專利名稱：尿液中鋅含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于尿液的測試方法，具體涉及一種尿液中鋅含量的測定方法。
微量元素鋅是維護機體正常免疫功能及保持機體防御機制完整性所必需的物質(zhì)，對人的生長和性的發(fā)育，調(diào)節(jié)淋巴細胞功能等方面發(fā)揮重要作用。鋅的缺乏會造成蛋白質(zhì)、脂肪、糖和核酸等的合成障礙，影響人的生長發(fā)育；會造成食欲低下，傷口不易愈合，脫發(fā)及口腔潰瘍等病癥；孕婦孕期鋅營養(yǎng)不良，可造成胎兒先天畸形。鋅還是許多酶的組成部分，許多二肽酶和氨肽酶靠鋅來激活。因此，準確測定人體鋅代謝水平，對于診斷、治療疾病，改善人體鋅代謝水平，促進生長發(fā)育，恢復健康，增強體質(zhì)極為重要。然而，盡管人們對人體鋅的研究已有30多年的歷史，但至今仍未找到一種公認的準確、靈敏反映人體鋅營養(yǎng)狀況的指標。
迄今，大多通過測試頭發(fā)或血清(血漿)中的鋅含量來推知人體鋅代謝水平是否正常。
發(fā)鋅檢測法，雖毛發(fā)取材容易，但測試設備原子分光光度儀比較昂貴，不易推廣，而且，由于毛發(fā)易受環(huán)境污染，但尚無一種公認的可靠的洗滌方法，會影響測試結(jié)果，更為重要的是，當人體缺鋅時，影響體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，使毛發(fā)生長減慢，發(fā)鋅含量反而增高，顯然，發(fā)鋅的含量不能準確反映人體鋅含量水平。
血鋅檢測法，雖比較簡單，但血清或血漿中鋅濃度易受各種生理(如膳食、妊娠等)、病理(如應激、肝腎疾病等)的影響，而且，當人體缺鋅時，組織分解增強，細胞內(nèi)的鋅可釋放入循環(huán)，血鋅含量增高，影響測試結(jié)果，所以，血鋅法測試結(jié)果也不能準確反映人體鋅含量水平。
相反，當人體缺鋅時，機體會保護性地減少鋅的排泄以維持體內(nèi)鋅的平衡，即排泄尿液中的鋅含量能準確反映體內(nèi)相應的鋅代謝水平。
本發(fā)明的目的在于提供一種能準確反映體內(nèi)鋅代謝水平的尿液中鋅含量的測定方法。
本發(fā)明的尿液中鋅含量的測定方法，其特征在于按以下步驟進行1) 在比色管中加入一定量的尿液，2) 加入A液調(diào)節(jié)尿液的PH值至7.5-10，3) 加入過量B液，與尿液中的鋅絡合生成絡合物，4) 邊搖動比色管、邊加入C液，混勻，直至絡合物沉淀全部溶解，5)用72型分光光度計，550nM處比色，通過標準曲線查得尿液中鋅的濃度，所述的A液是堿性溶液，所述的B液是1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(簡稱PAN)，
所述的C液是溶解Zn-PAN絡合物的有機溶劑或非離子表面活性劑。
所述的堿性溶液，最好選用氨緩沖液或氨水。
所述的過量B液，是指加入的B液的量足以使尿液中的鋅離子全部生成Zn-PAN絡合物。
Zn離子與B液1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(簡稱PAN)反應生成的絡合物，可溶于氯仿、四氯化碳等有機溶劑中，從而通過比色，測定鋅的含量，或在非離子性表面活性劑，例如異辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(簡稱Triton X 100)的增溶作用下，Zn-PAN絡合物可溶于水中，顯橙紅色，其吸收峰在550nM波長處，摩爾吸光系數(shù)ε550＝5.6×104，操作十分方便，可以在較大量的Ca、Mg、K、Na、Ci、Po等元素存在下測定微量鋅，這些共存元素不會干擾鋅的測定而影響測定結(jié)果。
在實際測定過程中，在加入A液調(diào)節(jié)尿液PH值后，也可以先加入C液，后加B液。
Z標準曲線的繪制稱取純鋅0.1000克，溶于少量的鹽酸中，以蒸餾水多次稀釋配制成鋅濃度為20M的標準溶液；取5毫升比色管5支，分別加入上述20μM的鋅標準溶液0.0，0.5，1.0，2.0，2.5毫升；加入A液1毫升；
加入B液0.2％PAN酒精溶液0.25毫升；加入C液20％ Triton X 100 0.2毫升，混勻；加入蒸餾水至刻度；用空白管調(diào)零，550nM光密度比色，依此繪制鋅濃度標準曲線。
與現(xiàn)有的發(fā)鋅或血鋅檢測法相比，本發(fā)明的尿液中鋅含量的測定方法，不僅尿液取樣容易，也避免了抽血給人造成的痛苦及危害，更為重要的是尿鋅法所測的鋅濃度能準確反映人體的鋅代謝水平，且靈敏度高，重復性好，易于動態(tài)觀察、早期判斷體內(nèi)鋅含量水平的變化，以便及時診斷和治療。
實施例取5毫升比色管5支，分別加入隨機尿液各2.5毫升，加入1.5毫升氨緩沖液調(diào)節(jié)PH值至8，加入0.2毫升20％Triton X 100溶液，混勻；再加入0.25毫升0.1％PAN溶液，混勻；加入蒸餾水至刻度；用空白管調(diào)零于550nM波長處，以試劑空白為參比，測定其吸光度，從標準曲線上查得各試樣的含鋅量，各試樣的尿鋅濃度分別為2.8，5.0，7.8，9.7，13.5μM，均在正常范圍(2.3-18.4μM)之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種尿液中鋅含量的測定方法，其特征在于按以下步驟進行1) 在比色管中加入一定量的尿液，2) 加入A液調(diào)節(jié)尿液的PH值至7.5-10，3) 加入過量B液，與尿液中的鋅絡合生成絡合物，4) 邊搖動比色管、邊加入C液，混勻，直至絡合物沉淀全部溶解，5) 用72型分光光度計，550nM處比色，通過標準曲線查得尿液中鋅的濃度，所述的A液是堿性溶液，所述的B液是1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚，所述的C液是溶解Zn-PAN絡合物的有機溶劑或非離子表面活性劑。
2.如權(quán)利要求1所述的尿液中鋅含量的測定方法，其特征在于所述的堿性溶液是氨緩沖液，所述的有機溶劑是氯仿或四氯化碳，所述的非離子表面活性劑是Triton X 100。
全文摘要
尿液中鋅含量的測定方法，是在比色管中先后加入尿液，氨緩沖液，PAN液，Triton X 100液，蒸餾水，混勻，用分光光度計，在550nM處比色，通過標準曲線查得尿液中鋅的濃度。與發(fā)鋅或血鋅法相比，本法不僅尿液取樣容易，也避免了抽血給人造成的痛苦及危害，特別是尿鋅法所測的鋅濃度能準確反映人體的鋅代謝水平，且靈敏度高，重復性好，易于動態(tài)觀察、早期判斷體內(nèi)鋅含量水平的變化，以便及時診斷和治療。
文檔編號G01N21/75GK1137117SQ95106238
公開日1996年12月4日 申請日期1995年5月29日 優(yōu)先權(quán)日1995年5月29日
發(fā)明者朱建安 申請人:朱建安