專利名稱::用于測定細胞功能的容器、用于測定細胞功能的試劑盒以及用于測定細胞功能的方法
技術領域:
:本發(fā)明涉及一種用于測定與免疫和炎性反應有關的細胞功能的容器,用于測定細胞功能的試劑盒以及用于測定細胞功能的方法,更具體地說,本發(fā)明涉及這樣一種用于測定細胞功能的容器,它是通過測定由粒細胞、單核細胞、巨噬細胞、淋巴細胞等血細胞產(chǎn)生的細胞因子之類生理活性物質來進行的,本發(fā)明還涉及用于如此測定細胞功能的試劑盒以及用于測定細胞功能的方法。
背景技術:
:在血液和相關器官的免疫和炎性反應等各種生物保護性反應中,白細胞例如粒細胞、單核細胞、巨噬細胞和淋巴細胞起著多種不同的作用。已知,這些細胞在多種病理狀態(tài)中表現(xiàn)出重要的功能,這些病理狀態(tài)包括感染性疾??;炎性疾病,例如肝炎和腎炎;免疫過敏反應,例如類風濕性關節(jié)炎和哮喘;還有癌癥。并且,這些細胞的功能在不同的病理狀態(tài)中或被抑制或被加強。還已知,許多藥物例如消炎藥、免疫抑制劑、免疫增強劑和抗癌藥物可用于治療這類疾病,在其中,這些細胞的功能同時或被抑制或被加強。所以,必需對這些細胞的功能進行檢測,由此可以確定各種疾病的病理狀態(tài)、藥物的作用和副作用,繼而確定治療方案、藥物劑量和給藥時間的安排。出于上述原因,為了測定這類細胞功能,醫(yī)院檢測室或檢測中心目前通常進行的是粒細胞吞噬活性測試、粒細胞滅菌活性(活性氧產(chǎn)生能力)測試、淋巴細胞轉化測試等。近年來,又進行了表面抗原測試,該測試利用了流式細胞計數(shù)儀和抗各種免疫活性細胞上特殊的表面抗原的熒光標記的單克隆抗體。但是,常規(guī)測試方法需要細胞的分離和培養(yǎng)、顯微檢測等特殊技術,因而測定時間很長,而且需要RI儀器和昂貴的設備。此外,血液中的單核細胞,以及單核細胞進入組織后分化成熟而成的巨噬細胞具有多種不同的功能,例如,通過吞噬作用在異體排斥中起作用和通過抗原提呈的免疫形成中起作用,或者通過分泌細胞因子和前列腺素之類的生理活性物質來調節(jié)炎性或免疫反應。和粒細胞及淋巴細胞一樣,這些單核細胞和巨噬細胞在多種病理狀態(tài)中也起著重要作用。所以,確定這些細胞的功能是十分重要的。尤其在傳染病中,與粒細胞及淋巴細胞不同,單核細胞和巨噬細胞在細胞數(shù)量上略有變化并且自發(fā)性地增加了其功能,測定細胞功能的改變由此變得更為重要(“巨噬細胞”(“Macrophages”),TohruTokunaga,kodanshaScientific,第1版,1986)。被稱為單核因子的腫瘤壞死因子α(后文稱TNFα)、白介素-β(后文稱IL-1β)、白介素-6后文稱IL-6)是主要由血液中包括單核細胞和巨噬細胞在內的白細胞產(chǎn)生的細胞因子,它們在多種炎性和免疫反應中起作用。目前已經(jīng)報道了多種方法可檢測分離自血液的血細胞或白細胞如上所述產(chǎn)生細胞因子的功能。例如,在日本專利公告Hei2-196961和Hei3-285692中公開了這樣的方法,即令脂多糖(LPS)或外源凝集素與血液反應來誘導產(chǎn)生細胞因子,例如TNFα或IL-1β,然后定量測定這些細胞因子。另外,日本專利公告Hei6-209992和Hei7-67955中公開的方法通過血液與具有特定表面粗糙度或化學結構的聚合物反應來誘導產(chǎn)生TNFα。此外,日本專利公告Hei7-299732和Hei7-151752中公開的生物反應測試通過血液與具有特定表面粗糙度的聚合物反應來定量產(chǎn)生的TNFα或IL-1β。此外,公告TokkohyoHei7-500905公開的方法通過測定由人外周血白細胞經(jīng)誘導產(chǎn)生的細胞因子例如TNFα或IL-1β來測定某一被測材料的免疫活性。但是,如上所述在醫(yī)院檢測室或檢測中心常用的以及在以上專利公告中公開的測定細胞功能的方法存在以下問題。即,這些測試都需要專門的操作,例如用注射器從受試者采集血液,然后通過移液操作將其轉移到各種反應器中,為了將白細胞與其它細胞分離而進行的細胞分離,為了測定細胞功能而進行的細胞培養(yǎng)等操作。這使得受試者有在接觸血液時患上肝炎和AIDS等傳染病的危險。而且,在以上操作過程中還可能意外地在血樣中混入各種細菌或塵埃。另外一個危險性是在那些污染物或操作非必要地物理性刺激了血樣中的細胞時造成對測定的干擾。特別是在使用特殊反應器來收集血液并測定細胞因子,具體地說是TNFα或IL-1β產(chǎn)生的常規(guī)方法中,在血液采集設備例如注射器或在反應器中原先已經(jīng)存在了內毒素,例如革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的LPS。因為即使少量的內毒素也能夠誘導白細胞產(chǎn)生TNFα或IL-1β,所以,在因生產(chǎn)過程中引入的少量灰塵或在使用清洗水時引入污染而導致在上述血液采集設備或反應器中引入少量內毒素時,就不可能獲得可靠的測定結果。鑒于上述問題,需要一種比起常規(guī)方法操作更簡便、更安全而且更精確的測定細胞功能的方法。另一方面,在測定血液中各種生理活性物質、血細胞的功能、血細胞的表面抗原等時,目前通常使用抗凝劑。但是,對抗凝劑中的內毒素含量并沒有一致的標準,只有日本藥典(JapanesePharmacopeia)第13版的“內毒素測定方法”(“Endotoxintestingmethod”)中給出的規(guī)定,對于用作注射藥物的抗凝劑,該規(guī)定正式設定5EU/Kg為最小兔用熱原劑量。內毒素是構成革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的脂多糖,極少量的內毒素就足以刺激血細胞例如白細胞產(chǎn)生生理活性物質,例如多種細胞因子,其中包括TNFα、IL-1β、IL-6、或粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子。它們具有各種生理作用,例如熱原活性以及內毒素休克(NipponIgaku-kan“炎癥與細胞因子’87炎癥研討會”(“Inflammationandcytokines’87InflammationSeminar)p.103-108)。此外,例如上述由血細胞產(chǎn)生的細胞因子之類的生理活性物質會以自分泌或旁分泌方式相互反應,從而進一步產(chǎn)生組胺、花生四烯酸酯代謝物或各種細胞因子,它們會改變血細胞的功能,由此導致血細胞表面抗原的量變和質變。所以,如果抗凝劑被內毒素污染,而這些內毒素的含量足以引起生理活性物質的產(chǎn)生,就不可能準確測定血液中的各種生理活性物質、血細胞的功能、以及血細胞的表面抗原。發(fā)明概述本發(fā)明目的之一是提供一種容器、以及一種試劑盒和一種方法,分別用于測定細胞功能,它們能夠消除由測定細胞功能的常規(guī)方法帶來的問題,與常規(guī)方法相比,它們的操作更簡便,更安全,而且對細胞功能的測定更精確。就第一發(fā)明的內容而言,為了達到上述目的,本發(fā)明提供了一種測定細胞功能用的容器,它被用于測定由血細胞產(chǎn)生的生理活性物質,其特征在于,在等量于被測液的水抽提時,能夠誘導上述生理活性物質產(chǎn)生的材料其含量不足以誘導血細胞產(chǎn)生所述的生理活性物質。由于如上所述,在該測定細胞功能用的容器中,經(jīng)等量于被測液的水抽提,能夠誘導上述生理活性物質產(chǎn)生的材料其含量被限制在不足以誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質的水平,即測定細胞功能用的容器中本身含有上述限量的能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料,所以,在采集至測定期間,集得的血液幾乎不受到非必要的刺激,由此使得血細胞的長期保存成為可能。這樣就能夠準確地測定存在于集得的血樣中的生理活性物質,并能夠將該容器用于準確檢測各種疾病患者的病理狀態(tài)。此外,第一發(fā)明所述的該測定細胞功能用容器還適用于在與后文第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器聯(lián)用時獲取對照值。在本申請第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中,能夠誘導上述生理活性物質產(chǎn)生的材料以內毒素為佳,而且在使用前,其在測定細胞功能用容器中的含量不能超過0.5EU/ml,即用與被測液等量的水抽提得到的抽提液中的濃度。本申請的第二發(fā)明是一種測定細胞功能用的容器,其特征在于,某種在與血液接觸后能夠誘導其中生理活性物質產(chǎn)生的材料以與血液接觸著的狀態(tài)包含于其中,而在使用前,容器中上述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的量受到限制以致不會干擾上述生理活性物質的測得值。在第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中,雖然能夠誘導血液中生理活性物質產(chǎn)生的材料以與血液接觸著的狀態(tài)包含于其中,但是在引入前原先存在于容器中的能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料其含量如上所述地受到限制以致不會干擾上述生理活性物質的測得值。所以,在引入血液并與能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料接觸并由此產(chǎn)生生理活性物質時,能夠非常準確地測定生理活性物質的產(chǎn)生。在第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中,誘導上述生理活性物質產(chǎn)生的材料以內毒素為佳,而且,在與血液接觸而形成的總液體中內毒素的濃度限制在0.6-100000EU/ml范圍內。此外,在第一或第二發(fā)明所述的容器中,還可以含有抗凝劑以防止血液凝固。此外,上述抗凝劑中能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料其含量以在與血液混合時不能誘導生理活性物質的產(chǎn)生為佳。就本申請的第一和第二發(fā)明具體而言,能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料是內毒素,而生理活性物質是細胞因子。上述細胞因子至少可以是以下一種腫瘤壞死因子α(TNFα)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)。此外,第一和第二發(fā)明所述的容器其內部最好抽成真空。此外,第一和第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器可以與能夠定量誘導產(chǎn)生的生理活性物質的試劑組合成測定細胞功能用的試劑盒。此時,可以使用例如酶免疫測定試劑作為能夠定量誘導產(chǎn)生的生理活性物質的試劑。本申請的第三發(fā)明是測定細胞功能用的試劑盒。該試劑盒包含一個第一測定細胞功能用容器,在等量于被測液的、不含能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的水抽提時,其中能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的含量不足以誘導血細胞產(chǎn)生所述的生理活性物質,根據(jù)需要其中還可以含有抗凝劑;第二測定細胞功能用容器,在與血液接觸時能夠誘導其中生理活性物質產(chǎn)生的材料以及抗凝劑以與血液接觸著的狀態(tài)包含于其中,而在包含生物液體前原先存在于容器中的上述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的量限制在不能夠干擾上述生理活性物質測定值的水平;還包含一種定量測定生理活性物質的試劑。即,第三發(fā)明所述的測定細胞功能用容器組合了第一發(fā)明的測定細胞功能用容器,第二發(fā)明的測定細胞功能用容器和上文定義的定量試劑。在第三發(fā)明所述的測定細胞功能用試劑盒中,上述定量試劑最好包括在第一測定細胞功能用容器中定量集得血液中生理活性物質的第一酶免疫測定試劑;和在第二測定細胞功能用容器中定量集得血液中生理活性物質的第二酶免疫測定試劑,該酶對生理活性物質的敏感性不同于第一酶免疫測定試劑。此外,就本申請的第三發(fā)明的測定細胞功能用試劑盒具體而言,上述誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料是內毒素,而在與血液接觸時總液體中的內毒素濃度在0.6-100000EU/ml范圍內。本申請的第四發(fā)明是一種測定細胞功能的方法,其特征在于包括一步將血液引入第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器并令引入的血液與能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料反應,由此誘導生理活性物質的產(chǎn)生。第四發(fā)明所述的測定細胞功能的方法中,最好在26至45℃誘導上述生理活性物質的產(chǎn)生。此外,誘導產(chǎn)生生理活性物質的時間最好是1至6小時。而且,第四發(fā)明所述測定細胞功能的方法中,生理活性物質的量通過能夠定量該物質的試劑來測定。此外,就第四發(fā)明所述測定細胞功能的方法更具體地說,血液被引入測定細胞功能用試劑盒的第一和第二測定細胞功能用容器,由此誘導生理活性物質的產(chǎn)生。此時,仍然最好在26至45℃誘導上述生理活性物質的產(chǎn)生,而誘導產(chǎn)生生理活性物質的時間最好是1至6小時。以下將詳細說明本發(fā)明。(第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器)就第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器而言,在等量于被測液且不含能夠產(chǎn)生生理活性物質的材料的水抽提時,能夠誘導上述生理活性物質產(chǎn)生的材料其含量必須不足以誘導血細胞產(chǎn)生所述的生理活性物質。抽提是如下進行的,在上述測定細胞功能用容器中引入不含能夠產(chǎn)生生理活性物質的材料且與被測液等量的水,并在37℃攪拌抽提。上述生理活性物質最好是細胞因子,而能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料最好是內毒素。但是,生理活性物質并不限于細胞因子,而可以是花生四烯酸的代謝物,例如前列腺素、活性氧類、可溶性粘附因子、可溶性受體或粒細胞內酶(intragranularenzyme)。合理地選擇能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的類型取決于生理活性物質的類型。在能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料是內毒素時,經(jīng)上述抽提產(chǎn)生的抽提液中內毒素的含量必須不超過0.5EU/ml(國際內毒素單位)。如果上述內毒素含量超過0.5EU/ml,內毒素可能在集得的血液中明顯誘導作為生理活性物質之一的細胞因子,誘導產(chǎn)生的細胞因子可能刺激各種免疫活性細胞而改變其功能,結果造成無法準確測定細胞的功能。上述待測液體的體積是指進行以下測定時使用的液體的總體積,例如,待測血液的體積、按需要加入的下文所述的抗凝劑的體積、血凝促進劑溶液的體積和用于溶解或分散刺激物的液體的體積之和。在此需要指明的是,進行上述抽提時使用的無內毒素水的體積不必絕對等于待測液體積,只要能夠完成抽提,該體積可以小于待測液的體積。即使在這種情況下,只要抽提液中內毒素的含量不超過0.5EU/ml,仍然能夠達到本發(fā)明的功能和效果。雖然有許多方法可測定上述內毒素濃度,本說明書借用的是比色法,參照的是《日本藥典》第13版中的“內毒素測定方法”。比色法使用生色合成底物在水解時產(chǎn)生的顏色作為指示,可以使用例如市售商品ENDOSPECIE(SeikagakuKogyoCo.生產(chǎn))進行。有多種眾所周知的技術可以用作去除或滅活內毒素的方法,其中包括熱滅活、酸或堿處理;用薄膜過濾器進行超濾;以及利用陰離子脫乙酰殼多糖樹脂、與內毒素特異性結合的多粘菌素B或吸附抗內毒素抗體的吸附劑來去除。此外,如果用于去除內毒素的儀器和容器是玻璃的,必須經(jīng)250℃干熱處理1小時或更久。如果它們是塑料制成的,在0.2M的氫氧化鈉水溶液中浸泡并用無內毒素水洗滌過,以確保在使用前完全滅活內毒素。此外,需要用水時使用的必須都是無內毒素的水,而且,操作空氣最好象超凈室中的那樣,將任何二次內毒素污染限制在一個可操作的范圍內。第一發(fā)明所述測定細胞能夠用容器的內部最好是真空的。內部壓力可以被降至使得大氣壓下的血液能夠通過與測定細胞用容器的連通被吸入該容器。內部壓力可以根據(jù)需要吸入的血液量來確定。即,需要吸入的血液越多,降壓程度越高。對第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器的形狀沒有特殊的規(guī)定,可以是采血試管、試管那樣的管狀,或者微量滴定板那樣的板狀。以適合真空操作為宜。用于說明測定細胞功能用容器的材料的是玻璃或塑料。熱塑性和熱固性樹脂都可以用作上述塑料。熱塑性樹脂的實例為聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚對苯二甲酸乙二醇酯、苯乙烯-丙烯腈共聚物、苯乙烯-馬來酸酐共聚物、苯乙烯-丙烯酸酯共聚物、苯乙烯-甲基丙烯酸酯共聚物、乙烯-丙烯共聚物、乙烯-丙烯酸共聚物和乙烯-丙烯酸酯共聚物。熱固性樹脂的實例是不飽和聚酯樹脂、環(huán)氧樹脂和環(huán)氧丙烯酸酯樹脂。在用管狀元件作為第一發(fā)明所述測定細胞功能用容器時,通常使用一個塞子來維持容器內部的低壓。作為塞子的材料可以是例如丁基橡膠、氯丁橡膠、熱塑性彈性體等。如果用管狀元件作為第一發(fā)明所述測定細胞功能用容器,采血量取決于測定細胞功能用容器的體積,但是通常在容器體積為4至5毫升時約為0.5至2毫升。另一方面,如果使用微量滴定板樣元件作為第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器,采血量約為0.05至2毫升。必要時,為了防止血液凝固,可以在第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中加入抗凝劑。上述抗凝劑在容器中可以以液體或固體形式存在。上述抗凝劑可以是例如肝素化合物、檸檬酸化合物、草酸化合物等。尤其好的是肝素鈉,因為它不會抑制細胞的生物反應。當血液被采集到容器中時,降低肝素鈉在血液中的濃度可能會引起血液的凝固,而提高肝素鈉的濃度可能引起對細胞的意外激活或滅活。所以,容器中肝素鈉的適宜濃度為4至50U/ml。需要在第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中加入抗凝劑的例子是對通過例如單核細胞、巨噬細胞、淋巴細胞、白細胞等細胞與能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的物質反應而產(chǎn)生的生理活性物質(被釋放或被誘導的)進行測定的情況。此外,不必在第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中加入抗凝劑的例子是對激活調控、通過凝血酶刺激血小板而釋放的被表達和分泌的正常T細胞(RANTES)進行測定的情況。此外,在必要時可以在第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中加入促凝劑。這種情況可能出現(xiàn)在對生理活性物質的測定是通過血液凝固來進行的時候。凝血酶等可以作為這類促凝劑的實例。現(xiàn)在將參照管狀容器的制造來舉例說明第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器的制造方法。它的生產(chǎn)是通過根據(jù)需要在一管狀容器中加入抗凝劑或促凝劑,容器具有可降壓的內部,而且其中內毒素的含量在與待測液等體積的無內毒素水抽提時其水平不足以誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質;將容器抽成預定的真空狀態(tài);給容器加一個塞子。作為上述容器,較好的是例如封端管狀體,即一端開啟而另一端封閉。開啟部分的結構最好可用塞子來封閉。此外,為了避免內毒素或各種細菌的感染,最好在盡可能潔凈的空氣中制造第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器,而且,如果可能的話,最好在制造完成后接受眾所周知的消毒處理。在第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器的使用中,首先將上述第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器與血液儲器連通以使血液能夠被吸入上述測定細胞功能用容器中。在將上述血液儲器與上述測定細胞功能用容器連通時,可以使用用于常規(guī)真空采血技術所用的注射器針頭,這樣的針頭(通常稱為多頭注射器針頭)在針頭基部的一側是刺入血液儲器的針頭部分,而在針頭基部的另一側是刺入上述容器的塞子的針頭部分,而且,刺入血液儲器的針頭部分與刺入塞子的針頭部分是連通的。通過繼續(xù)利用該容器,可以將通過使用第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器獲得的血液轉移到另一容器中,或測定其中的生理活性物質。此外,通過將容器連續(xù)用作反應器,可將獲得的血液轉移到另一反應器,或者與能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料接觸以測定生成的生理活性物質。在將容器用作反應器與能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料接觸時,在將血液采集到容器中后,再在容器中引入能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料。通過測定用測定細胞功能用容器集得的血液中的生理活性物質來測定血液中生理活性物質。此時,用第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器集得的血液通過繼續(xù)利用該容器或被轉移到另一容器,或接受生理活性物質的測定。在繼續(xù)利用該容器測定生理活性物質時,在采集血液后,該容器通常經(jīng)靜置或離心來分離血細胞和含有生理活性物質的血漿,利用相應的定量試劑來定量測定這些物質。上述生理活性物質的實例是TNF-α;IL-1β、IL-4、IL-5和IL-6之類的白介素;INFα、INFβ、INFγ之類干擾素;集落刺激因子;趨化因子,例如IL-8、RANTES和各種細胞因子;前列腺素;PEG2和PGI2;白細胞三烯LTB4和LTC4;各種化學中間體,例如一氧化氮、活性氧、組胺和血小板激活因子(PAF)。另外還有粘附因子,例如可溶性ICAM1,可溶性細胞因子受體例如IL-2受體,基質金屬蛋白酶和胞內顆粒酶例如巨噬細胞特異性彈性蛋白酶。測定上述生理活性物質的方法之一是例如酶免疫測定法,該方法利用抗各自的目標生理活性物質、過氧化物酶、堿性磷酸酶之類的單克隆抗體或多克隆抗體,以及相應酶的生色底物。能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料是例如各種微生物,例如內毒素、BCG死亡細菌和棒狀桿菌;合成類脂A;吡喃共聚物;凝集素(例如植物凝集素、伴刀豆凝集素A、商陸促分裂原);OK432(Picibanil);PSK(Krestin);香菇多糖;酵母聚糖;LPS(脂多糖);鈣離子;佛波酯;免疫球蛋白固定載體;甲?;睦缂柞;?甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酰(FMLP);和各種細胞因子。可用的還有特異性抗原(例如灰塵;微塵抗原;各種花粉抗原,例如豚草花粉提取物、雪松花粉提取物、稻谷提取物等;真菌抗原;寄生抗原,例如蛔蟲(ascaris)提取物等;食物抗原例如卵蛋白、大麥、黃豆、蝦、蟹、肉等;以及黃蜂毒素),它們被用于檢測變應原,例如哮喘、花粉病、過敏性鼻炎、特應性皮炎、腸胃過敏、寄生蟲過敏等。另外還有利用眾所周知的固定技術(例如共價結合、物理吸附等)將上述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料與各種天然或合成高分子材料固定的材料。對上述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的形狀沒有特殊的規(guī)定,它們可以是例如液體或顆粒狀的。此外,它們可以被固定在載體上。如果是液態(tài)的,通常將上述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料稀釋后使用,例如使用稀釋液、磷酸鹽緩沖液、Hanks緩沖液之類的緩沖液、MEM、RPMI-1640等常用培養(yǎng)基、生理鹽水(例如OtsukaSeiyakuCo.的產(chǎn)品)、或注射用水(例如OtsukaSeiyakuCo.的產(chǎn)品)。上述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的存在形式可以是固體或液體。如果上述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料是水溶性的,可以在將它制成粉末形式之前將其涂于容器的內壁或者加入容器。例如,如果能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料以注射用水稀釋,最好將其引入容器,然后再干燥固化。如果能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料是非水溶性的,最好將該非水溶性材料保持浸沒于上述稀釋液中,因為在通過例如轉動混合與血液接觸時,可能殘留于該物質表面的氣泡會導致過度溶血,從而影響測量系統(tǒng)。當能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料被固定在載體上時,如果固定載體是水溶性的,可以在將它制成粉末形式之前將其涂于容器的內壁或者加入容器。如果固定載體是非水溶性的,最好將該非水溶性材料保持浸沒于上述稀釋液中,因為在通過例如轉動混合與血液接觸時,可能殘留于該物質表面的氣泡會導致過度溶血,從而影響測量系統(tǒng)。根據(jù)能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的種類,最好將其含量設定在最佳濃度。在第一發(fā)明所述測定細胞功能的方法中,如果除第一發(fā)明所述的容器之外另外制備了另一容器,對該另一容器的形狀沒有特殊的規(guī)定,它可以是例如采血管、試管之類的管狀,或者微滴板之類的板狀。該反應器最好經(jīng)處理后其中的內毒素含量,在與待測液等體積的無內毒素水抽提時,處于不足以誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質的水平。在此,上述待測液體的體積與對測定細胞功能用容器所做的解釋中的相同。如果如上所述除測定細胞功能用容器之外制備了另一反應器,該反應器可以在加入能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料并被抽成預定的真空后使用。對于這樣的反應器而言,它與采集血液的測定細胞功能用容器之間的連通,例如通過多頭注射器,便于將集得的血液轉移到反應器中。此外,預先加入能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料簡化了反應過程。在上述情況中,根據(jù)能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的種類,最好將加入反應器的該材料的含量設定在最佳濃度。以下例舉了一種制造該反應器的方法。在具有可降壓內部的管狀容器中加入能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料以及在必要時加入的抗凝劑。然后,將該反應器抽成預定的指控狀態(tài),然后加上塞子。最好在盡可能潔凈的空氣中制造本發(fā)明所用的反應器,以避免內毒素和各種細菌的污染,而且,如果可能的話,最好接受眾所周知的消毒處理。作為上述反應器,較好的是例如封端管狀體,即一端開啟而另一端封閉。開啟部分的結構最好可用塞子來封閉。上述封端管狀體最好是適合在反應后進行離心操作以測定所述能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的管狀體,而且其大小最好是外徑5至30毫米,高20至150毫米。(根據(jù)第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器)根據(jù)第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器的特征在于,在與血液接觸時能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料以可與血液接觸的狀態(tài)包含在容器中。這種能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料在后文中又被稱為生理活性物質誘導物。生理活性物質可以是例如就第一發(fā)明所作的闡述中所述的那些,其中較好的是細胞因子。而且,較好的生理活性物質誘導物是內毒素。內毒素在血液中作用于單核細胞和巨噬細胞,激活這些細胞,誘導它們產(chǎn)生細胞因子。上述內毒素可以是例如微生物產(chǎn)生的細胞壁多糖(LPS)。此外,可以使用某些材料通過固定化技術將內毒素固定在各種天然或合成高分子材料中。內毒素用量的選擇需使得與血液接觸時總液體(血液、抗凝劑溶液、溶有內毒素的溶液及其它液體的總和)中的內毒素濃度以0.6至100000EU/ml為佳,0.8至80000EU/ml更好。當濃度低于0.6EU/ml時,誘導產(chǎn)生的TNFα、IL-1β和IL-6可能太少。當濃度高于100000EU/ml時,誘導產(chǎn)生的TNFα、IL-1β和IL-6也可能太少。這樣就增加了成本。在第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中,上述生理活性物質誘導物所處的狀態(tài)使得它能夠與容器內的血液接觸。這種能夠與血液接觸的狀態(tài)即,例如,生理活性誘導物包含在容器內。通常,生理活性物質誘導物的形式是粉末,或者是當誘導物被溶解在水之類溶劑中時形成的液體。誘導物在容器內的存在形式可以是固體、凝膠或液體。如果是水溶性誘導物,可以將其溶解在合適的溶劑中,以便將其涂于容器的內壁或加入容器,然后制成粉末形式。任何緩沖液,只要是生理緩沖液,都可以用作上述溶劑,例如磷酸鹽緩沖液、Hanks緩沖液等緩沖液,以及MEM、RPM-1640等常用培養(yǎng)基。此外,還可以使用市售的注射用水(OstukaSeiyakuCo.出品的無LPS水)以及生理鹽水(OstukaSeiyakuCo.出品)。除內毒素之外,作為生理活性誘導物還可以使用在說明第一發(fā)明時所述的那些。此外,作為上述生理活性物質誘導物還可以使用以下高分子材料,日本專利公告Hei6-209992所公開的高分子材料,其中線平均粗糙度Ra值為0.2微米至10微米,平均峰谷間距為5至20微米,日本專利公告Hei7-67955中公開的高分子材料,其分子內至少具有選自以下組的一種化學結構羥基、酰胺基骨架和酯骨架,或者是具有陽離子官能團的高分子材料。此外,在上述生理活性物質誘導物中,較好的細胞因子誘導物是植物凝集素。植物凝集素是一種四聚體凝集素,其結構亞基包括具有血細胞凝集活性的E亞基和具有白細胞凝集活性的L亞基。較好的植物凝集素是植物凝集素-P(PHA-P),它是由E亞基、L亞基和L亞基的四聚體植物凝集素-L(PHA-L)構成的四聚體。PHA-P和PHA-L可單獨使用或結合使用。此外,比較PHA-P和PHA-L誘導產(chǎn)生細胞因子的能力,如果其用量相等,PHA-L的誘導量是PHA-P的10倍。所以,PHA-L是特別好的細胞因子誘導物。就PHA-L而言,在與血液接觸時,總液體(血液、抗凝劑溶液、溶有PHA-L的溶液及其它液體的總和)中植物凝集素-L的濃度宜在0.1至100微克/毫升范圍內,0.5至50微克/毫升范圍內更好。當上述濃度低于0.1微克/毫升時,誘導產(chǎn)生的TNFα和IL-1β可能太少,而當濃度超過50微克/毫升時,TNFα和IL-1β也可能太少,由此還增加的成本。此外,除內毒素之外,上述細胞因子誘導物最好是基本上不含內毒素的那些,即所謂的無內毒素物質。此外,第二發(fā)明使用的容器內生理活性物質誘導物的含量必須在使用前調節(jié)至不至于干擾上述可誘導產(chǎn)生的生理活性物質的測量值。后文實施例清楚地顯示,隨著LPS之類內毒素含量的上升,明顯誘導了細胞因子的產(chǎn)生。所以,為了如第二發(fā)明所述準確測定細胞功能,生理活性物質誘導物的含量必須低至不足以誘導產(chǎn)生細胞因子。按照第一發(fā)明中的方法,在容器內用與待測液體等體積的無內毒素水在37℃抽提1小時時,上述內毒素含量,按抽提液中的濃度計,以不超過0.5EU(國際內毒素單位)/ml為宜。在說明第一發(fā)明時所述的各種方法均可用作去除或滅活內毒素的方法。此外,由于第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器是用來測定血液中細胞的功能的,所以最好在上述容器中用抗凝劑來防止血液凝固。上述抗凝劑的存在形式、種類和加量與第一發(fā)明所述測定細胞功能用容器中所述的相同。此外,就本發(fā)明的測定細胞功能用容器的材料而言,可以使用與第一發(fā)明所述測定細胞功能用容器相同的材料。此外,第二發(fā)明所述測定細胞功能用容器的內部最好抽成真空,由此能夠方便地將血液吸入以按第二發(fā)明所述測定細胞的功能。此時,與第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器一樣,為了維持內部的低壓,需要使用一個塞子,而且,塞子的材料可以是就第一發(fā)明測定細胞功能用容器所述的那些。使用第二發(fā)明測定細胞功能用容器測定細胞功能時,采血量取決于該容器的容積,但是如果測定細胞功能用容器的容積是4至5毫升,約0.5至2毫升就夠了。制造第二發(fā)明所述測定細胞功能用容器的方法之一是例如,將上述生理活性物質誘導物和抗凝劑加入到內部可減壓的容器中,將容器抽成預定的真空度,然后加上塞子。作為上述容器,最好是例如一種封端管狀體,即一端開啟而另一端封閉。開啟部分的結構最好制成能夠用塞子封閉。作為上述封端管狀體,更好的是適合在為測定細胞因子誘導量而進行的細胞因子誘導反應之后進行離心操作的管狀體,其大小最好為外徑5至30毫米,高約20至150毫米。此外,為了避免內毒素或各種細菌感染,第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器最好在盡可能潔凈的空氣中進行制造,而且如果有可能,最好接受常規(guī)的消毒處理?,F(xiàn)在將使用第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器來說明一種測定細胞功能的方法。首先,將上述測定細胞功能用容器與血液儲器或采血容器連通,使得血樣被吸入容器以便測定細胞的功能。輕微振蕩測定細胞功能用容器,使得血細胞與上述生理活性物質誘導物接觸以引發(fā)接著的誘導反應。反應停止后,通過將容器靜置或離心來分離血細胞與血漿,然后用各種細胞因子相應的定量試劑來定量血漿中的細胞因子。上述將第一測定細胞功能用容器與采血容器連通的技術可被用于將上述采血容器與上述測定細胞功能用容器連通。如果血液與上述細胞因子誘導物的反應溫度降低,細胞的代謝活性可能降低而導致誘導產(chǎn)生的細胞因子過少,如果溫度過高,可能會因細胞損傷而導致誘導產(chǎn)生的細胞因子過少。所以,溫度以控制在26至45℃為宜,30至42℃更好。如果縮短血液與上述細胞因子誘導物反應的時間,誘導產(chǎn)生的細胞因子可能過少,而如果過度延長,則延遲了測定時間。此外,細胞因子的誘得量在約4小時達到峰值后呈現(xiàn)一逐步下降的趨勢。所以,時間以1至6小時為宜,2至4小時更好。在用第二發(fā)明所述測定細胞功能用容器的測定細胞功能的方法中,為了誘導細胞因子,最好將采集在測定細胞功能用容器中全部血液在30至40℃孵育2至6小時。可以使用就第一發(fā)明測定細胞功能用容器所述的酶免疫測定法來定量測定誘導產(chǎn)生的細胞因子?,F(xiàn)在將詳細地例舉一用第二發(fā)明測定細胞功能用容器來測定細胞功能的方法。首先,上述細胞因子誘導物在上述測定細胞功能用容器中與血液反應。誘導反應完全后,測定細胞功能用容器以1200G離心以將血細胞組分與血漿組分分離。然后,用移液管將分離得到的血漿加至微量測定板上固定有單克隆抗細胞因子抗體的孔中,然后在37℃反應2小時。然后,用吸管等方法去除反應后的血漿溶液,并另外用中性pH的洗滌緩沖液例如吐溫20洗滌測試孔以進一步去除未反應的成份。然后用移液管在測試孔中加入固定有辣根過氧化物酶的多克隆抗細胞因子抗體,并在37℃反應1小時。然后用前述洗滌緩沖液洗滌測試孔以去除未反應的辣根過氧化物酶,然后加入含有過氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺的底物溶液反應5至10分鐘。加入1M的硫酸溶液終止反應,然后通過450納米處的吸光度來測定因酶反應而在底物中生成的顏色。根據(jù)利用已知濃度的細胞因子制備的標定曲線,由測得值得出誘導產(chǎn)生的細胞因子的水平。(測定細胞功能用的試劑盒)根據(jù)第一和第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器都能夠與某種能夠定量生理活性物質的試劑,例如酶免疫測定試劑。組合成可用于測定細胞功能的試劑盒。即,測定細胞功能用的試劑盒可以是,包含第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器和能夠定量測定誘導產(chǎn)生的生理活性物質的試劑。此外,測定細胞功能用的試劑盒還可以是,包含第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器和能夠定量測定誘導產(chǎn)生的生理活性物質的試劑。在使用上述試劑盒測定細胞功能時,可以同樣使用就利用第二發(fā)明測定細胞功能用容器測定細胞功能所例舉的方法。(優(yōu)選的抗凝劑)本發(fā)明中,上述抗凝劑中能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的量必須控制在不足以在與血液接觸時誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質。即,降低原先含于抗凝劑中的生理活性物質的含量有效地抑制了測試前對集得血液的非必要刺激的產(chǎn)生。所以需要對由抗凝劑反應造成的生理活性物質的產(chǎn)生進行調控,以便更準確地進行對各種生理活性物質的測定、對細胞功能的測定和對血細胞表面抗原的測定。此外,從采集至測試,血樣可以保存更長的時間。此時,生理活性物質誘導物仍然是前文所述的那些,而且較好的是內毒素。內毒素含量的增加會產(chǎn)生諸如TNFα、IL-1β、IL-6以及其它細胞因子,從而干擾準確測定。所以,必須將抗凝劑中內毒素的含量調節(jié)在不足以在血液中產(chǎn)生細胞因子之類生理活性物質的水平。后文實施例清楚地顯示,如果抗凝劑中內毒素的含量超過0.5EU/ml,在反應性血液中就可能產(chǎn)生諸如TNFα、IL-1β、IL-6以及其它細胞因子。所以,在反應液中,必須調節(jié)抗凝劑中的內毒素含量不超過0.5EU/ml。上述抗凝劑的量取決于需要采集的血液量,但是,如果使用乙二胺四乙酸鈉,通常為每毫升血液0.5至5毫克,如果使用檸檬酸鈉,則為按血液重量的3至5%,如果使用肝素鈉,則為每毫升血液4至50單位。所以,本發(fā)明中抗凝劑內內毒素含量宜根據(jù)抗凝劑和集得的血液來相應選擇,使得集得的血液中內毒素的含量不超過0.5EU/ml。例如,如果采集1毫升血液進行測定,并加入4至50單位/毫升選用的肝素鈉,相應地,其中的內毒素含量以不超過00.125EU/肝素單位為宜,不超過0.01EU/肝素單位更好。在說明第一發(fā)明時用于去除或滅活內毒素的方法都可以用來制造內毒素含量被降低的抗凝劑。但是,用熱、酸或堿處理來滅活內毒素有時會同時滅活某些抗凝劑本身。所以,最好采用薄膜超濾或利用吸附劑來去除。(細胞功能的測定)“細胞功能的測定”在本發(fā)明中包括直接測定血細胞功能的方法,所述的血細胞可能又分為紅細胞、血小板和白細胞,通過測定生理活性物質來評價細胞功能的方法,以及對血細胞表面抗原的測定。測定分為上述紅細胞、血小板和白細胞的血細胞的功能包括例如血凝反應,血小板凝集、紅細胞遷移、白細胞遷移、抑制測試、白細胞氮藍四唑還原反應、白細胞吞噬活性、淋巴細胞轉化、淋巴細胞細胞毒性測試、抗體依賴性細胞介導的細胞毒性活性測試、細胞因子產(chǎn)生能力、組胺釋放測試等。此外,測定細胞表面抗原指通過花結形成測試或流式細胞計數(shù)來測定細胞表面抗原,而且包括例如測定Fc受體和測定各種CD抗原。(第三發(fā)明所述的測定細胞功能用試劑盒)第三發(fā)明所述的測定細胞功能用試劑盒具有第一發(fā)明所述的測定細胞功能用容器和第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器,以及所述的試劑。前文已經(jīng)具體說明了適用的第一和第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器。為了用第三發(fā)明所述測定細胞功能用試劑盒來測定細胞的功能,第二發(fā)明的測定細胞功能用容器與采血容器連通,血樣被引入第二發(fā)明測定細胞功能用容器,然后振蕩第二發(fā)明測定細胞功能用容器以令血細胞與生理活性物質誘導物反應。此外,為了獲得對照值,采血容器與第一發(fā)明的測定細胞功能用容器連通以將血液引入后者。接著,已經(jīng)按照上述方法引入了血液的第一和第二發(fā)明所述測定細胞功能用容器通過靜置或者離心將血細胞與血漿分離,然后分別定量第一和第二發(fā)明所述測定細胞功能用容器中血漿內的生理活性物質,所用的分別是具有相應的不同測量靈敏度的第一和第二酶免疫測定試劑??梢允褂们拔乃龅募夹g來將采血容器分別與第一和第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器連通。在第二發(fā)明所述的測定細胞功能用容器中,隨著血液反應溫度和容器內內毒素含量的下降,細胞的代謝活性以及細胞因子的誘導作用隨之下降。隨著前兩者的上升,會發(fā)生細胞損傷和細胞因子誘導減少。所以,溫度以26至45℃為宜,30至42℃更好。為了有效地生產(chǎn)細胞因子并防止過度溶血,血液與內毒素的反應時間以1至12小時為佳,2至6小時更好。在第三發(fā)明所述的測定細胞功能用試劑盒中,利用第二酶免疫測定試劑來定量測定采集在第二發(fā)明所述測定細胞功能用容器中的血液中的生理活性物質,即血液內因其與生理活性物質誘導物反應而產(chǎn)生的生理活性物質。血液內并非因其與生理活性物質誘導物反應而產(chǎn)生的生理活性物質利用第一酶免疫測定試劑來定量測定。利用由此得到的差異就能夠測定出確實由生理活性物質誘導物誘導產(chǎn)生的生理活性物質。通常,血液中細胞因子的含量(采集在第一發(fā)明所述測定細胞功能用容器內的血液中的細胞因子含量)在與內毒素反應之前為每毫升幾皮克至幾百皮克,而在與內毒素反應之后為幾百皮克至幾千皮克,或更高。但是,沒有一種試劑具有足以在幾皮克至幾千皮克范圍內定量細胞因子的測量靈敏度。所以,為了測定每毫升1,000皮克或更高含量的細胞因子,血漿被以合適的稀釋溶液稀釋。但是,血漿的稀釋操作很復雜,分別需要稀釋溶液和稀釋容器,由此大大延長了測定時間。此外,測量值需要乘以稀釋度,這就可能降低測量值的精度。相反,根據(jù)第三發(fā)明,與內毒素反應前血液內的細胞因子含量(即采集在第一測定細胞功能用容器內的血液中的細胞因子含量)可以用具有高靈敏度,例如靈敏度為每毫升10至1,000皮克的第一酶免疫測定試劑來測定,而與內毒素反應后血液內的細胞因子含量(即采集在第二測定細胞功能用容器內的血液中的細胞因子含量)可以用具有低靈敏度,例如靈敏度為每毫升500至10,000皮克的第二酶免疫測定試劑來測定。由此避免了上述復雜的稀釋操作。此外,如果上述細胞因子是TNFα或IL-β,第一酶免疫測定的靈敏度宜為每毫升10至500皮克而第二酶免疫測定的靈敏度宜為每毫升500至10,000皮克,如果是IL-6,第一酶免疫測定的靈敏度宜為每毫升10至1,000皮克而第二酶免疫測定的靈敏度宜為每毫升1,000至20,000皮克。上述第一和第二酶免疫測定試劑都包含抗各自靶細胞因子的單克隆或多克隆抗體,酶例如過氧化物酶或堿性磷酸酶,以及相應酶的生色底物。最好采用夾心酶免疫測定,因為它不需要測定前的固定化,而且重復性好,該方法中抗各自靶細胞因子的單克隆抗體被固定在微量測定板之類的固體表面。將單克隆抗體固定在固體表面的技術可以隨意選自一種的物理吸附或化學結合技術,但以物理吸附為佳,因其操作簡便。制備具有不同靈敏度的第一和第二酶免疫測定試劑可以通過選擇性地調節(jié)抗各自靶細胞因子的單克隆或多克隆抗體的濃度、過氧化物或堿性磷酸酶之類酶的濃度和相應酶的生色底物的濃度。例如,在用夾心酶免疫測定時,可調節(jié)上述抗其靶細胞因子的固定在微量滴定板上的單克隆抗體的量,從而使第一種和第二種免疫測定試劑可制成有不同的靈敏度。即,可與單克隆抗體結合的靶細胞因子的量可根據(jù)固定在微量滴定板表面上的單克隆抗體的量而變,這就可制成有不同測定靈敏度的試劑。這些不同的測定靈敏度也可通過制成不同濃度的抗其靶細胞因子(與固定的單克隆抗體的靶細胞因子不同)的酶標記過的單克隆抗體或多克隆抗體,作為檢測與固定的單克隆抗體結合的細胞因子的試劑來實現(xiàn)。還有一種方法是將一種特異性結合模型如抗生物素蛋白-生物素結合入上述酶免疫測定系統(tǒng)中,如用生物素標記過的抗體或/和抗生物素蛋白標記過的酶代替酶標記過的抗體來抗其靶細胞因子(與固定的單克隆抗體的靶細胞因子不同)的方法?,F(xiàn)在就描述單克隆抗體固定的微量滴定板的典型制備方法,它可用于制備有不同測定靈敏度的第一和第二種酶免疫測定試劑。首先,使抗其靶細胞因子的特異性單克隆抗體溶解在緩沖液中(如磷酸鹽緩沖液),以制成兩種有不同濃度的稀釋液(制得的每個濃度根據(jù)所用的單克隆抗體與其靶細胞因子的結合常數(shù)數(shù)值來合適選擇)。將兩種溶解有單克隆抗體的溶液的每一種定量加入微量滴定板中,在2-8℃下培育一天一夜。然后用含有非離子表面活性劑如吐溫20的pH中性清洗緩沖液來清洗,將一定量的溶解有1-4%(重量)牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液加入微量滴定板中在37℃下培育2小時。除去微量滴定板中的液體后,使其在室溫下干燥。下面將詳細描述根據(jù)第三發(fā)明的測定細胞功能的試劑盒來測定細胞功能的一個例子。首先,在第一和第二個測定細胞功能的容器中加入血液并在37℃下培育4小時。每個容器在1600G下離心,使得血細胞和血漿分離。然后,將分離獲得的血漿加入各自微量滴定板孔內,并在37℃下反應2小時,其中微量滴定板上固定有兩種不同濃度水平的抗其靶細胞因子的單克隆抗體,微量滴定板上的非吸附位點被牛血清白蛋白封閉并被干燥。然后用吸取除去等方法將反應后的血漿除去,再用含有非離子表面活性劑如吐溫20的pH中性清洗緩沖液清洗孔,以進一步除去未反應的組分。然后,將用辣根過氧化物酶固定的抗上述細胞因子的多克隆抗體加入孔中,并在37℃下反應1小時。為除去未反應的部分辣根過氧化物酶固定的多克隆抗體,用上述的清洗緩沖液清洗孔,然后將含有過氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺的底物溶液加入孔中反應5-10分鐘。然后加入2M的硫酸終止反應,并在450nm下測定底物與酶反應產(chǎn)生的顏色的吸光度。通過比較測定值和標定曲線(通過抗已知濃度的上述細胞因子制得)可定量地測得在第一和第二個測定細胞功能的容器內處理過的血液中的細胞因子。(根據(jù)第四發(fā)明的測定細胞功能的方法)根據(jù)第四發(fā)明的測定細胞功能的方法是將血液加入第一和第二個測定細胞功能的容器內并測定細胞功能。在該例子中,用于測定細胞功能的容器最好預先加有上述含有內毒素的抗凝劑,其中抗凝劑中所含內毒素的濃度限制在不至于在與血液混合時誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質。下面描述根據(jù)第四發(fā)明的測定細胞功能方法的一個例子。在將受檢查者的血液收集入注射器前,先在有收集血液的針的注射器內加入抗凝劑如肝素鈉,肝素鈉典型的量為10U/毫升收集血液?;蛘撸鼓齽┛稍谘菏占耙陨鲜鱿嗤考尤胝婵昭菏占苤?。然后,在1600G下離心該血液,并用酶免疫測定法測定血漿中的TNFα量,其中TNFα是血細胞產(chǎn)生的生理活性物質的一個典型。同樣,根據(jù)第四發(fā)明的測定細胞功能方法的一個更具體的方面是,可用根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器。在這種情況下,在容器內可加有生理活性物質的誘導物使得其可與血液接觸。因此,如果與血液接觸,生理活性物質的誘導物質將與血液反應誘導生理活性物質的產(chǎn)生,如上根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器中所述的。誘導出的生理活性物質可用上述技術來測定。生理活性物質誘導產(chǎn)生的較佳溫度為26-45℃,誘導生理活性物質的較佳時間為1-6小時。同樣,誘導出的生理活性物質可用能對其定量分析的試劑如酶免疫測定試劑來定量測定。附圖簡述圖1是顯示實施例1-4和對比實施例2-4的測定結果的圖表,其中橫軸表示LPS的濃度,縱軸表示誘導出的TNFα的量。圖2是顯示實施例1-4和對比實施例2-4的測定結果的圖表,其中橫軸表示LPS的濃度,縱軸表示誘導出的IL-1β的量。圖3是顯示實施例1-4和對比實施例2-4的測定結果的圖表,其中橫軸表示LPS的濃度,縱軸表示誘導出的IL-6的量。圖4是顯示實施例5-10的測定結果的圖表,其中橫軸表示LPS的濃度,縱軸表示誘導出的TNFα或IL-1β的量。圖5是顯示實施例11-16的測定結果的圖表,其中橫軸表示反應溫度,縱軸表示誘導出的TNFα或IL-1β的量。圖6是顯示實施例17-21的測定結果的圖表,其中橫軸表示反應時間,縱軸表示誘導出的TNFα或IL-1β的量。較佳實施例描述下面將用本發(fā)明的實施例和對比實施例來詳細說明本發(fā)明。應當理解本發(fā)明不應局限于下列實施例。實施例1-4,對比實施例1-4(1)用于測定細胞功能的容器的生產(chǎn)方法4ml的血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)用4ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗10次。將0.05ml含有200U/ml肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)的注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入血液收集管中。將從大腸桿菌UKT-B衍生獲得的內毒素(日本藥典中標準產(chǎn)品號為8920)溶解在注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))中以進行連續(xù)稀釋。每一步稀釋后,將0.05ml獲得的溶解有內毒素的生理鹽水加入兩個加有肝素的血液收集管中,從而制得總溶液(溶解有肝素的生理鹽水和溶解有內毒素的生理鹽水的總和)中分別含有濃度為0EU/ml(對比實施例1)、1EU/ml(對比實施例2)、2EU/ml(對比實施例3)、5EU/ml(對比實施例4)、10EU/ml(實施例1)、20EU/ml(實施例2)、50EU/ml(實施例3)和100EU/ml(實施例)的內毒素的血液收集管。然后,將丁基橡膠制成的塞子(其大小與管子配合,并預先用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))清洗)輕輕地蓋在每個血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后,將每個血液收集管置于真空容器內。當容器內壓力逐漸降低至570mmHg時,每個血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣制成的血液收集管可分別用作實施例1-4和對比實施例1-4中測定細胞功能的容器。(2)血液收集管(容器)中的內毒素含量的測定將不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入有針的注射器中。使注射器的針刺入每一個置于四個真空血液收集管(上述(1)中獲得,只含有肝素)之上的丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))注入每個血液收集管中,然后在37℃下攪拌1小時以抽提內毒素。然后,用測定內毒素的試劑盒ENDOSPECIEES6(產(chǎn)品名)(SeikagakuKogyoCo.生產(chǎn))通過合成的生色底物技術來測定抽提液內的內毒素含量。結果表明四個測試的血液收集管中抽提液中的內毒素含量均不超過0.05EU/ml。(3)測定TNFα、IL-1β和IL-6誘導活性的方法用有針的注射器收集普通健康獻血者的肝素化血液。使注射器的針刺入置于四個真空血液收集管(上述(1)中獲得,含有各種濃度的內毒素)之上的每一個丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml收集獲得的血液注入每個血液收集管中。然后,將每個血液收集管安裝在恒溫室(預熱至37℃)中用于轉動混合的搖動平臺上,然后轉動混合4小時。充分混合后,每個血液收集管在4℃、1600G下離心10分鐘以收集血漿上清液。用采用其各自單克隆抗體的酶免疫測定試劑盒來測定收集的血漿中細胞因子的含量(pg/ml),即TNFα、IL-1β和IL-6各自的含量??捎肞REDICTA人TNF-αELISAKIT(檢測極限35pg/ml)、PREDICTA人IL-1βELISAKIT(檢測極限15pg/ml)和PREDICTA人IL-6ELISAKIT(檢測極限35pg/ml)(這些均由GenzymeInc.生產(chǎn))來分別測定產(chǎn)生的TNFα、IL-1β和IL-6的量(重量)。每種檢測用n=3來測定。結果列在圖1-3中。在所有這些圖中,橫軸LPS濃度所用的單位EU/ml表示在與血液接觸時總溶液中的內毒素濃度,縱軸的誘導量(pg/ml)表示兩個血液收集管中測得的血漿中每種細胞因子濃度的平均值。從結果可明顯看出,內毒素濃度為0.6EU/ml或更高時可明顯誘導TNFα、IL-1β和IL-6的產(chǎn)生。內毒素濃度為0EU/ml(對比實施例1)的結果并沒有顯示在圖1-3中,因為在這種情況下,在測定時產(chǎn)生的每種細胞因子濃度均低于檢測極限。實施例5-10(1)用于測定細胞功能的容器的生產(chǎn)方法4ml的血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)用4ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗10次。將0.05ml含有200U/ml肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)的注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入管中。將從大腸桿菌055B5衍生獲得的內毒素(LBL公司生產(chǎn))溶解在注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))中進行連續(xù)稀釋。每一步稀釋后,將0.05ml獲得的溶解有內毒素的生理鹽水加入兩個加有肝素的血液收集管中,從而制得總溶液(溶解有肝素的生理鹽水和溶解有內毒素的生理鹽水的總和)中分別含有濃度為8EU/ml(實施例5)、80EU/ml(實施例6)、800EU/ml(實施例7)、8000EU/ml(實施例8)、80000EU/ml(實施例9)和800000EU/ml(實施例10)的內毒素的血液收集管。然后,將丁基橡膠制成的塞子(其大小與管子配合,并預先用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗)輕輕地蓋在每個血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后,將每個血液收集管置于真空容器內。當容器內壓力逐漸降低至570mmHg時,每個血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣制成的血液收集管可分別用作實施例5-10中測定細胞功能用的容器。(2)血液收集管(容器)中的內毒素含量的測定將不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入有針的注射器中。使注射器的針刺入置于四個抽真空的血液收集管(上述(1)中獲得,只含有肝素)之上的每一個丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))注入每個血液收集管中,然后在37℃下攪拌1小時以抽提內毒素。然后,用測定內毒素的試劑盒ENDOSPECIEES6(產(chǎn)品名)(SeikagakuKogyoCo.生產(chǎn))通過合成的生色底物技術來測定抽提液內的內毒素含量。結果表明四個測試的血液收集管中抽提液中的內毒素含量均不超過0.05EU/ml。(3)測定TNFα和IL-1β誘導活性的方法用有針的注射器收集普通健康獻血者的肝素化血液。使注射器的針刺入每一個置于抽真空的血液收集管(上述(1)中獲得,含有不同濃度的內毒素)之上的丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml收集獲得的樣品血液注入每個血液收集管中。然后,將每個血液收集管安裝在恒溫室(預熱至37℃)中用于轉動混合的搖動平臺上,然后轉動混合4小時。充分混合后,每個血液收集管在4℃、1600G下離心10分鐘以收集血漿上清液。收集得到的血漿用實施例1所用的相同方法測定TNFα和IL-1β的含量(pg/ml)。結果列在圖4中。在圖4中,橫軸LPS濃度所用的單位EU/ml表示在與血液接觸時血液(總溶液)中的內毒素濃度,縱軸的誘導量(pg/ml)表示兩個血液收集管測得的血漿中TNFα和IL-1β的濃度的平均值。從結果可明顯看出,內毒素濃度為0.8-80000EU/ml時可誘導TNFα和IL-1β的產(chǎn)生。同樣,當內毒素濃度為8-800EU/ml時,誘導出的TNFα和IL-1β量均顯示出緩慢增長。當內毒素濃度達到8000EU/ml時,誘導出的TNFα和IL-1β量均顯示出有進一步增長。然而,當內毒素濃度達到80000EU/ml時,誘導出的TNFα和IL-1β量均比內毒素為8000EU/ml時的要小。內毒素在10-200μg/ml(轉換成內毒素濃度約為80000-2000000EU/ml)時作為細胞因子誘導物質的例子在待公開專利No.平1-503331的說明書中有所描述。然而,本發(fā)明使得內毒素可在較低濃度下應用,從而細胞因子通過多種機制的誘導(被認為與較高濃度的內毒素有關)不會發(fā)生。因此,根據(jù)本發(fā)明,可以誘導準確反映患者病理狀態(tài)的細胞因子。實施例11-16(1)用于測定細胞功能的容器的生產(chǎn)方法每個4ml的血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)用4ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗10次。將0.05ml含有200U/ml肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)的注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入管中。將從大腸桿菌055B5衍生獲得的內毒素(LBL公司生產(chǎn))溶解在注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))中至濃度為1600EU/ml。將0.05ml獲得的溶解有內毒素的生理鹽水加入上述制得的、加有肝素的血液收集管中。然后,將丁基橡膠制成的塞子(其大小與管子配合,并預先用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗)輕輕地蓋在每個血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后,將每個血液收集管置于真空容器內。當容器內壓力逐漸降低至570mmHg時,每個血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣制成的血液收集管可分別用作實施例11-16中測定細胞功能所用的容器。(2)血液收集管(容器)中內毒素含量的測定將不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入有針的注射器中。使注射器的針刺入置于四個抽真空的血液收集管(上述(1)中獲得,只含有肝素)之上的每一個丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))注入每個血液收集管中,然后在37℃下攪拌1小時以抽提內毒素。然后,用測定內毒素的試劑盒ENDOSPECIEES6(產(chǎn)品名)(SeikagakuKogyoCo.生產(chǎn))通過合成的生色底物技術來測定抽提液內的內毒素含量。結果表明測試的四個血液收集管中抽提液中內毒素含量均不超過0.05EU/ml。(3)測定TNFα和IL-1β誘導活性的方法用有針的注射器收集普通健康獻血者的肝素化血液。使注射器的針刺入每一個置于抽真空的血液收集管(上述(1)中獲得)之上的丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml收集獲得的樣品血液注入每個血液收集管中。然后,將兩個收集有樣品血液的血液收集管安裝在恒溫室內的每個搖動平臺(用于轉動混合)上,恒溫室分別預熱至25℃(實施例11)、30℃(實施例12)、33℃(實施例13)、37℃(實施例14)、40℃(實施例15)和45℃(實施例16),然后轉動混合4小時。充分混合后,每個血液收集管在4℃、1600G下離心10分鐘以收集血漿上清液。收集得到的血漿用實施例1所用的相同方法測定TNFα和IL-1β的含量(pg/ml)。結果列在圖5中。在圖5中,橫軸反應溫度表示恒溫室設定的溫度,縱軸的誘導量(pg/ml)表示兩個血液收集管測得的血漿中TNFα和IL-1β的濃度平均值。實施例17-21(1)用于測定細胞功能的容器的生產(chǎn)方法每個4ml的血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)用4ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗10次。將0.05ml含有200U/ml肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)的注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入管中。將從大腸桿菌055B5衍生獲得的內毒素(LBL公司生產(chǎn))溶解在注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))中至濃度為1600EU/ml。將0.05ml獲得的溶解有內毒素的生理鹽水加入每個上述制得的、加有肝素的血液收集管中。然后,將丁基橡膠制成的塞子(其大小與管子配合,并預先用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗)輕輕地蓋在每個血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后,將每個血液收集管置于真空容器內。當容器內壓力逐漸降低至570mmHg時,每個血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣制成的血液收集管可分別用作實施例17-21中測定細胞功能所用的容器。(2)血液收集管(容器)中內毒素含量的測定將不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入有針的注射器中。使注射器的針刺入置于四個抽真空的血液收集管(上述(1)中獲得,只含有肝素)之上的每一個丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))注入每個血液收集管中,然后在37℃下攪拌1小時以抽提內毒素。然后,用測定內毒素的試劑盒ENDOSPECIEES6(產(chǎn)品名)(SeikagakuKogyoCo.生產(chǎn))通過合成的生色底物技術來測定抽提液內的內毒素含量。結果表明測試的四個血液收集管中抽提液中內毒素含量均不超過0.05EU/ml。(3)測定TNFα和IL-1β誘導活性的方法用有針的注射器收集普通健康獻血者的肝素化血液。使注射器的針刺入置于12個抽真空血液收集管(上述(1)中獲得)之上的每一個丁基橡膠制成的塞子中,將0.9ml收集獲得的樣品血液注入每個血液收集管中。然后,將收集有樣品血液的血液收集管安裝在預熱至37℃的恒溫室內的搖動平臺(用于轉動混合)上,然后分別轉動混合30分鐘(實施例17)、2小時(實施例18)、4小時(實施例19)、6小時(實施例20)和24小時(實施例21)。在上述實施例中,每個實施例有兩個血液收集管進行轉動混合上述時間。充分混合后,每個血液收集管在4℃、3000rpm下離心10分鐘以收集血漿上清液。收集得到的血漿用與實施例1所用的相同方法測定TNFα和IL-1β的含量(pg/ml)。結果列在圖6中。在圖6中,橫軸反應時間表示上述轉動混合進行的時間,縱軸的誘導量(pg/ml)表示兩個血液收集管測得的血漿中TNFα和IL-1β的濃度平均值。實施例22(1)用于測定細胞功能的容器的生產(chǎn)方法每個4ml的血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)用4ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗10次。將0.05ml含有200U/ml肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)的注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入每個管中。然后將不含內毒素的無菌的植物凝集素-P(PHA-P)(SigmaChemicalCo.生產(chǎn))溶解在注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))中。將0.05ml獲得的生理鹽溶液加入每個上述制得的、加有肝素的血液收集管中,使得每個血液收集管中所含的PHA-P濃度為100μg/ml,以總溶液(溶解有肝素鈉的生理鹽水和溶解有PHA-P的生理鹽水的總和)計。然后,將丁基橡膠制成的塞子(其大小與管子配合,并預先用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗)輕輕地蓋在每個血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后,將每個血液收集管置于真空容器內。當容器內壓力逐漸降低至570mmHg時,每個血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣制成的血液收集管可分別用作測定細胞功能的容器。(2)血液收集管(容器)中內毒素含量的測定將不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入有針的注射器中。使注射器的針刺入置于四個抽真空的血液收集管(上述(1)中獲得,含有肝素和PHA-P)之上的每一個丁基橡膠制成的塞子,將0.9ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))注入每個血液收集管中,然后在37℃下攪拌1小時以抽提內毒素。然后,用與實施例1中所用的相同方法來測定抽提液內的內毒素含量。結果表明測試的四個血液收集管中抽提液中內毒素含量均不超過0.05EU/ml。(3)測定TNFα、IL-1β和IL-6誘導活性的方法TNFα、IL-1β和IL-6誘導活性的測定用與實施例1(3)中相同方法來測定,只是這里采用本實施例(1)獲得的含有肝素和PHA-P的抽真空血液收集管來代替實施例1(3)中的含有各種濃度內毒素的抽真空血液收集管。對比實施例5(1)用于測定細胞功能的容器的生產(chǎn)方法將用與實施例22(1)相同方法制成的含有肝素和PHA-P的抽真空的血液收集管作為測定細胞功能的容器,只是用與實施例22中所用不同的4ml真空血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)來代替實施例22中所用的4ml真空血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)。(2)血液收集管(容器)中內毒素含量的測定用實施例22(2)中的相同方法測定每個血液收集管的內毒素含量,只是這里采用了四個本實施例(1)中獲得的含有肝素和PHA-P的抽真空血液收集管。結果表明分別從四個血液收集管中抽提出的液體中的內毒素含量分別為0.65EU/ml、0.74EU/ml、0.58EU/ml和0.62EU/ml。(3)測定TNFα、IL-1β和IL-6誘導活性的方法TNFα、IL-1β和IL-6的誘導活性用與實施例22(3)中相同的方法來測定,只是這里用10個本實施例(1)中獲得的含有肝素和PHA-P的抽真空血液收集管來代替實施例22(3)中制得的含有肝素和PHA-P的抽真空血液收集管。結果列在表1-3中。表1</tables>*SD=標準誤差CV=誤差系數(shù)表2</tables>*SD=標準誤差CV=誤差系數(shù)表3</tables>*SD=標準誤差CV=誤差系數(shù)從表1-3可以看出,采用每份抽提液中含有不超過0.5EU/ml的內毒素的測定細胞功能的容器可提供較好的重現(xiàn)性。實施例23-30(1)用于測定細胞功能的容器的生產(chǎn)方法每個4ml的血液收集管(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成)用4ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗10次。將肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)和PHA-L(SigmaChemicalCo.生產(chǎn))溶解在注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))中,以制成含有40U/ml肝素鈉和分別有如下表4所示PHA-L濃度的生理鹽溶液。將每種生理鹽溶液1ml加入各自兩個上述清洗過的血液收集管中。然后,將丁基橡膠制成的塞子(其大小與管子配合,并預先用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))充分清洗)輕輕地蓋在每個血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后,將每個血液收集管置于真空容器內。當容器內壓力逐漸降低至570mmHg時,每個血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣制成的血液收集管可分別用作實施例23-30中測定細胞功能的容器。(2)血液收集管(容器)中內毒素含量的測定將1ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入用于測定細胞功能的各個容器中(總共有8個),容器通過上述(1)獲得且含有不同濃度的PHA-L,然后容器在37℃下攪拌1小時以抽提出內毒素。然后,每個抽提液中的內毒素含量用實施例1的相同方法測定。結果表明每個用于測定細胞功能的容器中抽提液中內毒素含量均不超過0.05EU/ml。(3)測定TNFα和IL-1β誘導活性的方法用有針的注射器收集普通健康獻血者的肝素化血液。使注射器的針刺入置于實施例23-30的容器之上的每一個丁基橡膠制成的塞子中,其中容器從上述(1)中獲得并用于測定細胞功能,將1.0ml收集獲得的樣品血液注入每個血液收集管中。然后,將每個血液收集管安裝在預熱至37℃的恒溫室內的用于轉動混合的搖動平臺上,然后分別轉動混合2小時。充分混合后,每個容器在4℃、1600G下離心10分鐘以收集血漿上清液。收集得到的血漿用與實施例1的(3)中所用的相同方法測定TNFα和IL-1β的含量(pg/ml)。結果列在表4內。表4</tables>實施例31-34重復實施例23的步驟以定量測定生成的TNFα和IL-1β,只是用有表4所示濃度的PHA-P(SigmachemicalCo.生產(chǎn))代替實施例23中的PHA-L。結果列在表4中。實施例31-34中,以實施例23(2)相同方法制得的用于測定細胞功能的容器中的抽提液內毒素含量不超過0.05EU/ml。實施例35和對比實施例6用商業(yè)上可獲得的真空血液收集管,即不含LPS的血液收集管(由SekisuiChem.Ind.Co.生產(chǎn)提供不含LPS規(guī)格)作為第一發(fā)明的用于測定細胞功能的容器(實施例35)。同樣,用另一個商業(yè)上可獲得的真空血液收集管,即A公司生產(chǎn)的血液收集管(不提供無LPS規(guī)格)作為對比的血液收集管(對比實施例6)。對于每一實施例,從同一名普通健康人體內將血液真空收集入五個血液收集管內(每管1ml)。每個管子在20℃下儲藏2小時,然后在4℃下離心(1600G,10分鐘),隨后進行血漿收集,用名為“PREDICTA人TNF-αELISAKIT”的產(chǎn)品(GenzymeInc.生產(chǎn))測定收集的血漿中的TNFα的量。取測定值的平均值,從而獲得每一實施例的最后數(shù)值。結果表明在實施例35中測得TNF-α濃度不超過15pg/ml,即檢測極限,而對比實施例6中為51pg/ml。用以下方法分別對來自同一批的實施例35所用的單獨血液收集管(不含LPS的血液收集管)和對比實施例6中所用的A公司生產(chǎn)的血液收集管測定其內毒素含量。將1ml不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))加入上述每個血液收集管中,然后在37℃下攪拌1小時以抽提內毒素。然后,每個管中抽提液內毒素的含量用與實施例1的相同方法測定。結果是在實施例35所用的收集管中測得內毒素含量為0.03EU/ml,對比實施例6所用的收集管中內毒素含量為958EU/ml。由上可明顯看出,在測定血液中的TNFα濃度時,如果不用血液收集管收集血液(容器中的內毒素量在通過收集與待測液同體積的不含內毒素的水來抽提時處于不足以誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質的水平),血液將與血液收集容器中的LPS反應生成(誘導)生理活性物質如TNFα,并受到不必要的刺激而逐漸改變其性質,結果阻礙了血液中的TNFα濃度的準確測定。實施例36和對比實施例7-9將作為刺激物的濃度為120ng/ml的LPS溶液分配到5個實施例35所用的血液收集管、5個對比實施例6所用的血液收集管、5個商業(yè)上獲得的加有肝素的真空血液收集管(B公司生產(chǎn))、和5個商業(yè)上獲得的加有肝素的真空血液收集管(C公司生產(chǎn))中,即每個血液收集管中加50μl,以制成使LPS與血液反應誘導出細胞因子的反應器。實施例35的血液收集管制成的反應器作為實施例36,對比實施例6的血液收集管制成的反應器作為對比實施例7。B公司生產(chǎn)的血液收集管制成的反應器作為對比實施例8,C公司生產(chǎn)作為對比實施例9。同時,對來自與B公司生產(chǎn)的血液收集管(用它可制得對比實施例8中的反應器)同一批的血液收集管用與實施例35的相同方法分別測定其內毒素含量。同樣,對來自與C公司生產(chǎn)的血液收集管(用它可制得對比實施例9中的反應器)同一批的血液收集管用與實施例35的相同方法分別測定其內毒素含量。結果表明,對比實施例8和9中分別所用的B和C公司生產(chǎn)的血液收集管分別含有濃度為10EU/ml和389EU/ml的內毒素。用注射器收集來自5只雄性、8-10周齡的ICR小鼠的心臟血液共6ml,然后注入與實施例35所用相同的血液收集管中。注射器預先浸泡在0.2M氫氧化鈉水性溶液中過夜以滅活內毒素,用不含內毒素的水充分洗滌,并進一步加入肝素使得在注射器收集血液后其最終含有肝素濃度為10U/ml。然后,將多頭注射器針中的一個針刺入上述的血液收集容器的塞子內,另一個針先后刺入實施例36和對比實施例7-9所用的反應器的塞子,并將收集的血液分配到這些反應器中,每個反應器為300μl收集的血液。然后使每個反應器在37℃下維持攪拌4小時,然后在4℃、1600G下離心10分鐘以收集血漿。用GenzymeInc.生產(chǎn)的名為“FACTORTESTMOUSETNF-αELISAKIT”的產(chǎn)品測定收集的血漿中的TNF-α含量。取測定值的平均值從而獲得每個實施例的最終數(shù)值。同樣計算每個實施例的誤差系數(shù)(%)(誤差系數(shù)(%)=(標準誤差)/(平均值)×100)。結果列在表5中。表5*CV=誤差系數(shù)從表5可以看出,實施例36中發(fā)現(xiàn)TNF-α產(chǎn)生(誘導)的偏差(誤差系數(shù))最小,其中不含LPS的血液收集容器中加有已知量的LPS。根據(jù)上述結果,為建立一測定方法來準確而簡便地診斷患者的病理狀態(tài)及其它,認為必須儲藏收集的血液,不使其在收集開始至測定期間受不必要的刺激作用。最后,在收集血液時需要用一個有降壓內部并含有不足以使生理活性物質產(chǎn)生(釋放出或誘導出)的LPS水平的血液收集容器,這一點是明顯可以理解的。從上述結果也可明顯看出,為準確測定血細胞的功能,需要使用一個不被內毒素(其濃度足以對測定值產(chǎn)生負效應)污染的血液收集容器。同樣也應將收集的血液分配人每個含有預定量的刺激物的血液收集容器,以使收集得到的血液與刺激物反應產(chǎn)生(釋放出或誘導出)可隨后定量測定的生理活性物質。實施例37使本實施例中所用的儀器和容器在250℃下干熱2小時或更長時間(如果它們是用玻璃制成的),或者可浸泡在0.2M的氫氧化鈉水溶液中過夜以滅活內毒素(如果是用塑料制成的),還要用不含內毒素的水充分清洗。同樣該操作是在干凈的實驗臺中進行的。將10,000單位的肝素鈉(WakoJunyakuCo.生產(chǎn))溶解在10ml注射用生理鹽水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))中。得到的肝素鈉溶液在4℃、500G下用超濾儀CENTRIPREP100(分級分子量為100000,AmiconCo.生產(chǎn))離心超濾1小時。所用的超濾儀預先用0.2M氫氧化鈉水溶液浸泡過夜以滅活內毒素,并用不含內毒素的水充分清洗。用ENDOSPECIEES-6(SeikagakuIndCo.生產(chǎn))測定超濾后的肝素鈉溶液的內毒素含量。結果表明肝素鈉溶液中的內毒素含量為0.01EU/肝素單位。然后,將0.1ml超濾后的肝素鈉溶液(1000U/ml)加入10ml血液收集注射器(TerumoCo.生產(chǎn))中,并補加10ml從普通健康獻血者收集獲得的血液(血液中最終肝素濃度約為10U/ml)。對收集后的部分血液、在37℃恒溫室內放置2小時和4小時的另一部分血液分別在4℃、1600G下離心10分鐘以收集每部分的血漿上清。用含有抗細胞因子(即TNFα、IL-1β和IL-6)的各自單克隆抗體的酶免疫測定試劑盒測定收集的血漿中的細胞因子含量。每種細胞因子含量用n=3進行測定,獲得的平均值列在表6中。對比實施例10血液的收集與實施例37的方法相同,只是所用的肝素鈉溶液不進行超濾處理。用含有抗細胞因子(即TNFα、IL-1β和IL-6)的各自單克隆抗體的酶免疫測定試劑盒測定收集的血漿中細胞因子的含量。每種細胞因子含量用n=3進行測定,獲得的平均值列在表6中。另外,對該對比實施例10中所用的肝素鈉溶液用與實施例37的相同方法測定其內毒素含量。結果表明為1.2EU/肝素單位。表6</tables>*血液收集后的時間從表6可明顯看出,在用超濾過的內毒素含量減少至0.01EU/肝素單位(血液中內毒素濃度約為0.1EU/ml)的肝素鈉溶液的系統(tǒng)中,TNFα、IL-1β和IL-6均不明顯產(chǎn)生直至血液收集后4小時。另一方面,在用未處理過的內毒素含量為1.2EU/肝素單位(血液中內毒素濃度約為12EU/ml)的肝素鈉溶液的系統(tǒng)中,由于有顯著量的內毒素存在,血液中產(chǎn)生的TNFα、IL-1β和IL-6的量隨時間而增加。實施例38-40使本實施例中所用的儀器和容器在250℃下干熱2小時或更長時間(如果是用玻璃制成的),或者可在0.2M氫氧化鈉水溶液中浸泡過夜以滅活內毒素(如果是用塑料制成的),還要用不含內毒素的水充分清洗。同樣操作是在干凈的實驗臺中進行的。將0.01ml實施例37中制備的含有10單位肝素鈉溶液(含有濃度為0.01EU/肝素單位的內毒素)加入每個不含內毒素的5ml血樣收集管中(內徑為12.6×75mm,用聚乙烯對苯二甲酸酯制成,SekisuiChem.Ind.Co.生產(chǎn))。然后,將從大腸桿菌UKT-B衍生獲得的日本藥典標準內毒素溶解在1.6ml注射用生理鹽水中以進行連續(xù)稀釋。每一步稀釋后,將獲得的溶解有內毒素的生理鹽水加入加有肝素鈉的血樣收集管中,使得制得的血樣收集管中每份收集的血液分別含有濃度為0.1EU/ml(實施例38)、0.2EU/ml(實施例39)和0.4EU/ml(實施例40)的內毒素。然后,將丁基橡膠制成的大小與血樣收集管配合的塞子輕輕地蓋在每個血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后,將每個血液收集管置于可減低壓力的容器內。當容器內部降低至足以吸取1ml血液的壓力時,每個血液收集管的開口被塞子緊密封閉。然后,將來自普通健康獻血者的血液真空收集入血樣收集管中,即每個管收集1ml。將每個血樣收集管安裝在預熱至37℃的恒溫室內用于轉動混合的搖動平臺上,然后轉動混合2小時。充分混合后,每個管子在4℃、1600G下離心10分鐘以收集血漿上清。用與實施例37的相同方法測定收集的血漿中的細胞因子,即TNFα、IL-1β和IL-6的含量。每種細胞因子含量用n=3進行測定,獲得的平均值列在表7中。對比實施例11,12重復實施例38收集血漿的過程,只是將制得的溶解有內毒素的生理鹽溶液加入加有肝素鈉的血樣收集管中,使得制得的每個血樣收集管中分別含有濃度為0.5EU/ml(對比實施例11)和1.0EU/ml(對比實施例12)的內毒素。用與實施例37的相同方法測定收集的血漿中的細胞因子,即TNFα、IL-1β和IL-6的各自含量。每種細胞因子含量用n=3進行測定,獲得的平均值列在表7中。表7</tables>*血液中的濃度從表7可以明顯看出,如果血液中的內毒素含量超過0.5EU/ml,則它將誘導TNFα、IL-1β和IL-6的產(chǎn)生。實施例41<用于測定細胞功能的試劑盒的生產(chǎn)方法>肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))稀釋以獲得肝素濃度為200U/ml的肝素鈉溶液。將0.05ml肝素鈉溶液加入實施例1制得的含有濃度不超過0.05EU的內毒素的血樣收集管中,使得血樣收集管含有10單位的肝素。對獲得的溶液進行真空干燥。然后,將丁基橡膠制成的大小與血樣收集管配合的塞子輕輕地蓋在血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后將血液收集管置于壓力可降低的容器內。當容器內部降低至足以吸取1ml血液的壓力即570mmHg時,血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣就制成了用于測定細胞功能的第一容器。肝素鈉(Novo·NordiskA/SCo.生產(chǎn),產(chǎn)品名Novo·Heparin#1000)用不含內毒素的水(OtsukaSeiyakuCo.生產(chǎn))稀釋以獲得肝素濃度為200U/ml的肝素鈉溶液。同時,大腸桿菌055B5衍生獲得的內毒素(LBLCo.生產(chǎn))用不含內毒素的水稀釋以獲得含有內毒素濃度為2000EU/ml的溶解有內毒素的溶液。將0.05ml肝素鈉溶液加入實施例1制得的含有濃度不超過0.05EU的內毒素的血樣收集管中,使得血樣收集管含有10單位的肝素。然后將0.05ml溶解有內毒素的溶液加入血樣收集管內。對獲得的溶液進行真空干燥。然后,將丁基橡膠制成的塞子輕輕地蓋在血液收集管的開口上而不緊密塞住開口。然后將血液收集管置于壓力可降低的容器內。當容器內部降低至足以吸取1ml血液的壓力即570mmHg時,血液收集管的開口被塞子緊密封閉。這樣就制成了用于測定細胞功能的第二個容器。用于測定TNFα的第一和第二個試劑根據(jù)下列步驟生產(chǎn)。將抗人TNFα的單克隆抗體(GenzymeInc.生產(chǎn))用0.1M碳酸鹽緩沖液(pH9.5)稀釋以分別獲得濃度為1μg/ml的稀釋液(用作第一種TNFα測定試劑,即用于高靈敏度測定的固定化抗體溶液)和濃度為100ng/ml的稀釋液(用作第二種TNFα測定試劑,即用于低靈敏度測定的固定化抗體溶液)。將每種稀釋液100μl加入96孔微量滴定板(NuncMaxiSorp微量滴定板)的每個孔中,然后在2-8℃下培育一天一夜。然后,每個孔用含有0.05%(重量)吐溫20的磷酸鹽緩沖液(pH7.3)吸取清洗3次。然后,每個孔中加入250μl含有4%(重量)的牛血清白蛋白(SigmaChemicalCo.生產(chǎn))的磷酸鹽緩沖液(pH7.3),隨后在37℃下培育2小時。然后將培育后的溶液從微量滴定板的每個孔中取出并隨后在室溫下干燥。另外,可采用商業(yè)上可獲得的試劑人TNFα(GenzymeInc.生產(chǎn))、生物素標記過的抗人TNFα的多克隆抗體(GenzymeInc.生產(chǎn))、過氧化氫和含有四甲基聯(lián)苯胺(KPLCo.生產(chǎn))的底物溶液。同樣,可用含有0.05%(重量)吐溫20的磷酸鹽緩沖液(pH7.3)作為清洗溶液。配制2M的硫酸溶液來用作終止溶液。<TNFα產(chǎn)生能力的測定方法>用有針的注射器收集普通健康獻血者的肝素化血液。隨后將注射器的針刺入第一和第二種測定細胞功能的容器的各自丁基橡膠制成的塞子中,并將1ml樣品血液注入每個容器中。然后,將每個加有血液的容器安裝在預熱至37℃的恒溫室內用于轉動混合的搖動平臺上,然后轉動混合4小時。充分混合后,每個容器在4℃、1600G下離心10分鐘以收集血漿上清液。將從測定細胞功能的第一種容器中收集得到的血漿均分到4個孔中,并用上述高靈敏度試劑以與實施例1(3)中的相同方法測定TNFα含量。另一方面,將從測定細胞功能的第二種容器中收集得到的血漿均分到4個孔中,用上述低靈敏度試劑以與實施例1(3)中的相同方法測定TNFα含量。對比實施例13在每一個用于測定細胞功能的第一和第二容器中以與實施例41的相同方法誘導TNFα的產(chǎn)生,并將從每一個中收集的血漿均分到4個孔中,用商業(yè)上可獲得的試劑盒(PREDICTA人TNF-αKIT)測定血漿中的TNFα含量。當測定值超過其檢測極限時,用含1%(重量)牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液pH7.3以約為5的稀釋比進行稀釋后再次測定。測定值乘以稀釋比就測得TNFα含量。實施例41和對比實施例13的結果列在下表8中。表8</tables>*LD=檢測極限在表8中,CV表示誤差系數(shù)。從表8可明顯看出,商業(yè)上的試劑盒在稀釋前不能用來測定第二種用于測定細胞功能的容器中誘導出的TNFα量。實施例給出了較高的重現(xiàn)性,即誤差系數(shù)約為7.5%。另一方面,在對比實施例中,TNFα含量的測定是在血漿稀釋后用商用試劑盒進行,結果給出的重現(xiàn)性較低,即誤差系數(shù)在約為15-20%范圍內。發(fā)明效果根據(jù)本申請的第一發(fā)明,在用于測定細胞功能(測定血細胞產(chǎn)生生理活性物質)的容器中,容器的特征在于,當用與待測液同體積的水來收集進行抽提時,可誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的量被限制在不足以誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質的水平。因此,收集的血液在收集起至測定期間幾乎不受不必要的刺激作用,這就使得血液能長期儲藏。這就允許能精確測定存在于收集血漿中的生理活性物質,并且使得容器可用來精確診斷有各種疾病的患者的病情。同樣,當根據(jù)第一發(fā)明的測定細胞功能的容器與根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器組合使用時,它可適當?shù)赜脕慝@得對照值。在根據(jù)本申請第一發(fā)明的測定細胞功能的容器中,當可誘導上述生理活性物質產(chǎn)生的材料是內毒素時,在使用前測定細胞功能的容器中的內毒素含量最好控制在不超過0.5EU/ml(當用與待測液同體積的水收集抽提時抽提液中的濃度)。這使得能精確測定存在于收集血漿中的生理活性物質,而不被血液收集前容器內的內毒素含量干擾。在根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器中,盡管可誘導血液中產(chǎn)生生理活性物質的材料的加入使得其與血液接觸,但是在其加入前最初存在于容器中的可誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的含量被限制在不足以影響生理活性物質測定值的水平內。因此,當血液加入并與可誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料接觸從而產(chǎn)生生理活性物質后,可精確地測定生理活性物質的產(chǎn)生。同樣,在根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器中,如果誘導上述生理活性物質產(chǎn)生的材料是內毒素,則在與血液接觸時,獲得的總液體中內毒素濃度被限制在0.6-100000EU/ml范圍內。因此,當血液加入并與可誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料接觸從而產(chǎn)生生理活性物質時,可非常準確地測定生理活性物質的產(chǎn)生。在根據(jù)第一發(fā)明或第二發(fā)明的測定細胞功能的容器中,再加入抗凝劑可有助于防止測定細胞功能的容器中的血液凝固。同樣,當上述抗凝劑中含有的可誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料量被控制在不足以在與血液混合時誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質時,可非常準確測定產(chǎn)生的生理活性物質而不受原先存在于抗凝劑中的誘導生理活性物質的材料的影響。同樣,在根據(jù)第一或第二發(fā)明的測定細胞功能的容器中,容器內部壓力降低使得血液可引入測定細胞功能的容器內。因此,在收集被檢查者血液后用移液管人工將血液移入各種反應器中、細胞分離、細胞培養(yǎng)及其它操作是不需要的。這就消除了檢查人員獲得各種傳染性疾病如肝炎和艾滋病的危險。同樣,在使用前容器內的內毒素含量受到限制,從而消除了各種細菌或灰塵偶爾混入樣品血液的可能性。因此,這就避免了由于雜質的存在或各種操作引起細胞不必要的活化或失活的潛在問題。同樣,由于用的是全血,因此細胞的分離和培育、顯微測定及其它專業(yè)化技術是不需要的。這縮短了測定時間,且不需引入RI儀和昂貴的設備如流式細胞儀。因此,與常規(guī)測定相比,細胞功能的測定的操作更加簡便、成本更低、準確度更高。根據(jù)本發(fā)明的測定細胞功能的試劑盒包括第一發(fā)明和第二發(fā)明的測定細胞功能的容器和可定量測定誘導出的生理活性物的試劑,上述可定量分析的試劑使得誘導出的生理活性物質的定量分析更容易。同樣,本申請的第三發(fā)明包括根據(jù)第一發(fā)明的測定細胞功能的容器、根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器和可定量分析生理活性物質的試劑。因此,當血液加入測定細胞功能的第一和第二容器中并用上述試劑進行定量分析時,從測定細胞功能的第一容器獲得對照值,而測定值與血液中被誘導生理活性物質的材料誘導出的生理活性物的量相對應。因此,可對血液中的生理活性物質進行高精度定量分析。在該例子中,有不同靈敏度的第一和第二酶免疫測定試劑可按需分別用于測定細胞功能的第一和第二容器。這就使得能對誘導出的生理活性物質進行精確地定量分析。同樣,在根據(jù)第三發(fā)明的測定細胞功能的試劑盒中,如果誘導生理活性物質的材料是內毒素,則應控制第二容器中的內毒素含量,使得獲得的整個液體的內毒素濃度在與血液接觸時在0.6-100000EU/ml范圍內。因此,當內毒素與血液接觸時,可非常準確地測得產(chǎn)生的生理活性物質的量。在根據(jù)本申請第四發(fā)明的測定細胞功能的方法中,將血液加入根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器中,并與生理活性物質的誘導物接觸,從而誘導出生理活性物質。由于根據(jù)第二發(fā)明的測定細胞功能的容器中內毒素含量被限制在上述范圍內,因此可準確測得血液中產(chǎn)生的生理活性物質的量。在這種情況下,生理活性物質可通過在26-45℃溫度范圍內,或者在1-6小時的時間內誘導生理活性物質的產(chǎn)生來可靠地誘導產(chǎn)生。在根據(jù)第四發(fā)明的測得細胞功能的方法中,血液中產(chǎn)生的生理活性物質的量可通過用可定量測定生理活性物質的試劑定量分析生理活性物質來可靠地測得。權利要求1.一種用于測定由血細胞產(chǎn)生的生理活性物質的測定細胞功能用容器,其特征在于,能夠誘導產(chǎn)生所述生理活性物質的材料其含量,在以與待測液體等體積的水抽提時,被控制在不足以誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質的水平。2.根據(jù)權利要求1所述的測定細胞功能用容器,其中能夠誘導產(chǎn)生所述生理活性物質的材料是內毒素,而且使用前測定細胞功能用容器內的內毒素含量,即用與待測液等體積的水抽提而得的抽提液中的濃度,不超過0.5EU/ml。3.一種測定細胞功能用容器,其特征在于,能夠誘導產(chǎn)生生理活性物質的材料以可與血液接觸的狀態(tài)包含于容器內,而且能夠誘導產(chǎn)生所述生理活性物質的材料的含量在使用前被限制在不足以干擾生理活性物質測量值的水平。4.根據(jù)權利要求3所述的測定細胞功能用容器,其中能夠誘導產(chǎn)生所述生理活性物質的材料是內毒素,而且在與血液接觸時,內毒素在形成的總液體中的濃度在0.6至100,000EU/ml范圍內。5.根據(jù)權利要求1至4中任一項所述的測定細胞功能用容器,其中還包括抗凝劑。6.根據(jù)權利要求5所述的測定細胞功能用容器,所述抗凝劑中能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的濃度被控制在不足以在與血液接觸時誘導產(chǎn)生生理活性物質的水平。7.根據(jù)權利要求1至6中任一項所述的測定細胞功能用容器,其中能夠誘導產(chǎn)生所述生理活性物質的材料是內毒素,而所述的生理活性物質是細胞因子。8.根據(jù)權利要求1至7中任一項所述的測定細胞功能用容器,其中所述的細胞因子是選自以下組中的至少一種腫瘤壞死因子α、白細胞介素-1β和白細胞介素-6。9.根據(jù)權利要求1至8中任一項所述的測定細胞功能用容器,其中所述容器的內部被降壓。10.一種用于測定細胞功能的試劑盒,其特征在于具有根據(jù)權利要求1至9中任一項所述的測定細胞功能用容器和一種能夠定量誘導產(chǎn)生的生理活性物質的試劑。11.根據(jù)權利要求10所述的用于測定細胞功能的試劑盒,其中所述的定量試劑是酶免疫測定試劑。12.一種用于測定細胞功能的試劑盒,它包含用于測定由血細胞產(chǎn)生的生理活性物質的第一測定細胞功能用容器,能夠誘導產(chǎn)生所述生理活性物質的材料其含量,在以與待測液體等體積的水抽提時,被控制在不足以誘導血細胞產(chǎn)生生理活性物質的水平;第二測定細胞功能用容器,其中血液內在與血液接觸時能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料和抗凝劑以可與血液接觸的狀態(tài)包含于該容器內,而且,使用前容器內能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料的量被限制在不足以干擾生理活性物質測量值的水平;以及一種定量所述生理活性物質的試劑。13.根據(jù)權利要求12所述的測定細胞功能用試劑盒,其中所述的試劑包括用于定量測定采集在第一測定細胞功能用容器中的血液中的生理活性物質的第一酶免疫測定試劑;用于定量測定能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料與采集在第二測定細胞功能用容器中的血液反應產(chǎn)生的生理活性物質的第二酶免疫測定試劑,第二酶免疫測定試劑具有不同于第一酶免疫測定試劑的對生理活性物質的靈敏度。14.根據(jù)權利要求12或13所述的測定細胞功能用試劑盒,其中所述的能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料是內毒素,而且其中在第二容器內,在與血液接觸時,形成的總液體內的內毒素含量在0.6至100,000EU/ml范圍內。15.一種測定細胞功能的方法,其特征在于通過將血液引入權利要求3至9中任一項所述的容器內,使得血液與能夠誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料接觸,并由此誘導產(chǎn)生生理活性物質。16.根據(jù)權利要求15所述的測定細胞功能的方法,其中在26至45℃誘導生理活性物質。17.根據(jù)權利要求15或16所述的測定細胞功能的方法,其中誘導生理活性物質的時間為1至6小時。18.一種測定細胞功能的方法,其中用相應的定量試劑來定量用權利要求15至17中任一項所述的方法誘導產(chǎn)生的生理活性物質。19.一種測定細胞功能的方法,其特征在于,通過將血液引入包含在權利要求12至14中任一項所述的測定細胞功能用試劑盒內的第一和第二測定細胞功能用容器,從而誘導生理活性物質的產(chǎn)生。20.根據(jù)權利要求19所述的測定細胞功能的方法,其中在26至45℃誘導生理活性物質。21.根據(jù)權利要求19或20所述的測定細胞功能的方法,其中誘導生理活性物質的時間為1至6小時。22.一種測定細胞功能的方法,其中用相應的定量試劑來定量用權利要求18至21中任一項所述的方法誘導產(chǎn)生的生理活性物質。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于測定細胞功能的容器,它操作簡便,危險性小,而且測量精度高。具體地說,是一種用于分析由血細胞產(chǎn)生的生理活性物質的細胞功能測定用容器,其中誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料被減少到不引起血細胞產(chǎn)生所述物質的水平,這可以通過用與待檢血樣等量的水抽提該容器來測定;還有另外一種容器,其中在與血液接觸后會誘導生理活性物質產(chǎn)生的材料處于能夠與血液接觸的狀態(tài),而容器中該材料的量被減少到不至于影響對活性物質的分析。文檔編號G01N33/68GK1198815SQ9719106公開日1998年11月11日申請日期1997年8月8日優(yōu)先權日1996年8月12日發(fā)明者小林幸司,瀨戶口雄二,栗山澄申請人:積水化學工業(yè)株式會社