本發(fā)明涉及生物，具體涉及一種pd-l1免疫組化質(zhì)控品及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、pd-l1是一種在多種腫瘤細(xì)胞表面進(jìn)行表達(dá)的蛋白，它通過(guò)與t細(xì)胞表面的pd-1受體結(jié)合，發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用，抑制t細(xì)胞的激活、分化和增殖，使得腫瘤細(xì)胞逃避t細(xì)胞殺傷，獲得免疫逃避，是腫瘤逃逸免疫監(jiān)視的一種機(jī)制。通過(guò)檢測(cè)腫瘤組織中pd-l1的表達(dá)水平，能夠幫助評(píng)估患者對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如抗pd-1或抗pd-l1抗體）的潛在反應(yīng)，高pd-l1表達(dá)的患者被視為免疫療法的潛在候選者。

2、免疫組織化學(xué)（ihc，簡(jiǎn)稱(chēng)免疫組化）檢測(cè)是評(píng)估腫瘤組織pd-l1表達(dá)狀態(tài)的一種有效方法，其廣泛應(yīng)用于包括非小細(xì)胞肺癌等多種惡性腫瘤中。免疫組織化學(xué)檢測(cè)通過(guò)使用針對(duì)pd-l1的特異性抗體，對(duì)腫瘤組織中的pd-l1表達(dá)進(jìn)行定性和定量分析。ihc檢測(cè)方法的技術(shù)核心是通過(guò)染色技術(shù)可視化pd-l1蛋白的位置、強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞的比例，為臨床提供腫瘤免疫治療的潛在評(píng)估依據(jù)。

3、目前，ihc檢測(cè)方法在檢測(cè)過(guò)程中需要提供穩(wěn)定的質(zhì)控品用作參考和對(duì)比；但是，市場(chǎng)上作為質(zhì)控品的pd-l1免疫組化試劑盒質(zhì)量良莠不齊，并且有些質(zhì)控品的質(zhì)控精度不高，有的質(zhì)控品只能進(jìn)行定性參考；同時(shí)，大多數(shù)質(zhì)控品的樣本主要來(lái)源于腫瘤患者的腫瘤組織，樣本來(lái)源具有局限性。

4、因此，如何解決上述技術(shù)問(wèn)題，是目前本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所面臨的技術(shù)問(wèn)題。

5、公開(kāi)于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種pd-l1免疫組化質(zhì)控品及其制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

2、一種pd-l1免疫組化質(zhì)控品，包括由多個(gè)不同種類(lèi)的腫瘤細(xì)胞制備的細(xì)胞切片；細(xì)胞切片包括由不同顏色標(biāo)記的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。

3、優(yōu)選的，陽(yáng)性質(zhì)控品包括免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度分別為3+和2+的細(xì)胞切片；陰性質(zhì)控品包括免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為0的細(xì)胞切片。

4、優(yōu)選的，陽(yáng)性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺癌細(xì)胞hcc1954和人前列腺癌細(xì)胞pc-3；陰性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺管癌細(xì)胞t47d；

5、人乳腺癌細(xì)胞hcc1954制備細(xì)胞切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為3+；人前列腺癌細(xì)胞pc-3制備細(xì)胞切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為2+；人乳腺管癌細(xì)胞t47d制備細(xì)胞切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為0。

6、具體的，人乳腺癌細(xì)胞hcc1954、人前列腺癌細(xì)胞pc-3、人乳腺管癌細(xì)胞t47d的細(xì)胞切片樣品的免疫組織化學(xué)染色比例分別為tc>10%，1%≤tc＜10%，tc＜1%。

7、優(yōu)選的，細(xì)胞切片采用封閉緩沖液浸泡進(jìn)行浸泡；封閉緩沖液為pbs緩沖溶液、純化水、牛血清白蛋白（bsa）中的一種或多種；進(jìn)一步的，bsa溶液濃度優(yōu)選5%；浸泡時(shí)間優(yōu)選30min。

8、優(yōu)選的，封閉緩沖液為3-7%bsa溶液；細(xì)胞切片在3-7%bsa溶液中浸泡的時(shí)間為20-40min。

9、一種如上述所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品的制備方法，包括以下步驟：

10、s61：分別培養(yǎng)不同種類(lèi)用于制備陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品的腫瘤細(xì)胞株；

11、s62：制備帶不同顏色標(biāo)劑的瓊脂糖溶液；

12、s63：將培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞經(jīng)離心去除上清液后的細(xì)胞沉淀，分別使用不同顏色標(biāo)劑的瓊脂糖溶液進(jìn)行包裹，得到對(duì)應(yīng)的細(xì)胞塊；

13、s64：將細(xì)胞塊進(jìn)行固定、脫水、浸蠟和包埋，得到細(xì)胞蠟塊；

14、s65：將細(xì)胞蠟塊切片后置于3-7%bsa溶液中浸泡20-40min，得到pd-l1免疫組化質(zhì)控品；進(jìn)一步的，bsa溶液濃度優(yōu)選5%；浸泡時(shí)間優(yōu)選30min。

15、具體的，pd-l1免疫組化質(zhì)控品的制備方法還包括：切片、烤片、脫蠟水化、染色、脫水、封片；切片條件厚度優(yōu)選為3-5?μm；染色步驟中采用蘇木素和伊紅染色進(jìn)行染色。

16、優(yōu)選的，陽(yáng)性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺癌細(xì)胞hcc1954和人前列腺癌細(xì)胞pc-3；陰性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺管癌細(xì)胞t47d；

17、人乳腺癌細(xì)胞hcc1954制備細(xì)胞切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為3+；人前列腺癌細(xì)胞pc-3制備細(xì)胞切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為2+；人乳腺管癌細(xì)胞t47d制備細(xì)胞切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為0。

18、優(yōu)選的，步驟s64中胞塊進(jìn)行固定、脫水的方法包括：細(xì)胞經(jīng)酶消化后用質(zhì)量濃度為10%的福爾馬林溶液進(jìn)行固定7-9h；然后置于燒杯中使用流水浸泡2h，接著依次置于60wt%、75wt?%、85wt?%、95wt?%的乙醇中進(jìn)行初步脫水，每個(gè)濃度脫水時(shí)間為1-2h；再置于無(wú)水乙醇中脫水2次，每次脫水1-2h；置于二甲苯中脫水2次，每次脫水1-2h；置于60℃石蠟中脫水2次，第1次1-2h，第2次2-3h。

19、一種pd-l1免疫組化試劑盒，包括上述所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品；或包括采用上述所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品的制備方法制備的pd-l1免疫組化質(zhì)控品。

20、優(yōu)選的，pd-l1免疫組化試劑盒還包括其他用于ihc檢測(cè)的試劑；其他用于ihc檢測(cè)的試劑包括：二甲苯、乙醇、抗原修復(fù)液、過(guò)氧化氫、免疫顯色試劑、dab顯色試劑、蘇木素、中性樹(shù)膠中的一種或多種。

21、本發(fā)明實(shí)施例提供的一種pd-l1免疫組化質(zhì)控品及其制備方法，具有以下有益效果：

22、1.本發(fā)明中，創(chuàng)造性的采用不同腫瘤細(xì)胞作為質(zhì)控品的原料，質(zhì)控品能夠高效快速制備，克服了因采用人體組織樣本來(lái)源的局限性；

23、2.使用bsa封閉緩沖液浸泡切片，可實(shí)現(xiàn)質(zhì)控品的長(zhǎng)期穩(wěn)定生產(chǎn)，降低了染色背景并增強(qiáng)了染色效果；

24、3.此外，通過(guò)制備包含各種比例和不同染色強(qiáng)度的細(xì)胞切片，可以保證對(duì)抗體的染色進(jìn)行質(zhì)控，也可以對(duì)精準(zhǔn)判讀提供指導(dǎo)，即為抗體的染色提供全面精準(zhǔn)的質(zhì)控和判讀指導(dǎo)，有效的排除假陰性、假陽(yáng)性，對(duì)臨床的意義重大。

技術(shù)特征：

1.一種pd-l1免疫組化質(zhì)控品，其特征在于，包括由多個(gè)不同種類(lèi)的腫瘤細(xì)胞制備的細(xì)胞切片；細(xì)胞切片包括由不同顏色標(biāo)記的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品，其特征在于，陽(yáng)性質(zhì)控品包括免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度分別為3+和2+的細(xì)胞切片；陰性質(zhì)控品包括免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度為0的細(xì)胞切片。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品，其特征在于，陽(yáng)性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺癌細(xì)胞和人前列腺癌細(xì)胞；陰性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺管癌細(xì)胞；

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品，其特征在于，細(xì)胞切片采用封閉緩沖液浸泡進(jìn)行浸泡。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品，其特征在于，封閉緩沖液為3-7%bsa溶液；細(xì)胞切片在3-7%bsa溶液中浸泡的時(shí)間為20-40min。

6.一種如權(quán)利要求1所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品的制備方法，其特征在于，陽(yáng)性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺癌細(xì)胞和人前列腺癌細(xì)胞；陰性質(zhì)控品中的腫瘤細(xì)胞選自人乳腺管癌細(xì)胞；

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的pd-l1免疫組化質(zhì)控品的制備方法，其特征在于，步驟s64中胞塊進(jìn)行固定、脫水的方法包括：細(xì)胞經(jīng)酶消化后用質(zhì)量濃度為10%的福爾馬林溶液進(jìn)行固定7-9h；然后置于燒杯中使用流水浸泡2h，接著依次置于60wt?%、75wt?%、85wt?%、95wt?%的乙醇中進(jìn)行初步脫水，每個(gè)濃度脫水時(shí)間為1-2h；再置于無(wú)水乙醇中脫水2次，每次脫水1-2h；置于二甲苯中脫水2次，每次脫水1-2h；置于60℃石蠟中脫水2次，第1次1-2h，第2次2-3h。

9.?一種?pd-l1?免疫組化試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求?1-5?任一項(xiàng)所述的?pd-l1?免疫組化質(zhì)控品；或包括采用權(quán)利要求?6-8任一項(xiàng)所述的?pd-l1?免疫組化質(zhì)控品的制備方法制備的?pd-l1免疫組化質(zhì)控品。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的pd-l1免疫組化試劑盒，其特征在于，還包括其他用于ihc檢測(cè)的試劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種PD?L1免疫組化質(zhì)控品及其制備方法，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。一種PD?L1免疫組化質(zhì)控品，包括由多個(gè)不同種類(lèi)的腫瘤細(xì)胞制備的細(xì)胞切片；細(xì)胞切片包括由不同顏色標(biāo)記的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。本發(fā)明中，創(chuàng)造性的采用不同腫瘤細(xì)胞作為質(zhì)控品的原料，質(zhì)控品能夠高效快速制備，克服了因采用人體組織樣本來(lái)源的局限性；使用BSA封閉緩沖液浸泡切片，可實(shí)現(xiàn)質(zhì)控品的長(zhǎng)期穩(wěn)定生產(chǎn)，降低了染色背景并增強(qiáng)了染色效果；此外，通過(guò)制備包含各種比例和不同染色強(qiáng)度的細(xì)胞切片，可保證對(duì)抗體的染色進(jìn)行質(zhì)控，也可以對(duì)精準(zhǔn)判讀提供指導(dǎo)，即為抗體的染色提供全面精準(zhǔn)的質(zhì)控和判讀指導(dǎo)，有效的排除假陰性、假陽(yáng)性，對(duì)臨床的意義重大。

技術(shù)研發(fā)人員：于永娟,王方杰,張亞飛
受保護(hù)的技術(shù)使用者：邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究（蘇州）有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9