專利名稱：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活力測(cè)定方法及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，特別是一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活力測(cè)定方法及試劑盒。
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)是腎素—血管緊張素系統(tǒng)的關(guān)鍵酶、催化血管緊張素II的生成。ACE的活性與體內(nèi)血管緊張素II的水平成正比，因此，測(cè)定ACE的活力可以了解血管緊張素II的水平，監(jiān)測(cè)血管緊張素抑制劑(ACEI)的治療效果。1985年至今，國(guó)外Buttery等對(duì)ACE的活性自動(dòng)化測(cè)定方法進(jìn)行了廣泛地研究，其中較簡(jiǎn)便、靈敏的方法已被Slgma發(fā)展為商品試劑盒。在這個(gè)方法中，人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸(FAPGG)經(jīng)ACE水解造成340nm吸光度下降，通過(guò)檢測(cè)340nm吸光度變化度量ACE的活性。
然而，Slgma商品試劑盒的靈敏度較低，不能滿足臨床診斷的需要。這也是在此以前ACE測(cè)定未被廣泛應(yīng)用于臨床的原因。國(guó)內(nèi)關(guān)于ACE測(cè)定方面的研究尚是空白。
本發(fā)明的目的在于提供一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活力測(cè)定方法及試劑盒。
本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)解決方案血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活力測(cè)定方法首先把人工合成底物FAPGG經(jīng)ACE水解生成的FAP與顯色染料反應(yīng)得到一黃色化合物；然后再測(cè)得所述的黃色化合物在400-410nm處的吸光度增加率ΔA，最后根據(jù)公式
計(jì)算出血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活力。
式中 TV—反應(yīng)總體積SV—樣本體積ε—黃色化合物摩爾吸光系數(shù)d—光徑(cm)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活力測(cè)定試劑盒所述試劑盒由顯色染料、FAPGG，Boric acid、Cholic acid組成，其中顯色染料1mmol/L，F(xiàn)APGG≥1.5mmol/L，Boric acid 80mmol/L，Cholic acid 8mmol/L。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、由于使用了顯色染料，使測(cè)定波長(zhǎng)由340nm移到400-410nm；2、FAPGG的濃度大于或等于1.5mmol/L；3、測(cè)定方法為動(dòng)力法；4、不測(cè)定底物(FAPGG)的減少，而是測(cè)定產(chǎn)物(黃色化合物)的增多，避免了分析儀器對(duì)底物濃度的限制(Slgma的方法中，F(xiàn)APGG濃度必須小于1.5mmol/L)，使底物濃度充分提高，反應(yīng)速度得以接近最大反應(yīng)速度。因而極度大地提高了試驗(yàn)的靈敏度(Slgma的靈敏度為0.01A/U.L，本發(fā)明的靈敏度為0.1A/U.L)，拓寬了反應(yīng)線性范圍(Slgma的線性反應(yīng)范圍為150U/L，本發(fā)明的線性反應(yīng)范圍為300U/L)；5、簡(jiǎn)便易行、易于推廣。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述實(shí)施例一血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活力測(cè)定試劑盒由顯色染料(1-[2-chloroethyl]benzyl-4-oitroallide)、FAPGG、Boric acid、cholic acid組成，其中，顯色染料2mmol/L，F(xiàn)APGG 1.6mmol/L，Boric acid 85mmol/L，Cbolic acid 9mmol/L。
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活力測(cè)定方法首先把人工合成底物FAPGG經(jīng)ACE水解生成的FAP與前述的顯色染料反應(yīng)得到黃色化合物(FAP-benzyl-4-nitroallide)，然后再測(cè)得所述黃色化合物在408nm處的吸光度增加率ΔA，再根據(jù)公式
計(jì)算出血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活力。(公式中TV為反應(yīng)總體積，SV為樣本體積，ε為黃色化合物摩爾吸光系數(shù)，d為光徑(cm))。
權(quán)利要求
1.一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活力測(cè)定方法，其特征在于先把人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸經(jīng)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶水解生成的n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酸與顯色染料反應(yīng)得到一黃色化合物，再測(cè)得所述的黃色化合物在400-410nm處的吸光度增加率ΔA，再根據(jù)公式ACE(U/L)=ΔA×TV×106SV×ϵ×d]]>計(jì)算出血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活力。其中TV——反應(yīng)總體積SV——樣本體積ε——黃色化合物摩爾吸光系數(shù)d——光徑(cm)
2.一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活力測(cè)定試劑盒，其特征在于所述的試劑盒由顯色染料、人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸、硼酸、膽酸組成，其中顯色染料1-5mmol/L，人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸≥1.5mmol/L，硼酸80-100mmol/L，膽酸8-16mmol/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活力測(cè)定方法及試劑盒。其測(cè)定方法是先把人工合成底物n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸經(jīng)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶水解生成的n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酸與顯色染料反應(yīng)得到一黃色化合物,再測(cè)得所述的黃色化合物在400—410nm處的吸光度增加率,再根據(jù)公式計(jì)算出血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活力。試劑盒由顯色染料、人工合成底物n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸、硼酸、膽酸組成。本發(fā)明簡(jiǎn)便易行、易于推廣、靈敏度高。
文檔編號(hào)G01N21/25GK1258004SQ9812172
公開日2000年6月28日 申請(qǐng)日期1998年12月21日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月21日
發(fā)明者王太重 申請(qǐng)人:王太重