專利名稱：一種手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法及其專用試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及毛細(xì)管電泳技術(shù)，特別提供了一種手性化合物毛細(xì)管電泳分析方法及其專用試劑盒。
手性拆分是分析化學(xué)中的重要課題之一，使用傳統(tǒng)的分析方法如高效液相色譜法，它要求有昂貴的手性柱，并且應(yīng)用范圍較窄，分離效果往往不理想。毛細(xì)管電泳用于手性分離，它操作簡(jiǎn)單，快速，高效，且樣品用量少，分析成本低。用于毛細(xì)管電泳手性拆分的選擇劑的種類較多，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道其中以環(huán)糊精應(yīng)用得最廣，而且容易得到，在手性拆分中具有廣闊的應(yīng)用前景。但是從文獻(xiàn)中很難找出一種通用的拆分方法，要尋找和建立一個(gè)手性拆分方法，一般需要較長(zhǎng)的周期。
本發(fā)明的目的在于提供一種手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法及其專用試劑盒，其可以針對(duì)任何手性化合物快速找出拆分方法，因而可使分析成本大大降低。
本發(fā)明提供了一種手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于采用內(nèi)徑50μm的石英毛細(xì)管聚丙烯酰胺涂漬柱，長(zhǎng)30～50cm，緩沖液配制過(guò)程如下(1)配制0.05～0.1M的NaH2PO4溶液，用濃度為0.1M的H3PO4調(diào)節(jié)pH至2.5作為緩沖液；(2)將手性選擇劑加入上述緩沖液中，濃度范圍在15～45M之間，其中手性選擇劑為α-環(huán)糊精，羥丙基-β-環(huán)糊精，二甲基-β-環(huán)糊精，三甲基-β-環(huán)糊精之一種。
上述本發(fā)明中將羥丙基甲基纖維素加入上述緩沖液中以改善分離，濃度為0.05～0.1％，羥丙基甲基纖維素選擇為HPMC-100。
上述本發(fā)明之手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，用pH為2.5的NaH2PO4溶液配制堿性手性物分析樣品，濃度為0.1mg/ml。根據(jù)分析對(duì)象的不同，最佳的pH值可能也不一樣，可以用0.05～0.1M的Na2HPO4緩沖液pH調(diào)節(jié)劑來(lái)改變緩沖液的pH值(pH在2.5～5.5)。
上述本發(fā)明之手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，主要適用于堿性手性物的分析，對(duì)于一些酸性手性物樣品，配樣品時(shí)應(yīng)選用pH8.5的硼酸鹽，即用0.1M的HCl溶液將0.1M的硼酸納調(diào)節(jié)至pH值為8.5，此時(shí)最佳拆分緩沖液可以用0.05～0.1M的Na2HPO4緩沖液pH調(diào)節(jié)劑來(lái)改變緩沖液的pH值為pKa+0.5，一般選在4.5～5.5之間。
本發(fā)明還提供了一種手性化合物毛細(xì)管電泳專用拆分試劑盒，其特征在于該試劑盒包括四種手性選擇劑α-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、三甲基-β-環(huán)糊精；兩種緩沖液pH=2.5 NaH2PO4緩沖液和pH=8.5硼酸鈉緩沖液；緩沖液pH調(diào)節(jié)劑Na2HPO4；HPMC-100羥丙基甲基纖維素添加劑；2根30cm長(zhǎng)，內(nèi)徑50μm的石英毛細(xì)管聚丙烯酰胺涂漬柱。
毛細(xì)管電泳手性拆分是一種十分有效的手段，分析時(shí)間較短(一般小于30分鐘)。環(huán)糊精雖然是一種十分有效的拆分劑，但其種類繁多，總共有幾十種，對(duì)于一個(gè)給定的分析任務(wù)，要找到一個(gè)有效的拆分方法，其工作量相當(dāng)大。經(jīng)過(guò)對(duì)近130種手性藥物的拆分篩選，在此結(jié)果上對(duì)拆分規(guī)律進(jìn)行了研究，選擇了最為有效的四種環(huán)糊精作為手性選擇劑，可以解決大部分堿性和酸性手性藥物的拆分工作；β類環(huán)糊精是最有效的手性選擇劑，α-環(huán)糊精可以拆分某些復(fù)雜的多環(huán)手性物；三甲基-β-環(huán)糊精對(duì)酸類化合物拆分很有效，這是在實(shí)驗(yàn)中總結(jié)出的拆分規(guī)律，故選擇了α-環(huán)糊精，羥丙基-β-環(huán)糊精，二甲基-β-環(huán)糊精和三甲基-β-環(huán)糊精四種手性選擇劑，選用這樣的拆分體系還未見報(bào)道。并且選擇了合適的緩沖體系(0.1M的磷酸鹽緩沖液，pH=2.5)和添加劑HPMC(在25℃的水溶液時(shí)，其粘度為100厘泊)；用pH調(diào)節(jié)劑很容易調(diào)節(jié)緩沖液的pH值至4.5～5.5，對(duì)于酸類化合物的拆分，指出其拆分最佳的pH值為pKa+0.5即在4.5～5.5之間，選擇不同pH值的緩沖液來(lái)配置不同的樣品，所有這些都具有創(chuàng)新性?？傊?，該手性拆分系統(tǒng)不僅有效且具有新穎性，為此所設(shè)計(jì)的試劑盒至今尚未出現(xiàn)。
下面結(jié)合附圖通過(guò)實(shí)施例詳述本發(fā)明。
附

圖1為七種藥物的手性拆分結(jié)果。
附圖2為Warfarin(華法令)對(duì)映體拆分結(jié)果。
附圖3為Oxomemazine對(duì)映體的拆分結(jié)果。
附圖4為Isothlpendyl的拆分結(jié)果。
附圖5為Metaclazepam的拆分結(jié)果。
附圖6為Ihaprofen(布絡(luò)分)的拆分結(jié)果。
附圖7為Ketoprofen(酮基布絡(luò)分)的拆分結(jié)果。
實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)在美國(guó)Bio-Rad公司3000型毛細(xì)管電泳儀上進(jìn)行，電遷移進(jìn)樣，毛細(xì)管有效長(zhǎng)度為27.5cm，內(nèi)徑50μm的石英毛細(xì)管聚丙烯酰胺涂漬柱。樣品配制過(guò)程如下配制0.1M的NaH2PO4緩沖液，用0.1M的H2PO4調(diào)節(jié)pH至2.5，以羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)為手性選擇劑加入緩沖液中，濃度為45mM。用pH2.5的NaH2PO4配制七種藥物dimethindene,chlorphenamine,tetryzoline,homatropine,theodrenaline,metaclazepam,mefloquine，藥品濃度為0.1mg/ml；結(jié)果見附圖1，其中1=dimethindene,2=chlorphenamine,3=tetryzoline,4=homatropine,5=theiodrenaline,6=metaclazepam,7=mefloquine。
實(shí)施例2用0.1M Na2HPO4將上述pH2.5的緩沖液調(diào)至pH4.9，以三甲基-β-環(huán)糊精(TM-β-CD)為手性選擇劑濃度為8mM，加入0.1％濃度的HPMC-100以加強(qiáng)分離；用pH8.5的硼酸鈉溶液配制Warfarin(華法令)對(duì)映體，濃度為0.1mg/ml；其它同實(shí)施例1，結(jié)果見附圖2。
實(shí)施例3以0.1M pH=2.5的Na2HPO4為緩沖液，加入α-環(huán)糊精(α-CD)為手性選擇劑濃度為45mM，用pH2.5的NaH2PO4配制Isothlpendgl，其它同實(shí)施例1，結(jié)果見附圖3。
實(shí)施例4用pH2.5的NaH2PO4配制Metaclazepam，其它均同實(shí)施例3，結(jié)果見附圖4。
實(shí)施例5用0.1M Na2HPO4將pH=2.5的緩沖液調(diào)至pH=9，以三甲基-β-環(huán)糊精(TM-β-CD)為手性選擇劑濃度為15mM，加入0.1％濃度的HPMC-100以加強(qiáng)分離，用pH8.5的硼酸鈉配制Ibuprofen，其它同實(shí)施例1，結(jié)果見附圖5。
實(shí)施例6用0.1M Na2HPO4將pH=2.5的緩沖液調(diào)至pH=9，以三甲基-β-環(huán)糊精(TM-β-CD)為手性選擇劑濃度為15mM，加入0.1％濃度的HPMC-100以加強(qiáng)分離，用pH8.5的硼酸鈉配制Ketoprofen，其它同實(shí)施例1，結(jié)果見附圖5。
實(shí)施例5和6中的Ibuprofen和Ketoprofen樣品來(lái)自印度一家制藥公司。對(duì)于以上兩種手性藥物的拆分，文獻(xiàn)中通常用morpholinoethanesulfonicacid(嗎啉代乙基磺酸)有機(jī)酸作為緩沖液，該物質(zhì)不容易得到，并所用環(huán)糊精的濃度相對(duì)較高為30mM左右。本發(fā)明選用磷酸鹽緩沖液，0.1％的HPMC的添加劑，在相對(duì)低的環(huán)糊精濃度下對(duì)它們實(shí)現(xiàn)了基線分離。
權(quán)利要求
1．一種手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于采用內(nèi)徑50μm的石英毛細(xì)管聚丙烯酰胺涂漬柱，長(zhǎng)30～50cm，緩沖液的配制過(guò)程如下(1)配制0.05～0.1M的NaH2PO4溶液，用濃度為0.1M的H3PO4調(diào)節(jié)pH至2.5作為緩沖液；(2)將手性選擇劑加入上述緩沖液中，濃度范圍在15～45M之間，其中手性選擇劑為α-環(huán)糊精，羥丙基-β-環(huán)糊精，二甲基-β-環(huán)糊精，三甲基-β-環(huán)糊精之一種。
2．按照權(quán)利要求1所述手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于將羥丙基甲基纖維素加入上述緩沖液中以改善分離，濃度為0.05～0.1％，羥丙基甲基纖維素選擇為HPMC-100。
3．按照權(quán)利要求1、2所述手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于用0.05～0.1M pH為2.5的NaH2PO4溶液配制堿性手性物分析樣品，濃度為0.1mg/ml。
4．按照權(quán)利要求3所述手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于用0.05～0.1M的Na2HPO4為緩沖液pH調(diào)節(jié)劑來(lái)改變緩沖液的pH值，pH在2.5～5.5之間。
5．按照權(quán)利要求1、2所述手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于用0.05～0.1M pH為8.5的硼酸鈉溶液配制酸性手性物分析樣品，濃度為0.1mg/ml。
6．按照權(quán)利要求4所述手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于用0.05～0.1M的Na2HPO4為緩沖液pH調(diào)節(jié)劑來(lái)改變緩沖液的pH值，pH在4.5～5.5之間。
7．按照權(quán)利要求6所述手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法，其特征在于緩沖液pH值為pKa+0.5。
8．一種手性化合物毛細(xì)管電泳專用拆分試劑盒，其特征在于該試劑盒包括四種手性選擇劑α-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、三甲基-β-環(huán)糊精；兩種緩沖液pH=2.5 NaHPO4緩沖液和pH=8.5硼酸鈉緩沖液；緩沖液pH調(diào)節(jié)劑Na2HPO4；HPMC-100羥丙基甲基纖維素添加劑；2根30cm長(zhǎng)，內(nèi)徑50μm的石英毛細(xì)管聚丙烯酰胺涂漬柱。
全文摘要
一種手性化合物毛細(xì)管電泳拆分分析方法,其特征在于采用內(nèi)徑50μm的石英毛細(xì)管聚丙烯酰胺涂漬柱,長(zhǎng)30－50cm,緩沖液的配制過(guò)程如下:(1)配制0.05－0.1M的NaH
文檔編號(hào)G01N27/447GK1218904SQ9711948
公開日1999年6月9日 申請(qǐng)日期1997年11月29日 優(yōu)先權(quán)日1997年11月29日
發(fā)明者林炳承, 朱曉峰 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所