專利名稱：癌內(nèi)因及其測定方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及對癌內(nèi)因的分析以及對癌內(nèi)因的測定方法。
致癌因素廣泛分布于自然界，而癌癥僅出現(xiàn)在生物界，致癌物必須與生物體作用才能產(chǎn)生癌癥，因此，癌癥的發(fā)生必須有生物體方面的因素參與。
一、癌癥的分布癌癥雖然復雜，但是其分布還是有規(guī)律的。
從細胞水平研究，癌癥的范圍只限于有分裂能力的細胞。因為“任何有分裂能力的細胞均會癌變”。
從組織水平研究，癌只分布于神經(jīng)組織、上皮組織、肌肉組織和結(jié)締組織四大組織之任何組織。
從系統(tǒng)水平研究，癌癥發(fā)生于任何系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、運動系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)均無一例外地發(fā)生腫瘤。
從哺乳動物水平研究，豬馬牛羊及人類無一例外地發(fā)生癌癥，癌癥分布于整個哺乳類。
從脊椎動物水平研究，哺乳類、爬行類、鳥類、兩棲類、魚類無一例外地發(fā)生癌癥，癌癥分布于整個脊椎動物門。
從動物水平研究，癌癥不僅僅分布于脊椎動物，棘皮動物(如海膽)發(fā)生癌癥;軟體動物(如黃蛞蝓)發(fā)生癌癥;節(jié)肢動物(如某些蠅和蝴蝶的幼蟲)也發(fā)生癌癥;雖然對于環(huán)節(jié)動物門、絨形動物門、扁形動物門、腔腸動物門等有無癌癥沒有報道，但有一點是肯定的，即癌癥分布于動物界。
從生物水平研究，癌癥不僅分布于動物，也分布于植物，可見癌癥分布于生物界。
從自然界水平研究，癌癥分布于生物界，沒有生命的物質(zhì)不發(fā)生癌癥，說明癌癥分布的最大范圍是生物界。
附表不同研究水平腫瘤的分布圖
總之，對于自然界不產(chǎn)生癌變的，歸結(jié)如下(1)自然界中無生命的物質(zhì)，本身不會產(chǎn)生腫瘤;
(2)生物界中，無細胞結(jié)構(gòu)者，不發(fā)生癌變。如病毒只能在宿主產(chǎn)生腫瘤，病毒本身不會變成癌細胞;
(3)單細胞生物，不發(fā)生癌變。如原核生物(細菌)、真核原生生物(原蟲)等，具有完整的細胞結(jié)構(gòu)，有分裂能力，但不發(fā)生癌變;(9)(4)多細胞生物，無分裂能力的細胞，不發(fā)生癌變。如哺乳類動物成熟的心肌細胞、骨骼肌細胞、神經(jīng)細胞等，失去了分裂能力，不發(fā)生癌變。
二、致癌因素分布目前已經(jīng)定論的致癌因素有生物因素、物理因素和化學因素等。與癌癥的分布特點不同，這些因素，廣泛分布于自然界。如生物因素，病毒、細菌毒素、霉菌毒素廣泛分布于空氣、土壤及水中;陽光則照耀著宇宙間萬事萬物，紫外線、放射性物質(zhì)等均如此，日本廣島原子彈爆炸輻射致癌時，射線也并非只對人類發(fā)生輻射;化學性致癌物質(zhì)也廣泛分布于土壤、水和空氣中。
致癌因素分布于自然界，只有與癌癥的分布比較，才會發(fā)現(xiàn)其重要意義。
三、癌內(nèi)因首先，請看表致癌因素分布 癌癥分布生物界 + +非生物界 + -上表說明，致癌因素+生物體才會產(chǎn)生腫瘤;致癌因素+無生命物質(zhì)則不產(chǎn)生腫瘤。為什么分布于自然界的致癌因素單單在生物界產(chǎn)生腫瘤？可見在癌變的環(huán)節(jié)中，生物方面也有其十分重要的作用，離開了生物方面的原因，癌癥便不會產(chǎn)生，沒有生物，也無所謂癌癥。我們把癌變過程中，生物方面能夠和任何致癌因素相互作用的因素，稱之為癌內(nèi)因。
研究癌內(nèi)因?qū)τ谘芯堪┌Y的病因具有十分重要的意義。因為癌內(nèi)因，只存在于生物界，大大縮小了其研究的范圍。組成生物的分子是核酸、蛋白質(zhì)、脂、糖、酶、維生素、水、無機鹽等。自然界中存在的氨基酸有數(shù)百種，組成生物蛋白質(zhì)的氨基酸只有20余種。自然界中存在的元素有一百多種，組成生物的元素只有C、H、O、N、S、P、金屬元素以及微量元素。
因此，癌內(nèi)因如果只有一個，那么，它只能是一種生物(大)分子、或是一種氨基酸、或是某一種元素。所有的致癌因素(理化、生物)必須先與癌內(nèi)因作用，而后產(chǎn)生全部的癌癥的特點，如基因改變、無限生長等。這個癌內(nèi)因，是具有分裂能力的細胞共有的因素，是動物、植物體內(nèi)共有的成份，也是生物進化中最原始的成份。
設癌變只有一個癌內(nèi)因。
四、基因突變不是癌變的原因基因是位于染色體上的遺傳因子。一方面，它通過細胞分裂時染色體的復制而一代一代地遺傳下去;另一方面，它控制生物的發(fā)育、生理及生化過程，從而使生物表現(xiàn)出各種各樣的性狀?；虻幕瘜W實質(zhì)是DNA。在含有DNA的生物中，DNA是遺傳物質(zhì)，基因在DNA上;在不含有DNA而只含有RNA的生物中，RNA是遺傳物質(zhì)，基因在RNA上;表現(xiàn)生物性狀的蛋白質(zhì)是不遺傳的。
DNA的復制具有極高的速度和驚人的精確度，以dATP，dGTP、dTTP、dCTP為原料，以DNA polymerase和鎂離子為催化劑，以依賴DNA的由RNA聚合酶合成的小片RNA為引物，合成復制細胞分裂時所必須的DNA。
因此，遺傳基因決定了子代細胞的遺傳性狀，但是，DNA的復制過程，是由DNA聚合酶和鎂離子催化完成的。可見有了基因，生物體發(fā)育、生理、生化過程中的調(diào)控，就有了固定的模式，但是遺傳基因并不能親自完成生物體的發(fā)育及生理和生化過程，而僅是對上述過程起調(diào)控作用。
人體的組織細胞分為三大類群旺盛分裂細胞群;暫不分裂細胞群;永不分裂細胞群。如果說基因變化是癌變的原因，那么，基因必須決定細胞的分裂能力。上述三類細胞群，具有相同的遺傳基因，為什么有的細胞永不增殖？有的細胞間歇增殖？有的細胞旺盛增殖呢？如果基因能夠決定細胞的分裂增殖，那么，上述三種細胞均應旺盛增殖才是(因為基因相同)，為什么結(jié)果不是這樣呢？如果永不增殖的細胞發(fā)生了基因突變，而基因突變又是癌變的原因，那么，為什么沒有分裂能力的細胞不會癌變呢？又如旺盛增殖的細胞發(fā)生了基因突變，而基因突變是癌變的原因，那么，為什么癌變細胞的細胞周期比其來源組織細胞不僅不縮短，反而有所加長？腫瘤組織的生長速度遠遠高于其來源組織，試問瘤組織生長過快的原因是什么呢？致癌因素作用于特定的組織;使某一組織發(fā)生癌癥，絕大多數(shù)癌癥產(chǎn)生后(對于人類)，致癌因素并沒有去除掉，為什么只會引起正常細胞基因變化，而不再導致癌細胞的遺傳基因改變呢？病毒、噬菌體含有自己完整的遺傳基因，離開了宿主細胞，就失去了自我繁殖能力。病毒的遺傳基因也會發(fā)生突變，盡管會基因突變，其自我繁殖，仍然離不開宿主細胞，又是為了什么？古今中外的學者，誰能在沒有酶參與的條件下，將DNA模板、磷酸、堿基放在一起便會合成DNA？正如有了制造飛機的圖紙，有了制造飛機的工廠和原料，如果沒有技術(shù)工人就不能生產(chǎn)飛機一樣，我們不能說是飛機圖紙制造了飛機，決定飛機的生產(chǎn)與否、產(chǎn)量高低、性能好壞等，依靠的是那些生產(chǎn)者。
同樣道理，基因恰恰類似于圖紙，對于細胞的分裂與癌變，不能起決定作用。
五、癌變與細胞分裂D.Schmahl(1962)說過凡是有分裂能力的細胞均會癌變。尤復翰(1982)又指出分化成熟的紅細胞、心肌細胞、骨骼肌細胞、神經(jīng)細胞無分裂能力，不發(fā)生癌變?？梢娂毎姆至褜τ诩毎陌┳兪嵌嗝粗匾?。
既然不發(fā)生分裂的細胞不癌變，那么癌變的內(nèi)因就不存在于無分裂能力的細胞，因而癌內(nèi)因只分布于有分裂能力的細胞。要弄清癌變的機制，必須先弄清細胞分裂的機制?？上У氖牵缛藗儾幻靼资裁词前┌Y病因一樣，人們對于細胞分裂的機制也不十分了解。
究竟什么因素決定細胞分裂呢？在動植物細胞分裂過程中，許多激素均會影響細胞的生長，又如年齡、營養(yǎng)、健康狀況等，這就明這些因素對于細胞的生長(增殖與增長)十分重要。但是對于細菌及原蟲這些單細胞生物來說，并無上述各種因素參與，也同樣具有分裂能力，這說明決定細胞分裂能力的因素在細胞本身，而不是來自細胞外。因此，癌內(nèi)因的分布范圍，只限于有分裂能力的細胞內(nèi)，也就是說，在一個細菌細胞的本身就含有導致癌變的癌內(nèi)因。
因此，我們把癌內(nèi)因的分布范圍從自然界縮小到生物界，又從生物界縮小到有分裂能力的單個細胞。
結(jié)論癌內(nèi)因的分布范圍，存在于任何具有分裂能力的細胞中。
六、癌內(nèi)因決定于哪種生物分子組成生物的分子主要有核酸、蛋白質(zhì)、脂類、糖類、酶、維生素以及無機鹽。癌變的內(nèi)因究竟決定于哪種分子呢？核酸是極重要的生物分子，包括DNA和RNA，主要位于細胞核內(nèi)，尤其DNA，是染色體的基本化學成份。決定生物遺傳的基因，是由DNA分子中堿基順序決定的。那么在目前學術(shù)界，普遍認為基因突變是癌變的原因，照此說法，癌變的內(nèi)因應該由核酸尤其是DNA來決定。
發(fā)育成熟的紅細胞沒有細胞核，同時也不具有分裂能力，這說明細胞核對于細胞的分裂，是必備的結(jié)構(gòu)，可見核酸(尤指DNA)是細胞分裂必需的生物分子。
然而在發(fā)育成熟的心肌細胞、骨骼肌細胞和神經(jīng)元，均擁有完整的細胞核，卻仍然沒有分裂能力?？梢妼τ诩毎姆至眩瑔斡屑毎耸遣粔虻摹＿M而說明核酸是必備的，但不是唯一的決定細胞分裂的生物分子。
脂類是細胞生物膜結(jié)構(gòu)中最重要的化學成份。當細胞失去細胞膜，細胞就死亡，說明細胞的生存必需依賴細胞膜。但是細菌等原核生物，本身沒有核膜，同樣具有分裂能力;哺乳動物成熟的心肌細胞、骨骼肌細胞以及神經(jīng)細胞均擁有完整的生物膜，卻不具有分裂能力。說明生物膜是細胞生存所必需的基本結(jié)構(gòu)，但細胞的分裂，并不能由生物膜來決定。脂類主要分布于生物膜，可見脂類對于細胞的生存是不可缺少的化學成份，但是對于細胞的分裂來說，脂類卻不是決定性的生物分子。
糖類是另一類生物分子，一方面氧化分解供能，另一方面是核酸的合成原料，可見也不是細胞分裂的決定因素。
以上分析可以看出，決定細胞分裂的因素，不是核酸，不是脂類，也不是糖類。癌變的前提是細胞分裂，說明癌內(nèi)因，不是核酸、不是脂也不是糖類。
在余下的生物分子中，只有蛋白質(zhì)、酶、維生素和無機鹽類。維生素是酶的輔助成份，參與催化體內(nèi)的化學反應過程，因此，維生素和酶比較，酶的重要性要大得多;比較酶與蛋白質(zhì)，可以發(fā)現(xiàn)酶是特殊的蛋白質(zhì)，具有蛋白質(zhì)的所有性質(zhì)，又含有超越蛋白質(zhì)的生物功能。種種事實表明，如果在這些生物分子中，一定要尋找一種能夠決定細胞分裂的成份，而且只有這唯一的成份時，只能選擇酶分子。
因此，決定細胞分裂的生物分子，最大可能是酶，所以決定癌變的生物分子是酶分子。
七、腫瘤生長的機制腫瘤組織與正常組織最大的區(qū)別是前者能夠無限制的生長。任何腫瘤組織均來源于正常組織，那么腫瘤組織為什么會無限生長呢？腫瘤組織與正常組織一樣具有三種細胞群A-連續(xù)增殖細胞群;B-間歇增殖細胞群;C-永不增殖細胞群。腫瘤組織增殖系數(shù)(GF)公式為GF＝ (A)/(A+B+C)什么因素導致腫瘤生長過快呢？很明顯，只有GF值升高，組織的生長才會加快。如何才會使GF值升高呢？只有研究A、B、C三種細胞群才會明白。
C細胞群不發(fā)生增殖。沒有分裂能力，因而不發(fā)生癌變，對于腫瘤組織的生長沒有意義，此處不加考慮。
A細胞群是處于旺盛增殖的細胞群，目前考慮腫瘤組織生長過快的主要原因是A細胞群癌變，增殖過快所引起。其實這種觀點是完全錯誤的。請看表1，腫瘤細胞的細胞周期不比其來源組織細胞的周期短，有些反而有所加長，試問GF值如何會升高呢？GF值不升高，試問腫瘤組織如何生長快呢？如何無限制地生長呢？B細胞群是暫不增殖細胞群，在公式GF＝ (A)/(A+B+C) 中，如果使GF值增大，A、B、C三大類細胞群必須有所變化。腫瘤組織GF值肯定是增大的，即C和A細胞群對于GF值的變化(變大)沒有影響，可見唯一能夠改變GF值的只有B細胞群。
在某些情況下(如損傷)，B細胞群能夠恢復增殖能力，轉(zhuǎn)入A細胞群，此時GF的公式已發(fā)生了改變。
GF＝ (A+B)/(A+B+C) 或GF＝ (2A)/(2A+C)如果組織細胞只有一個轉(zhuǎn)化為癌細胞，則此時產(chǎn)生腫瘤的組織增殖系數(shù)GF＝ (A+B)/(A+B+C) (n＝1)。
當癌細胞分裂1次，GF＝ (2A+2B)/(2A+2B+C) ，(n＝2)當癌細胞分裂2次，GF＝ (4A+4B)/(4A+4B+C)當癌細胞分裂3次，GF＝ (8A+8B)/(8A+8B+C)當癌細胞分裂n次，GF＝ (2n(A + B))/(2n(A + B) + C)在公式GF＝ (2n(A + B))/(2n(A + B) + C) 中，隨著n→∞，2n(A+B)+C愈來愈接近于2n(A+B)，而C細胞群的細胞數(shù)目能夠忽略不計，此時GF＝1，B最大值。前面已經(jīng)證明腫瘤組織GF公式為GF＝ (2n(A + B))/(2n(A + B) + C)可見，當n＝0時，GF值最小，當n＝∞時，GF值最大。這說明，腫瘤發(fā)生后，隨著時間的延長，分裂次數(shù)的增多，其GF值愈來愈大，于是腫瘤組織的生長愈來愈快。
由于C細胞群不發(fā)生增殖，因此在瘤組織生長中其數(shù)目不變，當瘤細胞隨時間延長經(jīng)過無數(shù)次分裂后，C細胞群的數(shù)目愈來愈相對減少直至忽略不計。在惡性腫瘤組織中，既未能看到神經(jīng)纖維，也未能發(fā)現(xiàn)神經(jīng)末梢，便是由于神經(jīng)細胞屬于C細胞群。
總之，腫瘤組織的發(fā)生與生長，取決于暫不增殖的B細胞群向連續(xù)增殖細胞群的轉(zhuǎn)化。細胞增殖能力的恢復，必須使G0期細胞進入G1期或G2期。G1期是DNA合成前期，此期主要產(chǎn)生合成DNA的酶類;G2期是DNA合成后期，細胞在此期主要合成細胞分裂所必須的蛋白質(zhì)。而處于增殖狀態(tài)的細胞，在轉(zhuǎn)化為G0細胞時，恰恰是從G1和G2期進入G0期，尤其G1期細胞，更易進入G0期。因此G0期細胞轉(zhuǎn)化為G1或G2期細胞的先決條件是擁有足量的高活性的完成DNA復制與蛋白質(zhì)合成的酶類。
八、癌組織細胞中酶學變化DNA復制酶類，在哺乳動物中有DNA polymerase αDNA polymerase βDNA polymerase γ蛋白質(zhì)合成的場所是核糖體，最重要的酶是氨基酸活化酶。
以上四種酶，除DNA polymerase β的活性中心含有二硫鍵(-S-S-)外，其余三種酶的活性中心均含有巰基。
Michael在《DNA polymerases of animal cells》中，詳細地記述了三種DNA polymerases的作用及特性，指出α、γ兩種酶主要用于DNA的合成和復制，而DNA的損傷修復則依靠DNA polymerase β，惡性腫瘤組織中DNA polymerase α、γ活性及含量升高，DNA polymerase β活性及含量下降已經(jīng)由眾多的學者證實;腫瘤組織蛋白質(zhì)合成旺盛也提示氨基酸活化酶的活性應該升高。什么原因才會促使上述四種酶在腫瘤組織中產(chǎn)生上述變化呢？只有一個，即，在腫瘤組織中巰基(-SH)物的含量應該升高。
從上四種酶的變化，可以使G0期細胞和G1、G2期細胞之間轉(zhuǎn)化。但腫瘤細胞的糖代謝以無氧酵解為主，詳實的科研資料也充分證明了參與糖酵解的11種酶中，有磷酸化酶、磷酸果糖激酶、乳酸脫氫酶、醛縮酶等的活性及含量，在腫瘤患者均顯著升高。巧的是，這些酶的活性中心均含有數(shù)目不等的巰基。什么因素會產(chǎn)生這些酶活性共同升高的結(jié)果呢？只有一個，即，在腫瘤組織中巰基(-SH)物的含量應該升高。
脂類是細胞膜重要的組成成份，細胞的旺盛分裂離不開脂類增多的物質(zhì)基礎，這說明，瘤組織中脂類的合成代謝應該是旺盛的。脂肪酸的合成是由脂肪酸合成多酶體系完成催化的。生物界中已發(fā)現(xiàn)有兩類脂肪酸合成多酶體系，有哺乳動物型和大腸桿菌型，兩者均需酰基載體蛋白，而酰基載體蛋白的活性中心含有巰基。
可見，脂類的合成酶系，在活性升高時，也必須有條件，即巰基物的含量應升高。
此外，肝臟腫瘤、前列腺癌患者中堿性磷酸酶、酸性磷酸酶活性及含量升高已是多年來臨床上極重要的診斷指標。此二酶的活性中心也均含有巰基。
那么，腫瘤組織中巰基含量是否升高呢？九、癌組織中巰基含量的變化從理論上講，導致癌組織一系列變化的原因，應該是癌組織中巰基物含量的升高。但訖今為止，國內(nèi)外有關(guān)巰基與腫瘤的關(guān)系從無報道，從致癌的化合物、藥物及至激素來看，直接含有巰基的物質(zhì)極罕見。鑒于此，筆者在復旦大學生物化學系黃偉達主任指導下，對人和動物多種腫瘤和瘤周組織中巰基含量，進行了測定，結(jié)果如下頁表2所示。從中看出，全部腫瘤組織的巰基摩爾含量，均顯著高于其周圍對照組織，且隨腫瘤惡性程度的升高，其巰基的摩爾含量升高愈顯著。
那么，為什么癌組織中巰基的摩爾含量會升高呢？這些巰基是來自巰基酶還是來自其它物質(zhì)呢？巰基的摩爾數(shù)目增多是癌變的原因還是癌變的結(jié)果呢？十、癌組織巰基變化的機制
(一)生物體內(nèi)巰基的來源巰基(-SH)是生物體內(nèi)半胱氨酸的分子上的功能基因之一，其化學性質(zhì)活潑，很容易被氧化，也常參與多種化學反應，巰基在生物體內(nèi)主要分布于游離狀態(tài)或蛋白質(zhì)分子上的半胱氨酸分子上的殘基。
半胱氨酸的前體物質(zhì)是蛋氨酸，因而也是生物體中的半必須氨基酸。它在生物體內(nèi)代謝的途徑有①合成蛋白質(zhì)②轉(zhuǎn)化為谷胱甘肽③變成胱氨酸④變成牛磺酸⑤變?yōu)楸崞渲?，半胱氨酸轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)、谷胱甘肽、胱氨酸后，半胱氨酸分子中的巰基未遭到破壞。
半胱氨酸轉(zhuǎn)化為?；撬岷?，當新的巰基化合物與牛磺酸作用時，又會重新?lián)碛袔€基。
只有當半胱氨酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸時，半胱氨酸分子中的巰基才會不可逆地被破壞。
綜上所述，生物體內(nèi)升高巰基的途徑有二要么蛋氨酸或巰基物質(zhì)吸收增多，要么巰基的破壞減少。
在癌組織局部，巰基的含量升高，生物體的其它部位則巰基含量不升高，從而提示在癌組織的局部，有某種因素，導致了巰基含量的升高。這個因素，便是外源性致癌因素。
可是外源性致癌因素，無論是生物因素，還是理化因素，均無直接為生物體提供巰基物，可見癌組織中巰基含量的升高是由于生物體內(nèi)尤其是癌變組織中巰基的破壞減少所致。
而導致癌組織中巰基破壞減少的原因，則只能是致癌因素保護了巰基，阻止了巰基的破壞。
(二)巰基與雙硫鍵的化學性質(zhì)首先看看巰基的化學性質(zhì)R-SH+Hg++→R-S-Hg-S-RR-SH+H2O2→R-SO3HR-SH+ICH2COOH (弱堿)/() R-S-CH2COOHR-SH+ICH2CONH2(弱堿)/() R-S-CH2CONH2R-SH+ (弱堿)/() R-S- R-SH+C6H5-ASO→ -C6H5R-SH+HASO→ R′-SH+R-S-S-R→R′-S-S-R+R-SH二硫鍵的化學性質(zhì)R-S-S-R+R′-SH→R′-S-S-R+R-SHR-S-S-R+H2O2→2R-SO3H R-S-S-R+Hg++→R-S-Hg-1-R巰基的保護基因有-O-芐基 B2l對甲氧芐基 MBzl三苯甲酸 Trt
乙酰胺甲基 AcmS-芐基半胱氨酸總之，半胱氨酸分子上巰基，能與如下幾類物質(zhì)發(fā)生反應重金屬鹽類，如Hg++等。
烷基化劑，如ICH2COOH、ICH2CONH2、帶活性的乙烯雙鍵類等。
亞砷酸及其鹽，如C6H5-A8O等。
氧化劑，如H2O2。
二硫化物。
真正重要的不在于與巰基反應的試劑之多少，而是在于這些巰基試劑多數(shù)是強烈的致癌劑，如ICH2COOH、ICH2CONH2、亞砷酸鹽、乙烯亞胺等。
因此，探討外源性致癌因素與巰基的關(guān)系，對于揭示癌癥之病因具有重大的科研價值。
(三)放射性因素之致癌機制自從Frieben(1902)和漢堡X線管工廠觀察發(fā)現(xiàn)了第一例手背部皮膚癌以來，有關(guān)X射線致癌的報導愈來愈多，以致各國都建立了嚴格規(guī)定的強制性措施來預防X射線的有害作用。至今，X射線導致癌癥的理論已不再受到任何懷疑。
具有放射性的物質(zhì)的致癌作用也相繼由國外學者證實。1933年，蘇聯(lián)一位從事放射性物質(zhì)工作的醫(yī)生(從事該工作的25位人員)的手指甲床發(fā)生了癌性潰瘍;此后，蘇聯(lián)學者H.H彼得洛夫等，在猴子脛骨中植入鐳，證實了其致癌性;法國學者Sabin在家兔身上注入氯化鐳，取得了相同的結(jié)果。如今，不僅發(fā)現(xiàn)鐳是致癌物，就連放射性P32、I131、Sr90、Ag110等的致癌作用，也一一得到了證實。1946年日本廣島原子彈爆炸，在距爆炸中心5KM范圍內(nèi)引起白血病極高的發(fā)病率，至今使人心有余悸。
日光的致癌作用，研究得也十分詳細。Unna(1894)報道，陽光是決定性的致癌物，陽光中的紫外線部份，是這種致癌作用的原因。Profirow(1965)報道，在保加利亞的農(nóng)民中，皮膚癌占有腫瘤的72%，那里的農(nóng)民經(jīng)常暴露于陽光下耕作。Roffo(1932-1933)、A.B.BaπOB(1939)發(fā)現(xiàn)，在實驗籠中飼養(yǎng)小白鼠時，向陽一面的動物比日光照不到的動物皮膚癌的發(fā)病率要高得多，如在籠子表面裝有濾除紫外線裝置后，動物不產(chǎn)生腫瘤，蘇聯(lián)學者還發(fā)現(xiàn)，水銀石英燈的紫外線比日光的致癌作用強。近代的科研證明，具有致畸、致變、致癌作用的射線劑量，是在1-5Rad之間，此一點，已在谷酰之《腫瘤放射治療學》中有詳述。
雖然射線是致癌因素，但放射治療則是當前十分重要的癌癥治療措施，這是什么原因呢？原來用于治療的射線劑量，是大劑量;而誘發(fā)腫瘤的射線劑量，則是小劑量。射線劑量的不同，導致生物體內(nèi)的變化也不同。
大劑量的射線主要作用于生物大分子，尤其是破壞了DNA、RNA分子，導致細胞死亡。生長旺盛的細胞尤其是癌細胞，對于射線尤為敏感。因此，用于治療目的的大劑量射線，不僅殺死腫瘤組織細胞，同時也損傷了照射部位的生長旺盛的正常細胞，特異性不大，負作用大。
小劑量的射線(1-5γad)作用于生物體時，對于小分子物質(zhì)尤為敏感，尤其是水分子，作用之結(jié)果，使在生物體內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，如H2O2、RO等。
H2O2作為自由基最重要的一種，既分布于細胞內(nèi)液，也分布于細胞外液，在前面已經(jīng)提到R-SH+H2O2→R-SO3HR-S-S-R+H2O2→2R-SO3H
一方面，H2O2能夠破壞細胞膜等，這是其導致生物細胞易衰老的原因;另一方面，H2O2對于巰基酶活性中心之-SH作用使之失活，也會促使細胞壽命縮短。
但是，對于H2O2的致癌機制來說，H2O2作用于二硫鍵的反應則是最重要的。第一，DNA polymerase β的活性中心含有二硫鍵，極易遭到H2O2的作用而出現(xiàn)不可逆抑制，從而失去其本身的功能，即失去對損傷或改變了的DNA的修復，導致基因突變;第二，H2O2對于所有的二硫鍵均會作用，其結(jié)果，必然導致-S-S-相對減少，-SH則相對過多，從而使細胞內(nèi)形成-SH含量升高狀態(tài)，于是，導致一個或多個細胞癌變的條件便成熟了。
射線致癌，歸根結(jié)底離不開其與生物體內(nèi)巰基及二硫鍵的相互作用。
(四)化學致癌物致癌機制Ⅰ.前言化學性致癌物分八大類①多環(huán)芳香烴polycyclic aromatic hydrocarbons PAH②黃曲霉素類③芳香胺類④亞硝胺類⑤直接作用的烷化劑⑥無機致癌物⑦植物成份⑧藥物和激素D.Schmahc(1962)曾出版了《惡性腫瘤的發(fā)生、生長和化療》，于1984年由林培中博士與唐慰慈教授譯為中文。該書對于化學性致癌物的分類、致癌作用及致癌機制有極為詳盡的描述。結(jié)合我們本書的目的，從與巰基的關(guān)系出發(fā)，我們對于該書的分類方法進行保留性的歸納后，重新分為如下幾類①含活性乙烯雙鍵類PAH、黃曲霉毒素、植物成份及少量芳香胺類;
②砷劑與亞硝胺類三價砷、三價氮、氨基團等;
③直接作用的烷化劑類④藥物和激素類下面將分別介紹之。
(1)含活性的乙烯雙鍵類植物成份，尤其是一些高等植物成份，也報道有致癌作用，有關(guān)這方面研究的工作不多，目前有代表性的且重要的一種是吡咯西啶生物堿，它的名稱來自含氮的雙環(huán)堿吡咯里西啶。天然存在的吡咯西啶生物堿對于試驗性動物 肯定具有致癌作用，而且強生物活性的吡咯西啶生物堿必須在吡咯西啶骨架中的1，2位具有一個雙鍵。可見，雙鍵對其致癌作用之重要。
黃曲霉毒素是另一類致癌物，1960年英國發(fā)生了“火雞怪病”，大量的火雞、家禽死亡，引起了世界關(guān)注。后來證明是喂的巴西花生粉中有黃曲霉毒素(Aflatoxin)，并于1962-1965年闡明了其系列結(jié)構(gòu)(見下頁)。
這類化合物的特征是具有五個環(huán)組成的雜環(huán)結(jié)構(gòu)骨架，它含有一個香豆素系統(tǒng)及和它合并的雙呋喃系統(tǒng)。黃曲霉毒素B族還含有一個環(huán)戊烷環(huán)，G組則含有一個六元內(nèi)酯環(huán)。

末端呋喃環(huán)上2，3位的雙鍵對于黃曲毒霉的致癌作用有重要意義。許多實驗結(jié)果得出結(jié)論末端呋喃環(huán)中不含雙鍵的黃曲霉素類化合物不具致癌性，反之致癌。同時發(fā)現(xiàn)，末端呋喃環(huán)中有完整的乙烯雙鍵的羥化黃曲霉素，致癌作用減弱，說明雙鍵附近的羥基能減弱致癌性。
此處，我們只要記住在末端呋喃環(huán)中含乙烯雙鍵的黃曲霉素化合物才致癌即可。
多環(huán)芳香烴(PAH)致癌作用的研究最早始于(1795年，Pott等發(fā)現(xiàn)煤焦油能引起掃煙囪工人患陰囊癌，他首先描寫了人體腫瘤的出現(xiàn)，最早證明有致癌作用的化學物質(zhì)是煤焦油中的PAH。實驗性致癌研究也同樣與這類物質(zhì)呈相關(guān)關(guān)系，1915年日本yamagiwa和Ichikawa首次描寫了癌變動物試驗，他們將煤焦油涂刷家兔皮膚后觀察到生成局部腫瘤。后來，Bloch與Dreifuss的研究指出，致癌活性集中于煤焦油中高沸點餾分，光譜分析指出PAH是活性成份。
PAH致癌作用的特點①幾乎所有的致癌性代表物均為芳香族4，5或6環(huán)系統(tǒng);②大部份致癌性PAH是菲的衍生物，但在菲環(huán)系統(tǒng)上至少還連有另一個芳香環(huán)才致癌;③根據(jù)電子密度的量子化學計算結(jié)果，致癌性的 PAH具有一個富電子的、有明顯雙鍵特征的高反應性鍵。在菲的基本骨架中，9，10鍵是特別富電子的，類似于一個游離的乙烯雙鍵，其中有一個π電子對。
PAH的化學結(jié)構(gòu)與致癌性見下頁表，總之，只有PAH骨架上具類似乙烯雙鍵者才致癌。


(2)砷劑與亞硝胺關(guān)于砷對于人體某些癌的生成意義的認識(Paris，Ayrton，Geyer)也可以追溯到十九世紀初。從歷史上看，砷是我們發(fā)現(xiàn)的第一個有致癌作用的藥物，是繼煤焦油之后發(fā)現(xiàn)的第二個外源性致癌物。
早期應用三氧化二砷(Fowler氏溶液)治療鱗屑病，據(jù)Fierz報道，262個病人中(均用過Fowler氏溶液)，40%出現(xiàn)了手掌握心角化過度癥，8%轉(zhuǎn)化成皮膚癌，并隨劑量增加得癌率也增加。在30年代及40年代，三氧化二砷作為葡萄種植中的殺蟲劑，使得許多果農(nóng)經(jīng)常出現(xiàn)由砷引起的惡性腫瘤，如皮膚癌、肝癌、支氣管癌。
以上資料告訴我們一個事實砷劑是致癌物，具有致癌作用的砷劑是三價砷。至今許多專著中仍把砷作為無機致癌物歸類，這不科學，因為三價砷是有機砷。
有機砷是十分重要的巰基試劑C6H5AsO+2R-SH→ AsC6H5+H2O因此，可以想象砷劑致癌與巰基的關(guān)系是多么的密切。如果將上面的化學方程式展開用結(jié)構(gòu)式表示則為 從結(jié)構(gòu)式中，可以看出與巰基發(fā)生作用的功能團是-As＝0。為什么一定要強調(diào)-As＝0與巰基的作用關(guān)系，主要是為了與亞硝基-N＝0的致癌作用相聯(lián)系。三氧化二砷易溶于弱堿性液，其水溶液是亞砷酸或亞砷酸鹽。
亞硝基化合物在上世紀末已為人們所知。當亞硝基化試劑(一氧化氮或亞硝酸HNO2)作用于含一個仲氮原子的化合物時，即生成N-亞硝基化合物。N-亞硝基化合物是最主要的化學致癌物其分子通式為 其中R可為烷基、芳基、酰胺基、芳胺基、烷氧基或芳氧基、R1與R2可以相同，也可以不同。典型的代表物是 無論亞硝酸鹽還是N-亞硝基化合物，全部的致癌結(jié)構(gòu)中均離不開亞硝基-N＝0，至于N-亞硝基化合物中的R，則多為巰基的保護劑中的功能基。
(3)芳香胺類致癌物Rehn(1895)首次指出，苯胺有致膀胱癌的作用。他發(fā)現(xiàn)從事生產(chǎn)染料品紅的四名工人患上的膀胱癌。后來，英國Case、Pearson發(fā)現(xiàn)萘胺是更強的膀胱致癌物。當今的動物實驗資料提出了很大一類的芳胺致癌物，主要引起動物發(fā)生膀胱、肝臟及胃腸道產(chǎn)生腫瘤。
芳香胺類是多環(huán)芳香烴的環(huán)系統(tǒng)上含有氨基構(gòu)成，其致癌性遠遠超過多環(huán)芳香烴。因此，芳香胺類是特殊的多環(huán)芳香烴，一方面，PAH本身是致癌的，另一方面，氨基很容易由羥胺、亞硝基、硝基等基團經(jīng)過代謝而互相轉(zhuǎn)化，可被看作-NO對待，大大加強了其致癌性。這些轉(zhuǎn)化的場所是肝臟。
直接作用致癌的烷化劑Druckrey(1970)實驗并證實了下列物質(zhì)的致癌性CH3I
(4)具有致癌性的藥物D.Schmahl(1977)對由藥物誘發(fā)的腫瘤從量的方面做了粗略估計，指出在世界范圍內(nèi)，約1/10000的癌瘤是由藥物引起的，其中，砷劑500例，氯霉素30例，細胞抑制劑800例，非那西丁200例，保太松100例，乙烯雌酚250例，焦油軟膏30例，可見藥物對于腫瘤的發(fā)生不得不受到重視。
砷是最早知道的具有致癌作用的藥物，已不再詳述。烏拉坦(H2NCOOC2H5)作為孕酮的助溶劑，Nettleship(1943)Txnnerbaum等多次發(fā)現(xiàn)并證實其誘發(fā)動物實驗性腫瘤;Corbett(1976)指出吸入性麻醉劑CH2Cl-O-CH2Cl及CH2＝CHCl是對人有作用的致癌物;Rossi L(1977)報道了大劑量苯巴比妥可致小鼠和大鼠的肝細胞瘤;Haltengren，N(1965)報道濫用非那西丁引起腎盂癌;Juhasz J(1957)首批觀察到抗結(jié)核藥物異煙肼能誘發(fā)動物腫瘤;Gardener W.U(1941)就發(fā)現(xiàn)乙烯雌酚可能具有致癌作用并后來證實其正確;抗癌藥物，尤其是烷化劑類，不僅經(jīng)實驗研究，而且最近也經(jīng)許多臨床病例證明是致癌的。氮芥及乙烯亞胺的致癌作用，經(jīng)實驗證實已近50年。日本1929-1945年間生產(chǎn)芥子氣的工人，呼吸道惡性腫瘤比普通居民高33倍，德國學者隨后證實了日本學者的結(jié)果。德國學者自75年始，用多年時間證實環(huán)磷酰胺所致的實驗性腫瘤與臨床病人因治療癌癥而應用環(huán)磷酰胺或烷化劑后引起的腫瘤一樣，即膀胱癌和白血病。
綜上所述，藥物能引起腫瘤已不再受到人們的懷疑，如此具有致癌作用的藥物誘發(fā)腫瘤的環(huán)節(jié)，基本上同化學致癌物的機制相同。
十一、致癌因素作用于巰基而致癌的問題且不說病毒的致癌機制，由射線導致的生物體H2O2升高、化學性致癌物中的-ASO、-NO、帶活性的雙鍵結(jié)構(gòu)、烷化劑等，均能或極可能地與巰基發(fā)生反應，從而對巰基進行修飾。事實上，我們也在試圖把能否與巰基作用這一特征，做為鑒定外源性因素能否致癌的分水嶺。
雖然如此，在我們的面前仍遺留下許多令人困惑的問題。如果說，上述因子均會作用于巰基，從理論上說，這些巰基已被修飾，結(jié)果則是導致巰基的摩爾數(shù)目減少;如果上述因素直接作用于巰基酶，其結(jié)果則是導致巰基酶的活性喪失，與我們設想的結(jié)果完全相反。
事實上，腫瘤組織中的巰基摩爾含量是升高的;腫瘤組織中巰基酶的活性是升高的，印木泉(1991)在對體外細胞培養(yǎng)誘變試驗中，證實半胱氨酸具有抗突變作用，而照我們的理論，半胱氨酸應是誘變劑。種種以上表現(xiàn)，究竟是怎么回事呢？我們再回顧一下放射線的致癌性有確鑿證據(jù);
亞砷酸鹽的致癌性有確鑿證據(jù);
亞硝胺類的致癌性有確鑿證據(jù);
帶活性雙鍵的PAH、Aflatoxin、植物成份的致癌性有確鑿證據(jù);
巰基酶活性在腫瘤患者時是高的，有確鑿證據(jù);
巰基的摩爾含量在腫瘤組織含量是高的，有確鑿證據(jù);
上述致癌物與巰基酶作用后的結(jié)果，是巰基酶活性的喪失，證據(jù)確鑿;
那么，問題在哪里呢？很明顯，在生物體內(nèi)，致癌因素沒有直接與巰基酶發(fā)生作用，只能是這樣。證據(jù)有51.亞砷酸鹽、亞硝胺在堿性狀態(tài)下穩(wěn)定。
2.巰基與烷化劑反應和與活性乙烯雙鍵反應的條件是弱堿環(huán)境。
3.在人體，細胞外液PH為7.4，屬弱堿環(huán)境，而細胞內(nèi)液PH為7.0，屬中性環(huán)境。
4.有關(guān)巰基酶與巰基試劑作用后失活的結(jié)論，均是體外實驗時得出的結(jié)果。
5.印木泉有關(guān)半胱氨酸具有抗突變作用的結(jié)論也是在體外實驗中獲得的。
可見，在人體內(nèi)，化學性致癌因素存在的部位及其與巰基反應的場所是在細胞外液。由于絕大多數(shù)酶是由細胞本身產(chǎn)生且分布于細胞內(nèi)，因此，致癌性化合物并沒有直接作用于巰基酶。
在細胞外液中的含巰基物質(zhì)(主要是半胱氨酸)，與致癌性化合物發(fā)生反應產(chǎn)生復合物，在PH7.4的細胞外液中是穩(wěn)定的，但是當這些復合物進入細胞后，由于PH為7.0，這些復合物就變得不穩(wěn)定而解離，使半胱氨酸上的巰基游離，于是，細胞內(nèi)形成了巰基摩爾數(shù)升高的狀態(tài)。
可是，為什么腫瘤只發(fā)生于特定的組織和細胞呢？十二、腫瘤產(chǎn)生的組織部位的特異性腫瘤是個局部疾病。為什么生物體那么多的組織和器官，腫瘤只發(fā)生于某一部位或只發(fā)生于某種特定組織？如多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤病，為什么只發(fā)生于神經(jīng)組織？又如消化道腫瘤，為什么有的發(fā)生于食道，有的發(fā)生于胃，有的發(fā)生于結(jié)腸，而有的發(fā)生于肝膽？首先，取決于致癌因素的作用方式和部位。如砷劑作為皮膚病的藥物，僅在涂抹的局部產(chǎn)生癌變;又如用煤焦油涂抹兔耳，僅在涂抹區(qū)產(chǎn)生腫瘤;黃曲霉毒素多是通過消化道吸收，僅在肝臟產(chǎn)生腫瘤。
再是取決于致癌物的親和性。如黑色對于射線的吸收能力最強，因此在由陽光等引起的皮膚癌中，黑色素瘤較多發(fā)且多為惡性，又如N-亞硝基化合物，在結(jié)構(gòu)式為 時，主要產(chǎn)生肝臟腫瘤，而在結(jié)構(gòu)式為 時，主要產(chǎn)生食道腫瘤。-NO決定了該類物質(zhì)的致癌性， 的不同，則決定了其對組織的不同親和性。
致癌物在體內(nèi)的代謝及排泄途徑，對于癌變的組織和器官有重要關(guān)系。有些芳香胺本身沒有誘發(fā)泌尿系腫瘤的作用，經(jīng)過肝臟代謝后從泌尿系排出時則表現(xiàn)出強致癌性。由于芳香胺類的-NH2可與-NO互相轉(zhuǎn)化，肝臟是代謝的最重要的器官，腸道是體內(nèi)芳香胺的發(fā)源地，因此，腸道產(chǎn)生-肝臟代謝-腎臟排泄途徑，導致了芳香胺類主要誘發(fā)腸道、肝臟、腎臟、膀胱腫瘤的結(jié)果，雖然染料工人接觸外源性芳胺機會增加，但是其產(chǎn)生腫瘤的組織和器官并無改變，改變的只是上述腫瘤發(fā)病率的增加。
十三、腫瘤產(chǎn)生的細胞特異性在人體，所有的組織和器官均會產(chǎn)生腫瘤，但并非所有的細胞均會癌變。由于成熟的神經(jīng)細胞、心肌細胞和骨骼肌細胞不發(fā)生分裂，這些細胞也不發(fā)生癌變。為什么同是神經(jīng)組織，只有膠質(zhì)細胞等發(fā)生癌變而成熟的神經(jīng)元不癌變？為什么同是肌肉組織，平滑肌細胞會癌變而心肌、骨骼肌細胞不癌變？細胞的癌變與否由什么決定呢？張昌 (1987)在《生物化學》一書中，對結(jié)締組織的生化進行了詳細的描述，尤其是對膠原蛋白的代謝，尤為細致。文中指出各種能夠合成膠原的細胞如下成纖維細胞成骨細胞破骨細胞成牙質(zhì)細胞平滑肌細胞上皮細胞軟骨細胞神經(jīng)視網(wǎng)膜細胞脊索細胞內(nèi)皮細胞為什么把膠原代謝和細胞的癌變聯(lián)系起來？由于以下幾個方面的原因1.在上述能夠合成膠原的細胞，無一例外地會產(chǎn)生癌變。而不發(fā)生癌變的細胞(如神經(jīng)細胞、骨骼肌細胞、心肌細胞)，均無合成膠原蛋白的能力。
2.良性腫瘤均有一層纖維包膜，該包膜主要成份是膠原纖維。惡性腫瘤對周圍組織浸潤性強，該包膜常不完整或缺乏，可見這層纖維包膜對于腫瘤的生長之重要性。這里有幾個問題尚不明確膠原纖維包膜是腫瘤產(chǎn)生的還是瘤周正常組織產(chǎn)生的？惡性腫瘤的纖維包膜是不能產(chǎn)生還是生成后受到了酶的破壞？3.膠原旦白的生物合成分為細胞內(nèi)過程和細胞外過程。細胞內(nèi)合成過程包括①前α鏈的轉(zhuǎn)錄、翻譯和翻譯后修飾;
②前膠原的形成移位和分泌。
細胞外過程包括①前膠原兩端前肽被切除，原膠原形成;
②原膠原分子內(nèi)和分子間共價交聯(lián)，即膠原纖維形成。
這里應該注意的是膠原纖維蛋白的氨基酸組成中并無半胱氨酸;而細胞內(nèi)前膠原的N端和C端均有前肽片斷，前肽的分子結(jié)構(gòu)上含有豐富的由半胱氨酸組成的二硫鍵。前肽的鏈間二硫鍵是前α鏈裝配成三股螺旋分子所必需的，抑制這種共價鍵的生成就會妨礙前膠原的生成，進而阻斷膠原蛋白的合成。
當前膠原分子分泌至細胞外表面，N端和C端的前肽立即被酶切割掉，形成原膠原，再形成膠原纖維。
膠原蛋白的代謝過程說明①構(gòu)成腫瘤包膜的膠原纖維來自腫瘤細胞。
②前肽是細胞外液中半胱氨酸的重要來源之一。
③細胞內(nèi)抑制二硫鍵生成的因素(-SH含量升高)能抑制和阻斷膠原蛋白的合成，惡性腫瘤之纖維包膜不完整或缺如極可能是癌細胞內(nèi)巰基摩爾數(shù)目升高破壞了二硫鍵的形成而使膠原蛋白合成障礙，而不是由于纖維包膜被酶降解掉所致。
④能產(chǎn)生癌變的細胞對于半胱氨酸的通透性具有高度選擇性。半胱氨酸的吸收，需要細胞膜上特有的載體才可以將之攜帶入細胞內(nèi)。由于具合成膠原能力的細胞內(nèi)有大量之含豐富半胱氨酸之前肽，可見此類細胞的膜上含有半胱氨酸載體蛋白，對半胱氨酸的通過有高度特異性。
綜上所述致癌物的接觸部位、吸收方式、親和性以及代謝排泄方式等，決定了癌變發(fā)生的部位及組織器官，而半胱氨酸的通透性決定了癌變組織中的特定細胞。
如三氮烯(1-對硝基苯基-3，3-二甲基三氮烯) 由于對神經(jīng)組織有高度親和性，病變發(fā)生的部位主要是腦和外周神經(jīng)系統(tǒng)。又因神經(jīng)細胞無合成膠原能力，因而神經(jīng)細胞對于半胱氨酸通透性差，癌變只能發(fā)生于其它細胞，尤其是膠質(zhì)細胞。
即致癌物與巰基物形成復合物后，有雙重選擇組織特異性;
細胞特異性。
因此對癌內(nèi)因的分析得出如下結(jié)論1.癌癥是有內(nèi)因的，內(nèi)因是有范圍的。
2.從整個自然界來觀察，癌內(nèi)因只分布于生物界。
3.從生物界來觀察，癌內(nèi)因分布于有分裂能力的細胞中。
4.從細胞水平觀察，癌內(nèi)因分布于生物大分子中。
5.從生物大分子水平觀察，癌內(nèi)因分布于蛋白質(zhì)分子中。
6.從蛋白質(zhì)分子水平觀察，癌內(nèi)因分布于參與蛋白質(zhì)組成的半胱氨酸分子上。
7.從半胱氨酸分子水平看，癌內(nèi)因取決于其分子上的巰基(-SH)和由之形成的二硫鍵(-S-S-)的比例關(guān)系。
8.從元素組成來看，癌內(nèi)因最關(guān)鍵的元素是硫。
本發(fā)明在上述發(fā)現(xiàn)的基礎上，進一步通過對巰基含量與癌變組織關(guān)系進行了測定。
實施例
一、標本來源及分組(一)腦瘤組 ①腦膜瘤 26例②膠質(zhì)瘤Ⅰ級 10例③膠質(zhì)瘤Ⅰ-Ⅱ級 10例④膠質(zhì)瘤Ⅲ-Ⅳ級 10例(二)其它部位腫瘤組①脂肪瘤 11例②神經(jīng)鞘瘤 13例③子宮肌瘤 12例④大腸癌 12例⑤胃癌 13例⑥乳腺癌 13例(三)動物移植性腫瘤①黑色素瘤組 13例②Lewis肺癌 13例③Slgo肉瘤 13例手術(shù)取腫瘤組織及瘤周正常組織約200-500mg，加入1ml生理鹽水的玻璃勻漿管中電動勻漿，離心(2300×g，30分)，取上清液，-20℃冰箱儲存待測，或液氮保存。
二、測定巰基的試劑及器材DTNB試劑，又稱Elman試劑，即5，5’-二硫基雙-2-硝基苯甲酸，購自Fluka公司。
光吸收測定取自日本津島公司生產(chǎn)的UV-2400分光光度儀。
三、巰基的定量巰基的定量采用5，5’-二硫基雙-2-硝基苯甲酸試劑(DTNB試劑)。操作如下
將腫瘤及瘤周正常組織提取液取20ul，與5ml1%十二烷基磺酸鈉溶液混合，加入20ulDTNB溶液(3.96mg/ml 0.1N磷酸鹽緩沖液pH7.0)，室溫放置10分鐘后測定412波長處的光吸收。
巰基的計算巰基的含量＝ (光吸收值)/(13600×樣本量(mg)) ×50(μmol/mg)四、統(tǒng)計學分析采用均數(shù)±株準誤差(X±Sem)表示，采用組間均數(shù)比較，用T檢驗判斷比較差異的顯著性，以P＜0.05＊為相差顯著，P＜0.01＊＊為相差非常顯著。
五、結(jié)果參閱

圖1-3，從測定結(jié)果充分證明本發(fā)明者對癌內(nèi)因的分析的正確性，為征服癌癥提供診斷、治療和預防的有力手段。
表1.人正常細胞與腫瘤細胞增殖周期的比較正常細胞 細胞周期GC 腫瘤細胞 細胞周期GC(小時) (小時)食管上皮 144 食管癌 250.8胃上皮 60 胃癌 80.8結(jié)腸上皮 24-48 結(jié)腸癌 22-125骨髓細胞 24-40 急性白血病 48-90
權(quán)利要求
1.一種癌內(nèi)因的分析測定方法，其特征在于取腫瘤及瘤周正常組織提取液各20μl，分別與十二烷基磺酸鈉溶液5ml混合，加入20μlDTNB溶液(3.96mg/ml，和0.1N磷酸鹽緩沖液至PH7.0)，室溫放置10分鐘后，分別測定波長412處的光吸收；所得的總吸收值采用組間均數(shù)比較，用均數(shù)±標準誤差(×±Sem)表示，用T檢驗判斷比較差異的顯著性。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于以P＜0.05為相差顯著，P＜0.01為相差非常顯著。
全文摘要
本發(fā)明涉及對癌內(nèi)因的分析以及對癌內(nèi)因的測定方法。
文檔編號G01N21/31GK1105453SQ94100840
公開日1995年7月19日 申請日期1994年1月12日 優(yōu)先權(quán)日1994年1月12日
發(fā)明者路紅社 申請人:路紅社