專利名稱：用對(duì)流免疫電泳法、瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法鑒別牛肉和馬肉的制作方法
用對(duì)流免疫電泳法、瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法鑒別牛肉和馬肉，是把免疫學(xué)技術(shù)應(yīng)用于食品檢驗(yàn)，對(duì)生牛肉和馬肉進(jìn)行鑒別檢驗(yàn)。食品檢驗(yàn)不但包括生肉理化檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)等，各種生肉的鑒別也是其重要檢驗(yàn)內(nèi)容之一。
以上三種方法都具有免疫反應(yīng)特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，所以它們都能特異準(zhǔn)確鑒別出牛肉和馬肉，鑒別率為100%。另外以上三種方法都較快速，環(huán)狀沉淀法只需5分鐘即可判定結(jié)果，對(duì)流免疫電泳法45分鐘可判定結(jié)果。這三種方法用時(shí)短，操作簡(jiǎn)便，不需特殊的儀器設(shè)備。是市場(chǎng)上進(jìn)行牛馬肉大批鑒別檢驗(yàn)的行之有效的方法。經(jīng)國(guó)內(nèi)外專利文獻(xiàn)檢索這三種方法用于牛肉和馬肉鑒別目前尚無(wú)報(bào)導(dǎo)。
用對(duì)流免疫電泳法，瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法鑒別牛肉和馬肉，是為了解決市場(chǎng)上牛肉和馬肉鑒別檢驗(yàn)問(wèn)題。目前市場(chǎng)上用馬肉代替牛肉或者在牛肉中混入馬肉出售給消費(fèi)者的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，檢疫部門(mén)用這三種方法在市場(chǎng)上大批量鑒別牛肉和馬肉，可做到準(zhǔn)確、快速、方便，維護(hù)消費(fèi)者利益。
目前市場(chǎng)上牛肉和馬肉的鑒別檢驗(yàn)只是通過(guò)眼觀鑒別，這種鑒別方法客觀性和準(zhǔn)確性都很差，并且對(duì)攪碎的牛肉和馬肉混合物根本無(wú)法鑒別。實(shí)驗(yàn)室鑒別牛肉和馬肉的方法是通過(guò)對(duì)糖原含量測(cè)定的方法來(lái)鑒別的這種方法操作煩瑣，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)，并且準(zhǔn)確性和客觀性也很差，因?yàn)殡S著生肉放置時(shí)間不同，肉中糖原的含量也發(fā)生相應(yīng)的變化。而用對(duì)流免疫電泳法，瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法鑒別牛肉和馬肉可以克服以上兩種方法的不足。這三種鑒別檢驗(yàn)方法可以特異、準(zhǔn)確、快速和簡(jiǎn)便地進(jìn)行大批量的牛肉和馬肉的鑒別檢驗(yàn)。
用對(duì)流免疫電泳法、瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法鑒別牛肉和馬肉主要過(guò)程如下分別取牛肉和馬肉樣品，對(duì)其具有抗原性的成分進(jìn)行分析，確定其各自具有特異性的抗原成分，并且分別提取出牛肉和馬肉各自的特異性抗原。用提取出的牛肉和馬肉特異性抗原分別多次強(qiáng)化免疫家兔，制備出抗牛肉和馬肉的特異性抗血清，并對(duì)制備出的抗血清進(jìn)行效價(jià)測(cè)定和特異性鑒定。各格者保存于-20℃冰箱中備用。
收集牛肉和馬肉樣品，每份樣品取5克，剪碎，加5ml生理鹽水勻后取上清，或取出生肉的浸出液做為待檢樣品。
用所制備的抗牛肉和抗馬肉的特異性抗血清，應(yīng)用對(duì)流免疫電泳法，瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法分別對(duì)待檢肉樣進(jìn)行鑒別檢驗(yàn)。其操作過(guò)程分別為對(duì)流免疫電泳法制備1%瓊脂凝膠板，板厚3mm，以孔距3mm，孔徑3mm在瓊脂凝膠板上打孔，將打孔的凝膠板放在電泳槽上，架上電橋，然后在正極端加上抗血清，在負(fù)極端加上待檢肉樣，并用標(biāo)準(zhǔn)的牛肉馬肉樣品作對(duì)照。在5v/cm條件下電泳45分鐘，電泳結(jié)束后觀察結(jié)果。
其結(jié)果判定為在加抗牛肉抗血清孔和肉樣之間出現(xiàn)沉淀線，則待檢肉樣為牛肉;加抗馬肉抗血清孔和肉樣孔之間出現(xiàn)沉淀線，則待檢肉樣為馬肉;如果在抗牛肉抗血清、抗馬肉抗血清和待檢肉樣孔之間均出現(xiàn)沉淀線，則待檢肉為牛肉和馬肉的混合物。
瓊脂雙擴(kuò)散法制備1%瓊脂凝膠板，板厚3mm，以3mm為孔距、孔徑3mm打成梅花孔。然后在中心孔加入抗血清，在周邊孔加入待檢肉樣。將加完樣品的瓊脂凝膠板放入濕盒中，在室溫條件下放置24小時(shí)，然后觀察結(jié)果。
結(jié)果判定同對(duì)流免疫電泳法。
環(huán)狀沉淀法
用直徑1-2mm，長(zhǎng)4cm的玻璃管作為環(huán)狀沉淀反應(yīng)管，先加入抗血清，大約加到管長(zhǎng)的一半，上一半加入待檢肉樣，垂直室溫放置5分鐘。然后觀察在抗血清和待檢肉樣的交界是否出現(xiàn)沉淀環(huán)。
結(jié)果判定與對(duì)流免疫電泳法相同。
權(quán)利要求
對(duì)流免疫電泳法、瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法應(yīng)用于食品檢驗(yàn)，以準(zhǔn)確、快速、方便地鑒別出牛肉和馬肉，其特征是從牛肉和馬肉樣品中提取出各自的特征性抗原，用此抗原免疫家兔，分別制備抗牛肉和馬肉的特異性抗血清，用此抗血清做為鑒別試劑。
全文摘要
對(duì)流免疫電泳法、瓊脂雙擴(kuò)散法和環(huán)狀沉淀法鑒別牛肉和馬肉是食品檢驗(yàn)領(lǐng)域的技術(shù)，它可解決目前市場(chǎng)上急需解決的牛肉和馬肉鑒別檢驗(yàn)的問(wèn)題。從牛肉和馬肉中分別提取出各自特異性抗原，免疫家兔制備出抗血清。用此抗血清應(yīng)用上述三種方法分別對(duì)牛肉和馬肉樣品進(jìn)行鑒別檢驗(yàn)。結(jié)果表明，以上三種方法均具有特異、準(zhǔn)確、快速和簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，可用于市場(chǎng)上牛肉和馬肉的大批量的鑒別檢驗(yàn)。
文檔編號(hào)G01N33/561GK1052949SQ89109668
公開(kāi)日1991年7月10日 申請(qǐng)日期1989年12月27日 優(yōu)先權(quán)日1989年12月27日
發(fā)明者李景鵬, 王君偉, 宣世緯 申請(qǐng)人:東北農(nóng)學(xué)院