本發(fā)明涉及體外診斷檢測領域，具體涉及一種復溶il-1β凍干品抗原的緩沖液。

背景技術：

1、白細胞介素-1屬于巨噬細胞因子（monokine），分子量約為17kd。術語il-1是指兩種細胞因子，il-1α和il-1β，在體內，il-1主要負責急性時相反應，包括發(fā)熱、急性蛋白質合成、厭食和嗜睡，通過這些機制，il-1家族的細胞因子成為宿主抵御感染的重要組成部分。il-1β可通過誘導內皮細胞粘附分子的表達和基質細胞釋放趨化因子，促進炎癥部位炎癥細胞的募集；也可誘導多種酶的產生，介導炎癥介質前列腺素e2和no的釋放，介導局部和系統(tǒng)炎癥反應。許多自身炎癥性疾病的基礎是活性il-1β的釋放增加。如在骨關節(jié)炎患者中，il-1β刺激多種金屬蛋白酶的產生，導致結締組織破裂，并抑制膠原蛋白的產生，從而對關節(jié)軟骨產生負面影響；同時，il-1β對破骨細胞的成熟有直接和間接的刺激作用，介導關節(jié)炎中骨侵蝕的發(fā)展。因此對il-1β的體外診斷檢測具有較高的臨床應用價值。

2、而對體外免疫診斷試劑而言，質控品和校準品必不可少，il-1β抗原凍干品在體外診斷檢測中必不可少。但是il-1β抗原凍干品復溶后，穩(wěn)定性極易受到環(huán)境因素，如溫度、ph、氧化、機械力、凍融、輻射、化學品、微生物等的影響，復溶緩沖液中的成分與凍干品中含有的保護劑也可能對il-1β抗原蛋白的穩(wěn)定性產生影響，現有的il-1β抗原凍干品復溶緩沖液復溶抗原小球放置一段時間后，基本表現為性質不穩(wěn)定、信噪比偏低、有跳值現象等，不能很好的保護抗原，對樣本賦值有一定影響；在凍干品復溶到上機檢測期間，其中的il-1β抗原蛋白含量很可能發(fā)生明顯變化，導致檢測結果出現很大偏差。

3、因此，急需對il-1β抗原凍干品的復溶提出一種新的緩沖液，從而改善il-1β抗原的穩(wěn)定性、降低信噪比等，以滿足體外診斷檢測的需求。

技術實現思路

1、為解決上述問題，本發(fā)明公開了一種復溶il-1β凍干品抗原的緩沖液，主要組分包括bis-tris緩沖液、鹽類、惰性蛋白和防腐劑。此緩沖液復溶il-1β凍干品抗原后，可用于后續(xù)免疫平臺相關試驗，具有穩(wěn)定性好和信噪比高的優(yōu)點。

2、一方面，本發(fā)明提供了一種復溶il-1β凍干品抗原的緩沖液，所述緩沖液包括krovin?100。

3、krovin?100能夠提高il-1β凍干品抗原復溶的穩(wěn)定性，該復溶液可使復溶后的il-1β抗原在2-8℃及更低溫度下的穩(wěn)定性高，能夠在2-8℃及更低溫度下冷藏保存至少7天。

4、krovin?100是一種無色、微粘性，略具有芳香氣味的油狀液體，能夠與水及極性有機溶劑如乙醇、丙醇、丙二醇等混溶，具備優(yōu)良的溶解性能，能用來增溶溶解多種原料和活性成分。krovin?100由于其具有抗微生物活性的功能而通常作為防腐劑使用，可以抑制甚至清除大劑量的革蘭氏陽性菌和陰性微生物，也可以對多種常見菌如大腸桿菌e.coil、金黃色葡萄球菌起到顯著抑制作用。

5、本發(fā)明發(fā)現并論證了krovin?100對il-1β凍干品抗原具有提高穩(wěn)定性的作用，一方面是由于其抗菌效果，但是對比其他常見的防腐劑，krovin?100具有更好的提高穩(wěn)定性效果，提示其作用效果并不全部來自其抗菌性，krovin?100對其他蛋白凍干品復溶并沒有提供明顯的穩(wěn)定性，提示其作用效果很可能和krovin?100、il-1β抗原蛋白的物理化學性質相關；因此另一方面，krovin?100可能具有保護抗原蛋白三維結構、維持抗原蛋白電離狀態(tài)、減少復溶后抗原蛋白的吸附、聚集和減少抗原蛋白的靜電作用等功能，從而顯著提高il-1β凍干品抗原復溶后的穩(wěn)定性，還具有抑制復溶溶液干擾的效果，提高信噪比，這是現有技術中從未發(fā)現過的。

6、在一些方式中，所述krovin?100的ph為6.0~7.0。

7、進一步地，所述緩沖液還包括基礎緩沖液，基礎緩沖液的ph為5.8~7.2。

8、在一些方式中，所述基礎緩沖液的ph為6.0~6.8。

9、基礎緩沖液即任何一種具有緩沖功能的溶液，具有穩(wěn)定ph的作用，基礎緩沖液的濃度決定了緩沖液的ph值，基礎緩沖液中的成分以及ph對凍干品抗原復溶的穩(wěn)定性均具有一定程度的影響，合適的成分以及ph能夠起到減少分子間的相互作用，維持抗原蛋白電離狀態(tài)，從而提高復溶后的穩(wěn)定性。krovin?100具有復溶il-1β時提高穩(wěn)定性的作用，在ph6.0~6.8時的效果最佳，但是并不限定于這一ph范圍，在基礎緩沖液中由于緩沖作用能提升其穩(wěn)定性的效果。

10、在一些方式中，所述基礎緩沖液為bis-tris緩沖液：ph值介于5.8～7.2之間。

11、優(yōu)選的，基礎緩沖液的ph為6.8。在ph?6.8的條件下，緩沖液復溶il-1β凍干品抗原的穩(wěn)定性作用更強，其原因可能是：一方面，ph穩(wěn)定在6.8時，直接降低il-1β凍干品抗原的分解速率，從而提高其穩(wěn)定性；另一方面，ph6.8時krovin?100具有更好的提高穩(wěn)定性效果。

12、進一步的，所述基礎緩沖液包括mops緩沖液、pbs?緩沖液、hepes?緩神液、mes?緩沖液、tris?鹽酸緩神液、檸檬酸緩沖液、bis-tris緩沖液中的至少一種。

13、優(yōu)選的，所述基礎緩沖液包括mops緩沖液、pbs?緩沖液、hepes?緩沖液、mes?緩沖液、tris?鹽酸緩沖液、檸檬酸緩沖液、bis-tris?緩沖液中的至少一種。

14、進一步的，所述基礎緩沖液包括20-80mmol/l?bis-tris。

15、優(yōu)選的，所述基礎緩沖液包括50mmol/l?bis-tris。

16、進一步的，所述緩沖液還包括鹽類，所述鹽類包括nacl、kcl中的任意一種或多種。

17、進一步的，所述緩沖液包括0.1%~0.9%nacl、0.05%~0.2%kcl。

18、優(yōu)選的，所述緩沖液包括0.9%nacl、0.1%kcl。

19、進一步的，所述緩沖液還包括惰性蛋白，所述惰性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、酪蛋白中的至少一種。

20、進一步的，所述緩沖液包括5‰~20‰牛血清白蛋白。

21、在一些方式中，進一步研究了不同成分的緩沖液對提高il-1β凍干品抗原復溶后穩(wěn)定性的作用。實驗結果表明：當改變緩沖液體系或改變其中各成分的濃度后，均會明顯降低復溶后的穩(wěn)定性。因此可知，在提高il-1β凍干品抗原復溶后的穩(wěn)定性方面，krovin?100與特定的緩沖液成分及濃度之間存在著緊密的協同關系。本發(fā)明中的最佳配方所形成的協同作用是實現良好穩(wěn)定性的關鍵。一旦改變緩沖液體系或其中各成分的濃度，這種協同作用被打破，就會顯著降低復溶后的穩(wěn)定性。這也進一步強調了在本發(fā)明中，需要精確控制緩沖液的成分和濃度，以確保與?krovin?100?共同發(fā)揮最佳的穩(wěn)定效果，為il-1β凍干品抗原的復溶和應用提供可靠的條件保障。

22、另一方面，本發(fā)明提供了一種提高il-1β凍干品抗原復溶穩(wěn)定性的方法，將如上技術方案中任一項所述緩沖液與il-1β凍干品抗原混勻。

23、再一方面，本發(fā)明提供了一種檢測il-1β的產品，包括如上技術方案中任一項所述的復溶il-1β凍干品抗原的緩沖液。

24、所述產品可以是任何一種檢測il-1β蛋白的產品，產品形式可以是試紙條、試劑盒、分析儀等。

25、例如，以試劑盒的產品形式，該試劑盒可以是用于檢測il-1β的試劑盒，il-1β凍干品抗原作為質控品或校準品，本發(fā)明的緩沖液可作為il-1β凍干過程中的保護液。

26、外購抗原凍干品按照廠家推薦的溶解方法進行溶解，一般為純化水溶解，抗原濃度比實際用的濃度要高，需要用稀釋液稀釋濃度，如果不凍干，穩(wěn)定性差，不利于產品保存；為了產品能夠長期保存，將抗原進行凍干，凍干后抗原可保存24個月，此過程對稀釋液配方進行了篩選，本發(fā)明提供的緩沖液可以作為il-1β凍干過程中的稀釋液，既作為凍干過程的保護液。本發(fā)明提供的緩沖液能夠提高校準品或質控品的穩(wěn)定性，有利于提高檢測的準確性和靈敏度。

27、凍融會影響產品的穩(wěn)定性，用此緩沖液復溶后的校準品可以至少凍融4次。

28、再一方面，本發(fā)明提供了一種krovin?100用于制備提高il-1β凍干品抗原復溶穩(wěn)定性的試劑的用途。

29、本發(fā)明的有益效果包括：

30、1、首次發(fā)現了krovin?100對il-1β凍干品抗原復溶穩(wěn)定性的提升作用，復溶后溶液可以在2-8℃及更低溫度的環(huán)境下冷藏保存至少7天，一方面il-1β抗原蛋白穩(wěn)定性的提升有利于檢測準確性的提升，另一方面檢測人員可以隨時取用復溶后溶液而不是檢測一次配制一次，方便檢測人員操作的同時，有利于減少人工操作誤差；

31、2、結合基礎緩沖液、鹽類、惰性蛋白和krovin?100以配制復溶il-1β凍干品抗原的緩沖液，優(yōu)化ph、濃度等以達到最佳效果；

32、3、緩沖液的各種成分均為常見成分，且避免使用常見的復溶液中的表面活性劑等化學試劑，緩沖液無毒，試劑成本低，具備巨大應用潛力。

33、4、用此緩沖液復溶后的il-1β凍干品抗原凍融4次后，抗原穩(wěn)定性較好。