專利名稱:免疫測定方法和裝置的制作方法
本發(fā)明涉及配體受體免疫測定。特別是涉及免疫測定過程，尤其是涉及應(yīng)用單克隆抗體的免疫測定過程。另一方面，本發(fā)明也涉及為進(jìn)行這些測定所需的裝置。
近20年來，免疫測定方法已為體外檢測與疾病或臨床有意義的其它物理情況有關(guān)的各種各樣抗原提供了敏感的診斷工具。最初這些不同的測定法應(yīng)用的是結(jié)合到固相上的多克隆抗體。在這些測定中，標(biāo)記抗原的溶液可與待測樣品中的抗原直接地競爭固相抗體或按順序加入抗體中。結(jié)合到固相上標(biāo)記抗原的程度或在液相中所檢測到的標(biāo)記抗原的量可用來測定待分析樣品中抗原的存在和其含量。
后來又有了非競爭性免疫測量分析法。在這些測定中同樣亦應(yīng)用了結(jié)合到固相上的多克隆抗體制劑。將懷凝含有抗原的樣品與固相接觸以使該抗原與固相上的抗體結(jié)合。典型的步驟是，在孵育后，把樣品從固相分離出來，洗滌固相，然后將固相與另一個已用放射性核素、酶或熒光標(biāo)記的多隆抗體孵育。
經(jīng)此第二次孵育后，將未結(jié)合的標(biāo)記抗體與固相分開，在此抗體抗原抗體夾心測定法系統(tǒng)中，檢測液相中或結(jié)合到固相上的標(biāo)記抗體的量就可測定試驗樣品中抗原的存在和/或含量。
新近，單克隆抗體的應(yīng)用已使免疫測定方法有所改良。例如美國4，376，110敘述了應(yīng)用成對單克隆抗體的兩位點(two-site)免疫測量法。其一結(jié)合到固相上，另一被標(biāo)記以供檢測用。能識別一抗原上不同表位點的單克隆抗體對的應(yīng)用，使同時進(jìn)行多個免疫測定分析成為可能，在此分析中抗原和標(biāo)記抗體的孵育無需先有方法中的多次中間洗滌步驟。
在前述諸方法中，固相抗體一般結(jié)合到小珠或小顆?；虮煌糠蟮揭槐砻嫔?。所有這些方法的特征都是要求固相和標(biāo)記抗體有一定的孵育期，因此，即使是同時進(jìn)行多個測定也是耗時的。事實上，完成一次測定通常也需要幾個小時。而且需要堅持耗時的孵育步驟及多次地用測量好的試劑洗滌以致這些方法主要限于在大醫(yī)院和咨詢臨床實驗室中應(yīng)用，因這些地方擁有訓(xùn)練有素的技術(shù)人員和復(fù)雜儀器設(shè)備可進(jìn)行這些測定。其結(jié)果導(dǎo)致應(yīng)用相對簡單的，使之可在內(nèi)科醫(yī)生辦公室或甚至以現(xiàn)成出售的供一般家庭保健計劃中使用的以簡單快速的方法進(jìn)行免疫測定的裝置，這種需求一直得不到滿足。
本發(fā)明提供了簡單和迅速的進(jìn)行配體受體測定的一個方法，應(yīng)用一簡單設(shè)備和不需要長的孵育期階段使用核酸寡聚體雜交的免疫和免疫測量分析法。本發(fā)明的裝置的第一部分是多孔板諸如膜或濾器，待檢測靶分析物(配體)的受體結(jié)合或固定在此膜或濾器上、或抗受體結(jié)合或固定到膜或濾器上，或多孔膜能將待測樣品中的細(xì)胞或細(xì)胞碎片分離出來，藉此將待檢配體結(jié)合到多孔膜上。例如，在免疫和免疫測量分析法中，當(dāng)配體是一抗原時，則抗體，最好是單克隆抗體，結(jié)合到多孔膜上而作為受體。該裝置的第二部分是吸收部件，它具有毛細(xì)吸管通道并通過此通道一般以橫向的方式到達(dá)其上和下表面。正如此處所用的，術(shù)語“毛細(xì)吸管”包括一毛細(xì)吸管或另外的渠道或通道，它能使液體通過吸收裝置。此第二部分與多孔的第一部分是以毛細(xì)吸管相連通的，而且選擇性的使其具有一定的毛細(xì)吸管徑大小，雖然當(dāng)樣品和在該測定中隨后所加的樣品的流體靜壓力不足以引起通過第一部分而流動的情況下，但在不借助于外部裝置仍可以引起液體通過第一部分而流動。第二部分亦可為第一部分起支持作用。
本發(fā)明的測定包括下述步驟，即先將液體樣品加到多孔膜上，當(dāng)液體通過該處而流動時，結(jié)合在多孔膜上的受體結(jié)合樣品中的可溶性或懸浮的配體，其結(jié)合速度明顯較不通過該多孔膜流動時所觀察到的速度要快，或者，假如配體位于細(xì)胞的表面，則細(xì)胞的物質(zhì)或被固定到多孔膜上的受體所結(jié)合或者當(dāng)樣品流經(jīng)它時被其捕獲。在本發(fā)明的最好實施例中，加入樣品之后加入另外一個配體的受體溶液，該受體是被標(biāo)記了的，以使檢測可以進(jìn)行。例如，在檢測抗原的免疫測量分析中，使用抗體溶液，最好是使用單克隆抗體，它結(jié)合在抗原的一個表位上，該表位不干擾結(jié)合第一受體。雖然其它的標(biāo)記物例如放射核素或熒光標(biāo)記亦可應(yīng)用，但最好是酶標(biāo)記?？贵w的結(jié)合到從樣品中所提取出的抗原上，是通過結(jié)合抗體或藉助捕獲細(xì)胞物質(zhì)。標(biāo)記抗體可立即加入，或短暫孵育后加入使抗原與標(biāo)記抗體的結(jié)合較多，通過洗滌除去非結(jié)合的標(biāo)記抗體，這樣做可增加敏感性。多孔膜上標(biāo)記抗體的存在經(jīng)測出即提示樣品中待測靶抗原的存在。在用酶標(biāo)記的測定中，將可形成顏色反應(yīng)的底物溶液加到多孔膜上，在溶液通過時，底物即與酶起反應(yīng)。
圖1是根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行免疫測定所用裝置的橫切面。
圖2是在本發(fā)明中應(yīng)用的為從待檢樣品中除去抗原的多孔膜的頂視圖。
如上所指出的，本發(fā)明的裝置的第一部分是一多孔膜或濾器，配體的受體或抗受體結(jié)合在其上，或它能從分析樣品中濾過細(xì)胞物質(zhì)，如果配體與細(xì)胞物質(zhì)相聯(lián)合的話。在后一種情況下，所選擇的膜或濾器的孔徑大小應(yīng)適于此分離目的。各種各樣濾器部件中的任何一種均可應(yīng)用，包括玻璃纖維濾器和各種合成的或天然物質(zhì)的濾器。
當(dāng)多孔膜結(jié)合有受體時，該受體能選擇性的直接地與相應(yīng)配體結(jié)合。例如，假如配體是一個抗原，則該受體可以是一個抗體，最好是用單克隆抗體。假如待測配體是一個抗體，那么受體可能是一個抗原或抗-抗體。假如配體是一個酶，那么受體可能是酶的受體。假如配體是一核酸，例如RNA或DNA，那么受體可能是DNA或RNA的互補寡聚體。在最好的具體實施方案中，第一部分是一個膜或濾器，抗體制劑共價地結(jié)合在其上。縱然來自抗血清的多克隆抗體也可作使用，但最好是單克隆抗體。多克隆和單克隆抗體的制備技術(shù)已為人們所熟知，此地就無需再引證了。
選作多孔膜的材料應(yīng)是能使受體結(jié)合的材料，或假如應(yīng)用抗受體的話，也能使抗體結(jié)合在其上。在受體或抗受體為蛋白質(zhì)，即抗體或抗原的情況下，最好以具有氨基殘基的尼龍作為材料或已用化學(xué)方法將這種氨基殘基引入到尼龍分子中，通過眾所周知的戊二醛法使一蛋白質(zhì)與之偶合。抗體能通過氨基硅烷偶合到玻璃維維上。也可應(yīng)用直接地或通過媒介物而偶合到受體或抗受體上的其它一些天然或合成材料。
上面強調(diào)了受體或抗受體化學(xué)地結(jié)合到多孔膜上。但是，在適當(dāng)?shù)那闆r下，受體或抗受體亦可涂敷在多孔膜表面上或是以顆粒的形式被捕獲在多孔膜的相互作用之內(nèi)。因此，如同在本發(fā)明中所用的那樣，術(shù)語“結(jié)合”意指將受體或抗-受體固定到多孔膜上而采用的任何手段。
該裝置的第二部分是一吸收部件，具有毛細(xì)吸管通道，一般是橫向貫通上和下表面。第二部分與第一部分以能使第一部分的孔或間隙與第二部分的毛細(xì)吸管之間直接溝通的方式裝配成一體。這樣，當(dāng)一液體加到第一部分中并使之飽和時，該液體就能吸進(jìn)收部件中。結(jié)果，當(dāng)一液體樣品加到第一部件的上表面時，縱然該液體的靜水壓力很低也能流經(jīng)第一部件，而一般情況下也不施加壓力迫其通過或真空驅(qū)其通過則它是不可能通過第一部件的。
制作第一部件材料的選擇并不嚴(yán)格，各種各樣纖維濾器材料均可應(yīng)用。一個有用的材料是像香煙過濾嘴中那樣定向的醋酸纖維素纖維。本工藝中技術(shù)熟練的人們將會認(rèn)識到也可用聚酯，聚烯烴或其它材料所造的吸吸部件來代替醋酸纖維素。
現(xiàn)在讓我們看圖1，它顯示出一設(shè)備的橫切面，它與本發(fā)明中的裝置一起用于進(jìn)行各種測定。圖1中裝備著一圓筒形容器10(雖然它可以是任何其它適當(dāng)?shù)男螤?，它有一上開口12，以側(cè)壁14所確定。該容器可用玻璃，塑料或其它適合的材料所制成。如圖1所示，容器10亦有一下井口16，一活動的塞子18可插入其內(nèi)，由開口16可插入多孔部件20，一圓形膜或過濾片和一隨意的部件21(它的功能將在下面描述)摘置在圓形吸收部件22上，它也是通過開口16插入的。
如圖1中所示容器10的一部分24向下收縮而構(gòu)成完整的漏斗，便于樣品加入部件20中和保證樣品及其它加入部件20中的物質(zhì)能進(jìn)行有效的洗滌。
部件22的大小，因而也是容器10收縮部分以下的容積最好選擇在使測量過程中加入本裝置中的所有液體都能被接受和保留在吸收部件22中。在容器10中靠近底部裝有排放空氣(圖1中未指出)的裝置如小孔，以使被置換的空氣可以逸出。容器10的底部可隨意地除去，液體可流經(jīng)部件20和22，并通過底部流出容器。但是，因為該物品是用后即棄的和為了有利于以簡單和衛(wèi)生的方式處理樣品，因此最好還是應(yīng)用如圖1中所1示的結(jié)構(gòu)。
如前面所提到的，部件20可用于從樣品中過濾細(xì)胞物質(zhì)或作為抗待測配體的結(jié)合受體的支持物。在任何一種用途中，液體樣品可通過開口12而引入到部件20內(nèi)。待其滲入部件20后，液體吸收并進(jìn)入吸收部件22中，然后將一標(biāo)記受體溶液經(jīng)開口12加入部件20中。
然后標(biāo)記受體或結(jié)合到已結(jié)合在部件20上的受體的配體上或與已捕獲在20表面上的細(xì)胞物質(zhì)相連接。在免疫測量分析中，如部件20上已結(jié)合有一單克隆抗體，標(biāo)記的抗體也是一個單克隆抗體，那么這兩個體選擇性地結(jié)合到互不干擾的抗原結(jié)合點上，其情形正如在美國專利第4，376，110號和1981年6月6日申請的發(fā)明專利申請序列號第323，498號中所描述，該公開專利作為參考資料結(jié)合到本發(fā)明中。
雖然其它常用的分析標(biāo)記物在適當(dāng)情況下也可應(yīng)用，但最好用酶標(biāo)記可溶性受體。例如亦可應(yīng)諸如熒光素或藻紅蛋白或放射核素作為熒光標(biāo)記。有用的標(biāo)記物亦包括加入了有顏色的染料或熒光顆粒的微球體。其他有用的標(biāo)記物中可以提及的是已加入有顏色的染料或熒光顆粒的脂質(zhì)體或其它泡囊。
標(biāo)記受體溶液通過部件20之后，將洗滌液加入部件20以將未結(jié)合的標(biāo)記受體從部件20沖洗出并進(jìn)入部件22中。壁24傾斜的結(jié)構(gòu)提供了一完整的漏斗從而促進(jìn)洗滌液體加入壁中以除去粘附的殘余標(biāo)記受體溶液。
在將標(biāo)記受體溶液和洗液加入部件20之前先作短暫孵育使溶液中捕獲在部件20上或其間隙中的受體或配體更廣泛的結(jié)合從而增加測定的敏感性。但是我們發(fā)現(xiàn)，這樣的孵育步驟或是不必要或只是很短暫即可，一般是60秒鐘或更短。含有配體或標(biāo)記受體溶液通過部件20流動產(chǎn)生結(jié)合的速度明顯較無流動時所觀察到的結(jié)合速度要快。
如受體標(biāo)記是一種酶，那么洗滌除去部件20上的非結(jié)合受體后就可加入酶底物溶液。如果待測配體結(jié)合到已結(jié)合在部件20上的受體上或部件20上的細(xì)胞物質(zhì)上，則配體將結(jié)合到一部分標(biāo)記受體上。該酶將引起底物反應(yīng)和為經(jīng)適當(dāng)選擇將會產(chǎn)生一可見的顏色改變。
我們已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)醋酸纖維素用作吸收部件22的材料時，標(biāo)記受體可非特異性地結(jié)合在其上表面。因此，在此表面上即正好在部件20之下可出現(xiàn)的顏色改變。為避免這種可見的顏色改變通過部件20，最好在部件和22之間放置是多孔聚乙烯或其它材料制成的隔離部件(在圖1中叫做21)，它不會非特異性地結(jié)合受體。
現(xiàn)在轉(zhuǎn)向圖2。此為部件20的頂視圖。在一個推薦的具體實施例方案中虛線26代表28區(qū)的外周線，在此處結(jié)合配體。此區(qū)最較窄點的直徑比由壁24所限制的直徑要小些。由此，當(dāng)一種酶被用來作為受體的標(biāo)記物時可產(chǎn)生下列結(jié)果(1)在28區(qū)內(nèi)所產(chǎn)生顏色比部件20周圍的顏色更深，即為陽性結(jié)果;(2)假如在部件20未產(chǎn)生顏色則為陰性結(jié)果;(3)假如在洗滌后某些標(biāo)記的受體仍存在于部件20中，則整個可見的表面均有相同的中度顏色改變，此結(jié)果也可解釋為限性結(jié)果。
前面是本發(fā)明的裝置和方法步驟的一般描述。我們已發(fā)現(xiàn)，它在對樣品進(jìn)行免疫測定時是有用的，于5分鐘內(nèi)就可出現(xiàn)陽性結(jié)果。因此，
在一種特殊的例子中，一種抗人絨毛膜促性腺激素(HCG)的單克隆抗體，與其相應(yīng)的抗原是在孕婦尿中含量升高的HCG，將此抗原使用戊二醛技術(shù)結(jié)合到一個多孔的尼龍膜上，將其置于一個像圖1，10那樣的容器中，并用一個醋酸纖維素吸收膜支持住但用一個多孔聚乙烯圓片將其隔離開。
將4毫升含有0-50國際毫單位/毫升HCG的尿標(biāo)本加入前已描述的裝置中，通過部件20和21將其吸入到吸附材料22中，然后加入3滴已結(jié)合堿性磷酸酶的抗HCG的第二個單克隆抗體溶液。在大約一分鐘的短暫孵育后，在此時間內(nèi)結(jié)合物通過部件20被吸入，加入4毫升水以從部件20中將未結(jié)合的抗體除去，然后加入3滴含有堿性磷酸酶的底物一吲哚酚磷酸酯溶液。2分鐘后在此裝置中未出現(xiàn)顏色表示待測的標(biāo)本不含HCG(0國際毫單位/毫升)。對于含有50國際毫單位/毫升的HCG標(biāo)本在圓片的中央30秒鐘內(nèi)出現(xiàn)明顯的蘭色在2分鐘內(nèi)變成深蘭色。在此圓片的周圍不顯色。整個測定需時約5分鐘，測定的靈敏度可通過改變?nèi)莘e或孵育時間而進(jìn)行調(diào)整。
雖然本發(fā)明用測定HCG作為一個例子進(jìn)行描述，但也可用類似的測定法來測定其他抗原。列出全部待測抗原顯得太冗長了，但可檢測諸如免疫球蛋白E(IgE)、前列腺酸磷酸酶、前列腺的特異性抗原、α胎幾蛋白質(zhì)、瘸胚抗原、黃體化荷爾蒙，肌酸激酶MB或其他在血清、血槳，尿或其他液體媒質(zhì)中的抗原等。此外，在液體樣品中含有下列各有關(guān)抗原，例如同細(xì)菌、寄生蟲、真菌或病毒有關(guān)的各種抗原，例如甲型和乙型鏈球菌、淋病奈瑟氏菌(淋球菌)、陰道嘉氏菌(Gardnerella Vaginalis)、陰道毛滴蟲、白色念珠菌、沙眼衣原體、乙型肝炎以及巨細(xì)胞病毒均可被檢測。此種方法是通過使用一種可捕獲這些細(xì)胞的濾器或使用一種像部件20一樣的可將此抗原的異性抗體結(jié)合上去的濾器檢測的。加入用一種酶標(biāo)記的單克隆抗體溶液將使抗體與抗體原相結(jié)合。洗滌和加入底物將產(chǎn)生同存在于細(xì)胞上的標(biāo)記抗體相關(guān)的顏色改變，此種顏色的變化可通過肉眼或藉助于一種儀器而檢測。
如使用的標(biāo)記物不是酶，那么操作步驟將有所變動。假如使用熒光標(biāo)記物則可測定膜的熒光。假如使用放性核素如125I作為標(biāo)記物，可將此膜取下并進(jìn)行計數(shù)。
前面強調(diào)了本發(fā)明應(yīng)用于一系列用單克隆抗體所進(jìn)行的免疫測定的測定。即使用結(jié)合在多膜上的第一單克隆抗體受體和已標(biāo)記的第二單克隆抗體受體。將樣品加到此多孔膜上，然后加入標(biāo)記的抗體。其它派生的測定也是可能的。例如，在免疫測量分析情況下，標(biāo)記的抗體和待測樣品可事先溫合再加到多孔膜上。
本發(fā)明的裝置也用于測定抗體。這些測定中應(yīng)用一種抗原作為固相表面的第一受體，使用標(biāo)記的抗原或標(biāo)記的抗-抗體作為第二受體，后者是特別適合于變態(tài)反應(yīng)的特異性測定中，在這些測定中其第一受體是一種結(jié)合到多孔膜上的變應(yīng)原，第二受體是一種抗IgE的抗體，最好選用單克隆抗體。在其他情況下，對變應(yīng)原的免疫球蛋白G(.IgG)應(yīng)答可以類似的方式進(jìn)行測定。即使用一種抗體例如，單克隆抗IgG作為第二抗體，其它的抗體試驗也可以這種方式進(jìn)行測定，此包括測定抗皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、肝炎、巨細(xì)胞病毒以及嗜人類T淋巴細(xì)胞Ⅲ型(HTL-Ⅲ)的抗體。
本發(fā)明的另一具體實施方案是此裝置可用于競爭性測定。即在這些測定中將配體的受體結(jié)合到多孔膜上，在樣品中的配體與加入樣品溶液中的固定量的標(biāo)記配體或在加入樣品后再加入的固定量的標(biāo)記配體進(jìn)行競爭。以此方式進(jìn)行競爭性免疫測定適宜于使用一種抗體，例如一種單體克隆抗體或多克隆抗體制劑作為結(jié)合到固相上的受體?？稍跇悠芳尤氲酱硕嗫啄ぶ?，將此標(biāo)記的抗原加到此樣品中去。此外，標(biāo)記的抗原也可在樣品加入后或與樣品同時加入。
本發(fā)明的裝置也可通過將一種酶的受體結(jié)合到多孔膜上作為測定的受體的方式來檢測此種酶?？姑傅臉?biāo)記抗體可用于檢測在多孔膜上所形成的受體-酶復(fù)合物。
此多孔膜也可同一種核酸寡聚體結(jié)合，此寡聚體可作為樣品中核酸物質(zhì)的一種受體探子。例如，此探子可以是一種DNA的寡聚體，它可互補到一種待測的核酸序列之中。在此情況下它也可用于結(jié)合作為配體的DNA或DNA。配體一受體復(fù)合物的測定，可通過應(yīng)用一個第二核寡聚體使互補到待測的核酸配體的非干擾區(qū)域能檢測體一受體復(fù)合物。將此第二寡聚體進(jìn)行標(biāo)記檢測就可實現(xiàn)。
在本發(fā)明之另一種具體實施方案中，抗受體可結(jié)合到此多孔膜上。此處“抗受體”這個術(shù)語是指將選擇性地同配體一受體這對作用物中的受體相結(jié)合的物質(zhì)，例如如配體是一抗原，受體是一抗體，例如如配體是一抗原，受體是一抗體，例如小鼠IgG抗體(最好使用單克隆抗體)，那么此抗受體最好是一種抗鼠類IgG單克隆抗體。在其他情況下，受體可與一種能選擇性地同抗受體相結(jié)合的物質(zhì)結(jié)合。例如，此物質(zhì)可以是一種半抗原，抗受體是抗該半原的抗體。一種優(yōu)良的半抗原熒光素。在另外的情況下，抗受體可以是抗生物素蛋白，在此情況下，受體將是同其結(jié)合的生物素。在其它情況下，受體可以是核酸寡聚體或這樣一種寡聚體可與這受體結(jié)合。抗受體可以是一核酸片段，它可互補到受體寡聚體的一個部位上。此部位不會損害受體同配體的結(jié)合。本工藝中那些熟練的技術(shù)人員將會認(rèn)識到很多抗受體受體的結(jié)合也可被使用。
當(dāng)使用一個抗受體時，樣品可以很多種方式進(jìn)行測定。例例，在一種“夾心測定法”中，第一受體和第二標(biāo)記受體可以先與樣品加在一起去結(jié)合配體，然后再加到多孔膜上。或者，第一受體和樣品先結(jié)合，然后再加到多孔膜上去，或按先加入第一受體，然后加入樣品，繼而再加標(biāo)記的受體的順序進(jìn)行。在這種夾心測定法中，抗受體選擇性地同第一受體而非標(biāo)記受體相結(jié)合。
結(jié)合到多孔膜上的抗受體的應(yīng)用在配體-受體測定中有用的多孔膜的簡單設(shè)計和制備成為可能。例如，如受體被結(jié)合到多孔膜上，那么就可能需要變更結(jié)合程序以使測定序列中所需要的每一個受體呈最佳的結(jié)合。然而，多孔膜上僅結(jié)合單一抗受體就可用于多種測定。結(jié)果，當(dāng)這樣一種“通用的”多孔膜成為可能時，則設(shè)計方面的努力和制造程序?qū)⒋蟠蟮睾喕?br>權(quán)利要求
1、在一種配體-受體測定過程中，為了檢測液體樣品中待測配體所用的裝置由下列部件組成
a).第一個部件是多孔膜。此膜結(jié)合有針對待測配體的受體或能分離液體樣品中與配體相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞成份。此膜具有上表面和下表面。
b).第二個部件為吸附材料構(gòu)成的吸收體。在其表的上放置著第一個部件，此吸收體具有毛細(xì)吸管，這些毛細(xì)吸管一般以橫向方式到達(dá)擱置有第一部件的表面。第二部件的毛細(xì)管同第一部件下表面上的多孔相連通。因此，可將加入到第一部件上表面并已滲入其中的液體被吸入到第二部件的毛細(xì)吸管中。
2、按權(quán)利要求
1所述的裝置，其中所述第一部件是抗配體的受體結(jié)合到此部件上。
3、按權(quán)利要求
1所述的裝置，其中所述第一部件是一個膜或濾器。
4、按權(quán)利要求
1，2或3所述的裝置，配體是從包括抗原、抗體、酶和核酸寡體的一組中選擇出來的。
5、按權(quán)利要求
1，2或3所述的裝置，其中所述受體結(jié)合到多孔膜上，而該受體是從包括抗體、抗原、酶的受體以及核酸寡聚體所的一組中選擇出來的。
6、按權(quán)利要求
5所述的裝置，其中所述受體是核酸寡聚體。
7、按權(quán)利要求
6所述的裝置，其中所述核酸寡聚體是DNA的寡聚體。
8、按權(quán)利要求
5所述的裝置，其中所述受體是抗體。
9、按權(quán)利要求
8所述的裝置，其中所述受體是多克隆抗體制劑。
10、按權(quán)利要求
8所述的裝置，其中所述抗體是單克隆抗體。
11、按權(quán)利要求
5所述的裝置，其中所述受體是抗原，其相應(yīng)待測配體是抗體。
12、按權(quán)利要求
11所述的裝置，其中所述抗原是變應(yīng)原，其抗體是抗此變應(yīng)原的抗體。
13、按權(quán)利要求
12所述的裝置，其中所述抗原是IgE。
14、按權(quán)利要求
12所述的裝置，其中所述抗體是IgG。
15、按權(quán)利要求
1，2或3所述的裝置，其中多孔部件是由玻璃或龍材料制成的。
16、按權(quán)利要求
1所述的裝置，其中所述多孔部件是能將液體樣品中的細(xì)胞物質(zhì)分離出來的一種部件。
17、按權(quán)利要求
16所述的裝置，其中所述多孔部件是一個膜或濾器。
18、按權(quán)利要求
1、2、3、15或16所述的裝置，其中所述的裝置還包括放置第一和第二部件所需的容器，該容器有一開口以便將測定的試劑加到第一部件的上表面上。
19、按權(quán)利要求
18所述的裝置，其中所述容器的開口還包括一段側(cè)面，所述側(cè)面向內(nèi)傾斜形成漏斗，以引導(dǎo)所加試劑進(jìn)入第一部件的上表面。
20、按權(quán)利要求
18所述的裝置，其中所述容器的底部是封閉的，此容器有排氣孔以排放由于加入的試劑而被置換的空氣。
21、檢測液體樣品中待測配體的一個測定方法，其特征在于，所述方法包括將懷凝含有待測配體的液體樣品加到權(quán)利要求
2或3中所述的裝置的第一部件的上表面，將此樣品加入上表面或先將此樣品加入到多孔膜上，再加入待測配體的標(biāo)記第二受體。再將未結(jié)合的標(biāo)記受體分離，并檢測結(jié)合到已結(jié)合到第一受體的配體上的標(biāo)記的第二受體。
22、按權(quán)利要求
21所述的或方法，其中用洗滌法分離未結(jié)合的第二受體。
23、按權(quán)利要求
21所述的方法，其中所述結(jié)合到多孔膜上的受體是選自抗原、抗體、酶受體和核酸寡聚體。
24、按權(quán)利要求
22所述的方法，其中所述結(jié)合到多孔膜上的受體和標(biāo)記的受體在非干擾的位點同配體結(jié)合。
25、按權(quán)利要求
23所述的方法，其中所述待測的配體是核酸寡聚體和結(jié)合到多孔膜的受體標(biāo)記受體是互補的核酸寡聚體。
26、按權(quán)利要求
25所述的方法，其中所述受體是DNA寡聚體。
27、按權(quán)利要求
26所述的方法，其中所述待配體是DNA寡聚體。
28、按權(quán)利要求
26所述的方法，其中所述待測配體是RNA寡聚體。
29、按權(quán)利要求
23的方法，其中待測配體是抗原，其受體是單克隆抗體。
30、按權(quán)利要求
23所述的方法，其中所述待測配體是抗體而受體是抗原。
31、按權(quán)利要求
23所述的方法，其中所述待測配體是抗體而結(jié)合到多孔膜上的受體是抗原，標(biāo)記的受體是抗此待測抗體的抗體。
32、按權(quán)利要求
所述31的方法，其中所述抗原是一種變應(yīng)原，待測配體是IgE。
33、按權(quán)利要求
31所述的方法，其中所述抗原是一種變應(yīng)原，待測配體是IgE。
34、按權(quán)利要求
32所述的方法，其中所述標(biāo)記受體是單克隆抗IgG。
35、按權(quán)利要求
33所述的方法，其中所述標(biāo)記受體是抗-IgG。
36、檢測與細(xì)胞物質(zhì)有關(guān)的待測配體的測定方法，其特征在于，所述方法包括將懷凝在所述細(xì)胞物質(zhì)上含有配體的液樣品加到權(quán)利要求
16中所述的多孔膜的上表面，以便從樣品中分離此細(xì)胞物質(zhì)。樣品已加入到多孔膜上或先將樣品加到多孔膜上，繼之加入待測配體的標(biāo)記受體，以便進(jìn)行檢測。然后將未結(jié)合的標(biāo)記受體分離，并檢測標(biāo)記受體。如有的話，此標(biāo)記受體是結(jié)合到通過多孔膜從液體樣品中分離出的細(xì)胞物質(zhì)上的配體上。
37、按權(quán)利要求
36所述的方法，其中所述未結(jié)合的標(biāo)記受體用洗滌法分離。
38、按權(quán)利要求
36或37所述的方法，其中所述待測配體是抗原，受體是相應(yīng)的抗體。
39、按權(quán)利要求
38所述的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
40、按權(quán)利要求
1所述的裝置，其中所述第一個部件具有結(jié)合在其上的抗受體。
41、按權(quán)利要求
40所述的裝置，其中所述受體是一種抗體，抗受體是抗此受體的抗體。
42、按權(quán)利要求
40所述的裝置，其中所述受體同半抗原相結(jié)合，抗受體是抗此半抗原的抗體。
43、按權(quán)利要求
40所述的裝置，其中所述半原是熒光素。
44、按權(quán)利要求
40所述的裝置，其中所述抗受體是抗生物素蛋白，其受體與生物素相結(jié)合。
45、按權(quán)利要求
40、41、42和43所述的裝置，其中所述抗受體是單克隆抗體。
46、按權(quán)利要求
45所述的裝置，其中所述抗體是單克隆抗體。
47、使用權(quán)利要求
40所述的裝置，檢測液體樣品中的待測配體，其中所述多孔膜結(jié)合抗受體到待測配體的第一受體上。其特征在于將第一受體、液體樣品和標(biāo)記的第二受體加到多孔膜的上表面，繼而將未結(jié)合的標(biāo)記受體分離，并檢測結(jié)合到第一受體所結(jié)合的配體上的標(biāo)記受體。
48、按權(quán)利要求
47所述的方法，其中先加入第一受體，繼而加入液體樣品。
49、按權(quán)利要求
47所述的方法，其中先將第一受體和液體樣品混合后再加到多孔膜上。
50、按權(quán)利要求
48或49所述的方法，其中在加入液體樣品到多孔膜上后再在其上加入標(biāo)記的受體。
51、按權(quán)利要求
48或49所述的方法，其中將標(biāo)記受體加入液體樣品后再將此液體樣品加到多孔膜上。
52、按權(quán)利要求
47、48或49所述的方法，其中所述抗受體是抗體。
53、按權(quán)利要求
50所述的方法，其中所述抗受體是抗體。
54、按權(quán)利要求
51所述的方法，其中所述抗受體是抗體。
專利摘要
配體受體測定的裝置和方法該裝置由膜或濾器為第一部件，它把配體的受體結(jié)合或從液樣中提取帶配體的細(xì)胞。第二部件由吸收材料組成。加入液樣，因第一部件與第二部件接觸，導(dǎo)致液體通過前者。測定時樣品加到第一部件上表面，固定在其上的受體結(jié)合樣品中的配體或提取與配體相關(guān)的細(xì)胞物質(zhì)。先加樣品后加待測抗原的標(biāo)記抗體，洗去未結(jié)合標(biāo)記受體；如第一部件上有標(biāo)記抗體表示樣品中有抗原。本發(fā)明以配體是抗原，受體是抗體為最好。
文檔編號C12M1/00GK85104030SQ85104030
公開日1986年11月19日 申請日期1985年5月23日
發(fā)明者古納斯·埃德溫·瓦基塞, 紐·科爾曼·歐文, 菲利普·艾倫·萊文森 申請人:海布利德克公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan