專利名稱：：表面抗原的快速檢測法的制作方法一種表面抗原的檢測方法。它所涉及的是化學(xué)試驗的一種檢測方法，也就是如何利用一種較快捷的方法檢測乙型肝炎的表面抗原。目前人們檢測乙型肝炎表面抗原通用的有放射免疫法及傳統(tǒng)的Elisa檢測法，放射免疫法其優(yōu)點是快捷，靈敏度高。但上述檢查對人體有損害，國際上已限制使用。Elisa檢測法是采用一種叫Elisa試劑盒，內(nèi)有一塊聚苯乙烯小孔，經(jīng)抗體包被后，加入檢測標(biāo)本，置37-40℃水浴中孵育4小時，即可使抗原抗體結(jié)合為表面抗原復(fù)合物呈桔紅色。用本法反應(yīng)簡單，準(zhǔn)確率也較高。但本方法的不足之處在于費時較長，同時當(dāng)抗原抗體互相作用生成免疫復(fù)合物的同時也有部分免疫復(fù)合物在解離成游離的抗原和抗體，因此影響了反應(yīng)的速度及靈敏度。在檢測乙型肝炎表面抗原的時候，為了節(jié)省時間，同時在整個化學(xué)反應(yīng)過程中不使已生成的免疫復(fù)合物被解離成抗原及抗體。本發(fā)明的目的就是在反應(yīng)過程中采用了加入一種不帶電荷的直鏈大分子多糖，分子量在6000的聚乙二醇作為反應(yīng)的促結(jié)液及酶稀釋液的方法，從而克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足之處。本發(fā)明的技術(shù)特點是通過以下步驟完成的用傳統(tǒng)的Elisa試劑盒的聚苯乙烯板小孔載體經(jīng)抗體包被后加入檢測標(biāo)本，再加入6%聚乙二醇促結(jié)液，混勻后置37-45℃水浴中孵育15-20分鐘，最佳溫度為43℃標(biāo)本中的抗原在聚乙二醇的作用下，可迅速與載體的抗體結(jié)合成免疫復(fù)合物(包被抗HBs+HBsAg(6%聚乙二醇)/()抗HBs·HBsAg)，經(jīng)洗滌后，再加入4%聚乙二醇促酶稀釋液，置37-45℃，最佳43℃水浴中孵育15-20分鐘，即生成雙抗體夾心的酶聯(lián)免疫復(fù)合物(抗HBs·HBsAg+(抗HBs-HRP)/(4%聚乙二醇)抗HBs-HBsAg-抗HBs-HRP)。再加入鄰苯二胺為底物即生成桔紅色的表面抗原抗體復(fù)合物。整個過程歷時40-60分鐘。為了進(jìn)一步敘述本發(fā)明的技術(shù)特征，下面以實施例加以說明操作方法包被用抗HBs0.1毫升/孔，4℃24小時，洗滌三次，在吸水紙上扣干，加樣，每孔0.1毫升，并沒陽性對照孔，陰性對照孔，空白對照孔。每孔加6%促結(jié)液，混勻置37-45℃20分鐘，最佳43℃，洗滌三次扣干，加酶標(biāo)記物及4%酶稀釋液，每孔0.1毫升置37-45℃，最佳43℃20分鐘，洗滌5次，每次加滿洗滌液即停留1分鐘，傾去扣干。最后每孔加底物0.1毫升。結(jié)果判斷目測法陰性為無色或極淡粉紅色，陽性為桔紅色。比色法(波長492nm)先用空白校零點，然后讀取各孔光密度值，(樣品OD值)/(陰性平均OD值)≥2.1判斷陽性，否者為陰性。放射免疫、傳統(tǒng)Elisa法、快速檢查法的比較例數(shù)放射免疫傳統(tǒng)Elisa法快速法76例40(＋)30(＋)37(＋)陽性率52.6%39.5%48.7%</table></tables>注“+”為乙型肝炎表面抗原陽性的標(biāo)本。本發(fā)明的優(yōu)點是在傳統(tǒng)的Elisa試劑盒的基礎(chǔ)上，在化學(xué)反應(yīng)的過程中加入了促結(jié)液及促酶稀釋液，此兩種液體均為聚乙二醇，它為一種不帶電荷的直鏈大分子多糖，分子量在6000，可促進(jìn)抗原決定基團(tuán)與載體抗體的結(jié)合點互相結(jié)合，并能抑制免疫復(fù)合物解離，促進(jìn)免疫復(fù)合物進(jìn)一步聚合，故反應(yīng)時間短，又能提高試劑盒的靈敏度等優(yōu)點。本方法不但能用于檢查乙型肝炎表面抗原，也能用于其它免疫復(fù)合物的檢查。權(quán)利要求1.一種表面抗原的快速檢測法，它是在已配制好的聚苯乙烯板小孔經(jīng)抗體包被后，加入檢測標(biāo)本，放置37-40℃水浴中孵育4-5小時而生成抗原抗體復(fù)合物(抗HBs-HRP)呈桔紅色，本發(fā)明的特征在于在加入聚乙二醇(PEG)促結(jié)液混勻后置37-45℃水浴中孵育15-20分鐘，標(biāo)本中的抗原在聚乙二醇的作用下，可迅速與載體的抗體結(jié)合成免疫復(fù)合物(抗HBs+HBsAg(PEG)/()抗HBs·HBsAg)，經(jīng)洗滌后，再加入促酶稀釋液置37-45℃水浴中孵育15-20分鐘，即生成雙抗體夾心的酶聯(lián)免疫復(fù)合物(抗HBs·HBsAg+(抗HBs-HRP)/(PEG)抗HBs-HBsAg-抗HBs-HRP)再加入鄰苯二胺底物液即生成桔紅色。整個過程歷時40-60分鐘。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表面抗原快速檢測法，其特征在于水浴中的最佳溫度為43℃。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表面抗原快速檢查法，其特征在于促結(jié)液為6%聚乙二醇，促酶稀釋液為4%聚乙二醇。全文摘要一種表面抗原的快速檢查法，它涉及的是一種化學(xué)反應(yīng)的檢查方法，本發(fā)明是在傳統(tǒng)的Elisa檢查方法的基礎(chǔ)上，在反應(yīng)的過程中加入了促結(jié)液及促酶稀釋液，使反應(yīng)明顯加快，靈敏度提高的一種新的方法。此方法不但用于檢測乙型肝炎表面抗原，也用于其它免疫復(fù)合物的檢查，它的優(yōu)點在于明顯提高了工作效率，同時能控制抗原抗體的解離。文檔編號G01N33/536GK1036080SQ8810166公開日1989年10月4日申請日期1988年3月23日優(yōu)先權(quán)日1988年3月23日發(fā)明者冼德漢申請人:廣東省肇慶地區(qū)第一人民醫(yī)院