本發(fā)明涉及血糖測定，具體涉及一種測定血清葡萄糖濃度的方法。

背景技術：

1、血清葡萄糖測定主要是通過化驗血清當中葡萄糖的含量，從而達到了解葡萄糖代謝是否正常的目的。血清葡萄糖就是血糖，主要是指血液當中葡萄糖的濃度，血清葡萄糖主要來源于食物，比如淀粉、乳糖、麥芽糖、肉內(nèi)肌糖原、甘蔗等等，這一類的物質(zhì)進入人體之后會被人體消化吸收轉(zhuǎn)化為葡萄糖，被人體儲存在肝臟或者肌肉內(nèi)，會通過血液的方式給輸送到組織器官中氧化分解，為人體提供充足的生命活動能量。正常情況下，血清葡萄糖的正常值應在3.89-6.11mmol/l，葡萄糖的數(shù)值如果不在此范圍內(nèi)，則說明葡萄糖代謝異常，當空腹的血糖超過此范圍時，一般會被診斷為糖尿病或糖尿病前期，如果血糖值低于正常范圍則說明消耗過多。

2、傳統(tǒng)葡萄糖濃度測定方法有高效液相色譜法、離子色譜法、分光光度法、生物傳感器法、熒光法等；碘化鉀作轉(zhuǎn)化物質(zhì)，基于羅丹明系列熒光猝滅法測定血清葡萄糖濃度，最低檢測限1.0×10-8?mol/l，然而過程復雜，中間不確定性因素增加。目前血糖的檢測方法通常使用試劑盒法，以雙酶法為代表，在醫(yī)療衛(wèi)生、食品檢驗檢疫等領域得到廣泛應用。通過葡萄糖氧化酶(god)?催化氧化葡萄糖生成h2o2，在過氧化酶催化作用下，h2o2進一步與4-氨基安替比林/苯酚發(fā)生顯色反應，顯色液在可見光區(qū)500nm?波長處吸光度決定血樣葡萄糖濃度。然而該試劑盒選用兩種酶，導致成本增加，難以保存，4-氨基安替比林屬于芳香伯胺類物質(zhì)，具有急性毒性和致畸性，摩爾吸光系數(shù)偏小，光靈敏性差存放時段有限；苯酚以第三催化劑形式出現(xiàn)，本身具有還原性，更易被空氣氧化；易受血清本色影響，全過程用到6種試劑，操作過程繁瑣，系統(tǒng)誤差增加。

3、針對上述問題，亟需本領域技術人員提出一種測試過程簡單、成本低廉、穩(wěn)定安全、系統(tǒng)誤差小以及不受血清本色影響的測定血清葡萄糖濃度的方法。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明針對上述技術問題，提供了一種測定血清葡萄糖濃度的方法。解決了現(xiàn)有技術中過程復雜、成本高昂、不穩(wěn)定、有毒、系統(tǒng)誤差過大且易受血清本色影響的問題。

2、本發(fā)明的一種測定血清葡萄糖濃度的方法，包括如下步驟：

3、s1：配置溶液：分別配置15ku/l的葡萄糖氧化酶、1mmol/l葡萄糖標準溶液、0.1mol/l的碘化鉀溶液、0.5mol/l的硫酸溶液；

4、s2：建立葡萄糖工作標準曲線：用分光光度計測定不同濃度的葡萄糖反應液在選定波長360nm處的吸光度值,由吸光度值與葡萄糖濃度之間的對應關系建立葡萄糖工作曲線，計算葡萄糖工作曲線方程斜率k；（l/mmol·cm）

5、s3：采集血清標本：血清標本包括臨床血清（用于臨床檢驗）和質(zhì)控血清（用于實驗教學）；

6、s4：分析檢測：將血清標本和葡萄糖氧化酶試劑加入10?ml比色管中，37℃孵育30min，再加入s1中?ki溶液和硫酸溶液，37℃反應20min后，定容，蒸餾水作參比，測定其在步驟s2所選波長（360nm）處的吸光度值，并扣除酶空白；

7、s5：計算血清中葡萄糖濃度：將步驟s4所測吸光度值與步驟s2所建立工作曲線進行對照，根據(jù)計算血清中葡萄糖濃度，其中a為吸光度；k為葡萄糖工作曲線方程斜率，k=11.54l/mmol·cm；v為反應體系總體積；v?為樣品體積。

8、進一步地，所述步驟s1中配置15ku/l的葡萄糖氧化酶的具體步驟為稱取30mg葡萄糖氧化酶標準品(50u/mg，sigma公司），用10ml二次蒸餾水溶解，4℃低溫保存。

9、進一步地，所述步驟s1中配置1mmol/l葡萄糖標準溶液的具體步驟為稱取一水葡萄糖固體19.8mg，用100ml二次蒸餾水溶解。

10、進一步地，所述步驟s1中配置0.1mol/l的碘化鉀溶液的具體步驟為稱取碘化鉀固體1g，直接放到小試劑瓶，加水到60?ml標線，振蕩溶解，隨用隨配。

11、進一步地，所述步驟s1中配置0.5mol/l的硫酸溶液的具體步驟為準確吸取2.7?ml濃硫酸至100?ml超純水中混勻。

12、進一步地，所述步驟s4中將100μl血清標本和50μl的15ku/l葡萄糖氧化酶溶液加入10?ml比色管中，37℃孵育30?min，再加入s1中?0.50ml的ki溶液和2.00ml的硫酸溶液，37℃反應20min?后，定容，蒸餾水作參比，測定其在步驟s2所選波長（360nm）處的吸光度值，扣除酶空白。

13、更進一步地，所述步驟s4中測定吸光度值a的過程中光程d為1cm，入射光波長λ為360nm。

14、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果：

15、本發(fā)明方法中使用葡萄糖氧化酶催化氧化血清中的葡萄糖從而產(chǎn)生h2o2，在硫酸介質(zhì)中h2o2與i-發(fā)生氧化還原反應生成i2，用紫外可見分光光度計測定吸光度，從而計算血清中葡萄糖的含量。本發(fā)明方法操作過程簡單、成本低、所使用試劑安全無害，存放時間長，適合商用試劑盒的研發(fā)；光靈敏性好，最低檢測限為2.72×10-6?mol/l；抗干擾能力強，選擇性好，可有效消除溶解氧及血清共存物質(zhì)的干擾，不受血清本色的影響。

技術特征：

1.一種測定血清葡萄糖濃度的方法，其特征在于：具體包括如下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的一種測定血清葡萄糖濃度的方法，其特征在于：所述步驟s1中配置15ku/l的葡萄糖氧化酶的具體步驟為稱取30mg葡萄糖氧化酶標準品，用10ml二次蒸餾水溶解，4℃低溫保存。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種測定血清葡萄糖濃度的方法，其特征在于：所述步驟s1中配置1mmol/l葡萄糖標準溶液的具體步驟為稱取一水葡萄糖固體19.8mg，用100ml二次蒸餾水溶解。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種測定血清葡萄糖濃度的方法，其特征在于：所述步驟s1中配置0.1mol/l的碘化鉀溶液的具體步驟為稱取碘化鉀固體1g放到小試劑瓶，加水到60?ml標線，振蕩溶解，隨用隨配。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種測定血清葡萄糖濃度的方法，其特征在于：所述步驟s1中配置0.5mol/l的硫酸溶液的具體步驟為吸取2.7?ml濃硫酸至100?ml超純水中混勻。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種測定血清葡萄糖濃度的方法，其特征在于：所述步驟s4中將100μl血清標本和50μl的葡萄糖氧化酶溶液加入10?ml比色管中，37℃孵育30?min，再加入s1中?0.5ml的ki溶液和2.00ml的硫酸溶液，37℃反應20min?后，定容，蒸餾水作參比，測定其在步驟s2所選波長處的吸光度值，扣除酶空白。

7.根據(jù)權利要求1所述的一種測定血清葡萄糖濃度的方法，其特征在于：所述步驟s4中測定吸光度值a的過程中光程d為1cm，入射光波長λ為360nm。

技術總結(jié)
本發(fā)明涉及血糖測定技術領域，公開了一種測定血清葡萄糖濃度的方法，首先分別配置15KU/L的葡萄糖氧化酶溶液、1mmol/L葡萄糖標準溶液、0.1mol/L的碘化鉀溶液、0.5mol/L的硫酸溶液，然后將采集的血清標本和葡萄糖氧化酶溶液加入比色管中進行孵育，最后加入KI溶液和硫酸溶液進行反應，測定吸光度A從而計算血清中葡萄糖的濃度。本發(fā)明方法操作過程簡單、成本低、所使用試劑安全無害，存放時間長；光靈敏性好，最低檢測限為2.72×10<supgt;?6?</supgt;mol/L，滿足臨床血糖檢測要求；穩(wěn)定性好，抗干擾能力強，測定波長選取360nm，避免血清本色的影響，酶空白作對照，將有效克服共存物質(zhì)帶來的干擾。

技術研發(fā)人員：白瑩,陳嘉琦,董娜,張愛菊,張小林
受保護的技術使用者：甘肅醫(yī)學院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/2