專利名稱：丹參中原兒茶醛的測(cè)定新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹參中原兒茶醛的測(cè)定新方法。
丹參具祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩之功效，是臨床上治療冠心病、及心絞痛的有效藥物之一，據(jù)藥理研究證明，其治療心絞痛的有效成分為水溶性及脂溶性兩部分。水溶性成分多以原兒茶醛及丹參素為測(cè)定指標(biāo)，來(lái)評(píng)價(jià)丹參藥材的質(zhì)量、脂溶性的成分多以丹參酮IIA為評(píng)價(jià)指標(biāo)。
目前為止，丹參藥材中原兒茶醛的測(cè)定方法報(bào)道的已有4種，分別為文獻(xiàn)1(復(fù)方丹參口含片原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(國(guó)家簡(jiǎn)化四類新藥)，文獻(xiàn)2(竺葉青等，中成藥研究，1984，6(12)，11-12)，文獻(xiàn)3(楊樹(shù)德等，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1981；16(7)530)，文獻(xiàn)4(王寶琹主編，中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994，243頁(yè))。上述四種測(cè)定方法均不能將藥材所含的原兒茶醛準(zhǔn)確地測(cè)定出來(lái)，僅能測(cè)到其真實(shí)含量的1/20-1/171。不能為丹參藥材的合理應(yīng)用提供準(zhǔn)確的測(cè)定依據(jù)，導(dǎo)致大量的丹參藥材資源浪費(fèi)。
本發(fā)明的目的是為了丹參藥材有效成分的充分利用，而提供一種方法簡(jiǎn)便、精密度高、重現(xiàn)性好、穩(wěn)定、沒(méi)有理論損失，易于普及及掌握的丹參中原兒茶醛的測(cè)定方法。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的(1)供試品溶液的制備取丹參粉碎過(guò)65目篩，準(zhǔn)確稱取1±1％g，置具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加0.04-0.1％的Na2CO3溶液50ml，稱重，80-100℃水浴中加熱2小時(shí)15分。取下，放冷，稱重，用水補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾；取續(xù)濾液10ml，于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，過(guò)濾，取續(xù)濾液，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液；(2)對(duì)照品溶液制備精密稱取原兒茶醛對(duì)照品約10±1％mg置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；(3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，甲醇-1％冰醋酸溶液(15∶85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm±1nm，理論塔板數(shù)按原兒茶醛計(jì)應(yīng)不低于2000；(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定、計(jì)算，即得。
本發(fā)明的原理如下本發(fā)明根據(jù)原兒茶醛為弱酸性的物質(zhì)，溶于堿成鹽后，增大了其水中的溶解度以及成鹽后趨于穩(wěn)定的性質(zhì)，探討出了丹參中原兒茶醛的測(cè)定新方法。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下(1)本發(fā)明能夠?qū)⒌⒅性瓋翰枞┑恼鎸?shí)含量準(zhǔn)確地測(cè)定出來(lái)，以同一批丹參藥材飲片為樣品，采用文獻(xiàn)1-4的4種方法，及本發(fā)明的方法分別進(jìn)行樣品處理，再用同一高壓液相法進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明方法的測(cè)定結(jié)果是文獻(xiàn)報(bào)道方法的20-171倍(見(jiàn)附表1及附

圖1)。
利用本發(fā)明方法還測(cè)定了2批丹參個(gè)子貨(一批野生丹參，一批家種丹參)的含量，野生的原兒茶醛含量為0.28％，家種的為0.32％，其測(cè)定結(jié)果分別是文獻(xiàn)2丹參個(gè)子貨9批樣品的最高含量0.08％的3和4倍，最低含量0.03％的9-10倍，是文獻(xiàn)5(華西藥學(xué)雜志1996；11(4)214)2批丹參藥材0.098％的3倍，0.0201％的14倍和16倍，是文獻(xiàn)6(中成藥1996；18(10)20-22)及文獻(xiàn)7(中藥通報(bào)，1985；10(11)18-20)丹參飲片的0.03％的近10倍及0.02％的近15倍。
(2)本發(fā)明不僅為丹參藥材的合理應(yīng)用提供了準(zhǔn)確地測(cè)定方法，還為全國(guó)制藥行業(yè)尋找丹參及復(fù)方丹參制劑的合理提取工藝提供了新的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，將為提高各類丹參制劑的質(zhì)量及療效作出貢獻(xiàn)。
(3)本發(fā)明還具有方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、沒(méi)有理論損失、易于普及掌握的特點(diǎn)。
本發(fā)明的實(shí)施例如下(1)供試品溶液的制備取丹參粉碎過(guò)65目篩，準(zhǔn)確稱取1±1％g，置具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加0.04-0.1％的Na2CO3溶液50ml，稱重，80-100℃水浴中加熱2小時(shí)15分。取下，放冷，稱重，用水補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾；取續(xù)濾液10ml，于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，過(guò)濾，取續(xù)濾液，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液；
(2)對(duì)照品溶液制備精密稱取原兒茶醛對(duì)照品約10±1％mg置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；(3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，甲醇-1％冰醋酸溶液(15∶85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm±1nm，理論塔板數(shù)按原兒茶醛計(jì)應(yīng)不低于2000；(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定、計(jì)算，即得。
附方法學(xué)考察數(shù)據(jù)1、樣品、對(duì)照品紫外掃描圖譜樣品與對(duì)照品紫外掃描圖譜完全一致，均在280nm有最大吸收(見(jiàn)圖2)。
2、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取原兒茶醛標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.0188mg/ml)每隔一定時(shí)間，向高效液相色譜儀注一針，測(cè)定其峰面積，測(cè)定了53小時(shí)內(nèi)的穩(wěn)定性，結(jié)果表明8次的峰面積的平均值為2016913.75，RSD％為1.7。
3、線性關(guān)系分別吸取濃度為0.005185mg/ml，0.01037mg/ml，0.016592mg/ml，0.02074mg/m1，0.03111g/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，各進(jìn)樣20μl，測(cè)其峰面積，計(jì)算回歸方程y＝5706926.5X-14717.42，γ＝0.9998，表明原兒茶醛在0.1037-0.6222μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。
4、精密度實(shí)驗(yàn)取同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.0188mg/ml)，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20μl，測(cè)定其吸收峰值，5次測(cè)定的平均峰面積為2038834，RSD％為1.14。
5、重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)采用加樣回收實(shí)驗(yàn)，即取同一份樣品6份，一份作為疊加樣品，其余5份按樣品標(biāo)準(zhǔn)品約為1∶1加入定量標(biāo)準(zhǔn)品，按樣品測(cè)定項(xiàng)下，進(jìn)行提取測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)附表2。
附表1同一批藥材用本發(fā)明方法及文獻(xiàn)報(bào)道方法的測(cè)定結(jié)果對(duì)比
附表2原兒茶醛回收率測(cè)定結(jié)果
附圖及圖面說(shuō)明圖1-1為原兒茶醛標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的測(cè)定圖譜。圖1-2為本發(fā)明方法的丹參中原兒茶醛的測(cè)定圖譜。圖1-3為文獻(xiàn)1法的丹參中原兒茶醛的測(cè)定圖譜。圖1-4為文獻(xiàn)2法的丹參中原兒茶醛的測(cè)定圖譜。圖1-5為文獻(xiàn)3法的丹參中原兒茶醛的測(cè)定圖譜。圖1-6為文獻(xiàn)4法的丹參中原兒茶醛的測(cè)定圖譜。圖2為原兒茶醛標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品及丹參藥材的紫外掃描圖譜。在圖1中，1為丹參素峰，2為原兒茶醛峰。在圖2中，a為原兒茶醛標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，b為丹參藥材。
權(quán)利要求
1.丹參中原兒茶醛的測(cè)定新方法，其特征在于(1)供試品溶液的制備。取丹參粉碎過(guò)65目篩，準(zhǔn)確稱取1±1％g，置具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加0.04-0.1％的Na2CO3溶液50ml，稱重，80-100℃水浴中加熱2小時(shí)15分。取下，放冷，稱重，用水補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾；取續(xù)濾液10ml，于25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，過(guò)濾，取續(xù)濾液，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液；(2)對(duì)照品溶液制備精密稱取原兒茶醛對(duì)照品10±1％mg置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；(3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，甲醇-1％冰醋酸溶液(15∶85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm±1nm，理論塔板數(shù)按原兒茶醛計(jì)應(yīng)不低于2000；(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定、計(jì)算，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種丹參中原兒茶醛的測(cè)定新方法,首先制備供試品溶液,將丹參粉碎過(guò)65目篩,精密稱取1±1%g置三角瓶中,加0.04—0.1%的Na
文檔編號(hào)G01N30/00GK1264040SQ99117660
公開(kāi)日2000年8月23日 申請(qǐng)日期1999年8月11日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月11日
發(fā)明者韓桂茹, 趙志軍, 劉鐵鋼 申請(qǐng)人:河北省藥品檢驗(yàn)所