黑芝麻制劑的質(zhì)量檢測方法，包括將待測樣品的特征圖譜與黑芝麻制劑的對照特征圖譜進行比較的步驟；

48、所述待測樣品的特征圖譜為按照所述的構(gòu)建方法構(gòu)建得到；

49、所述黑芝麻制劑的對照特征圖譜選自如下(1)-(2)中的任意一項：

50、(1)其具有7個共有特征峰，與芝麻素對照品參照物峰相對應(yīng)的峰6為s峰，計算峰1-5、峰7與s峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±10％范圍內(nèi)，峰1-5、峰7的規(guī)定值依次為：0.42、0.57、0.66、0.71、0.75、1.05；

51、(2)使用至少一批次黑芝麻制劑標(biāo)準(zhǔn)品按照所述的構(gòu)建方法得到的特征圖譜通過平均值或者中位數(shù)法制成對照特征圖譜。

52、在一些實施方式中，在(1)中，峰6對應(yīng)芝麻素；峰7對應(yīng)芝麻林素。

53、在一些實施方式中，黑芝麻制劑包括黑芝麻配方顆粒、水提物等。

54、本發(fā)明技術(shù)方案，具有如下優(yōu)點：

55、1.本發(fā)明提供的一種黑芝麻制劑的特征圖譜構(gòu)建方法，包括采用超高效液相色譜法檢測，色譜條件包括：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，水為流動相b，進行梯度洗脫，洗脫程序為：0～3分鐘，流動相a的比例為30％v/v→35％v/v，流動相b的比例為70％v/v→65％v/v；3～7分鐘，流動相a的比例為35％v/v→40％v/v，流動相b的比例為65％v/v→60％v/v，7～9分鐘，流動相a的比例為40％v/v→52％v/v，流動相b的比例為60％v/v→48％v/v，9～13分鐘，流動相a的比例為52％v/v→70％v/v，流動相b的比例為48％v/v→30％v/v，13～18分鐘，流動相a的比例為70％v/v→90％v/v，流動相b的比例為30％v/v→10％v/v，18～19分鐘，流動相a的比例為90％v/v→30％v/v，流動相b的比例為10％v/v→70％v/v；上述方法所構(gòu)建的特征圖譜中特征峰和指認(rèn)成分較多，能夠全面地反應(yīng)樣品的特征峰信息，峰型好，分離度好，精度高、重現(xiàn)性好，專屬性強，能夠全面的對黑芝麻制劑進行質(zhì)量檢測，且檢測時間短。

56、2.本發(fā)明提供的一種黑芝麻制劑的含量檢測方法，取供試品溶液和參照物溶液，分別采用所述的黑芝麻制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法中的超高效液相色譜法檢測；對照品包括芝麻素；上述方法檢測黑芝麻制劑中有效成分芝麻素含量，準(zhǔn)確度高，精密度高，專屬性強，線性范圍寬，相關(guān)性高，耐用性強。

57、進一步的，還包括黑芝麻制劑中油酸、亞油酸的含量測定方法，檢測方法采用超高效液相色譜方法，檢測方法簡單，易操作，且同樣的檢測有效成分油酸、亞油酸含量，準(zhǔn)確度高，精密度高，專屬性強，線性范圍寬，相關(guān)性高，耐用性強。