一種黨參藥材的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥材質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體涉及一種黨參藥材的質(zhì)量檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黨參（Codonopsispilosula)，屬桔梗科（Platycodon)植物，古代以產(chǎn)于中國上 當(dāng)郡的為最名貴，故稱黨參。幾十年來，在原有研宄基礎(chǔ)上，國內(nèi)外對黨參化學(xué)成分進(jìn)行了 深入研宄，從黨參中鑒定出了 10種留醇類、21種糖苷類、5種生物堿類及含氮成分、34種揮 發(fā)油成分、13種三萜類及其他成分，還有多種人體必需的無機(jī)元素和氨基酸。
[0003] 近年來，中藥領(lǐng)域的大力發(fā)展以及中藥材需求量的加大，導(dǎo)致大量偽劣藥材的上 市，其中不少偽品的農(nóng)藥殘留量嚴(yán)重超標(biāo)，給黨參藥材的質(zhì)量、用藥的安全性及有效性造成 了很大的沖擊。藥材農(nóng)藥殘留問題日益引起世界各國的重視，國際上從1970年起開始研宄 藥材農(nóng)藥殘留量問題，1980年世界衛(wèi)生組織將農(nóng)藥殘留測定單獨(dú)列為檢測項(xiàng)目，近年來成 為世界性的研宄熱點(diǎn)。
[0004] 中藥質(zhì)量分為外部質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量。外部質(zhì)量包括藥材性狀特征、組織特征等。其 中，藥材性狀包括形狀、大?。ㄋ幉闹睆胶烷L度等）、表面特征、質(zhì)地、斷面特征、氣味等；組 織特征包括藥材的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀及內(nèi)含物等。內(nèi)在質(zhì)量包括浸出物、化學(xué)成分（有效 成分、特征成分）檢測和控制、農(nóng)藥及重金屬殘留分析；重金屬分析包括鉛（Pb)、鎘（Cd)、汞 (Hg)、砷（As)、銅（Cu)及重金屬總量的定量和限量測定，農(nóng)藥殘留量分析包括有機(jī)氯、有機(jī) 磷、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的測定。
[0005] 而藥典中黨參的檢測項(xiàng)目只有性狀、顯微鑒別、薄層和浸出物鑒別，指標(biāo)比較單 一，不利于黨參藥材的質(zhì)量控制，不利于黨參使用的安全性和穩(wěn)定性。因此，建立一種新的 黨參藥材的質(zhì)量檢測方法具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于現(xiàn)有技術(shù)中黨參藥材檢測指標(biāo)單一，不利 于黨參藥材的質(zhì)量控制，進(jìn)而提供一種新的黨參藥材的檢測方法。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 本發(fā)明的黨參藥材的檢測方法，該方法包括如下黨參炔苷的含量測定步驟以及農(nóng) 藥殘留量的測定步驟，其中，
[0009] A、黨參炔苷的含量測定包括如下步驟：
[0010] (1)精密稱取干燥至恒重的黨參炔苷對照品4. 82mg，加入甲醇定容至10mL，得濃 度為0. 482mg/mL;精密移取此對照品溶液5.OmL，加入甲醇定容至10mL，得濃度為0. 241mg/ mL的對照品溶液；
[0011] ⑵精密稱定待測黨參藥材粉末2g，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲提取 30min，放置至室溫，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶 液；
[0012] (3)照高效液相色譜法試驗(yàn)，選用ZORBAXSB-C18色譜柱，以體積比28% :72%的 乙腈-水為流動(dòng)相；控制流速為1.OmL/min，柱溫為30°C，269nm波長條件下進(jìn)行檢測；分別 精密吸取對照品、供試品溶液各10UL注入液相色譜儀，測定；
[0013] B、農(nóng)藥殘留量測定包括以下步驟：
[0014] (1)精密稱取三苯基磷酸酯適量，加丙酮制成每lmL含100yg三苯基磷酸酯的溶 液，作為內(nèi)標(biāo)貯備液；
[0015] 分別精密量取各農(nóng)藥對照品貯備溶液lmL及上述內(nèi)標(biāo)貯備液lmL，加丙酮定容至 100mL，作為混合對照品貯備溶液；分別精密量取適量，加乙腈定容制成20-1000ng/mL的不 同濃度的溶液，作為混合對照品溶液；
[0016] 另取核糖酸內(nèi)酯適量，加乙腈溶解制成每lmL含20mg核糖酸內(nèi)酯的溶液，另取山 梨醇適量，加水溶解制成每lmL含山梨醇10mg的溶液；分別精密量取上述核糖酸內(nèi)酯、山梨 醇溶液各lmL混勾，加乙腈定容至10mL，作為分析保護(hù)劑；
[0017] (2)精密稱取待測藥材細(xì)粉10g，并加入氯化鈉lg混勾，精密加入丙酮100mL，冰 浴超聲處理30分鐘，離心，將上清液迅速移入裝有l(wèi)g無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30 分鐘；隨后精密量取上述溶液60mL減壓濃縮至近干，并加入體積比為1 :1的環(huán)已烷-乙酸 乙酯溶液溶解樣品并定容至10mL，過濾后取濾液經(jīng)GPC凝膠滲透色譜凈化，以體積比為1 : 1的環(huán)已烷-乙酸乙酯溶液為流動(dòng)相洗脫，收集洗脫液，移入KD瓶中，減壓濃縮至近干；
[0018] 向上述樣品中加入體積比為1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5mL溶解，并轉(zhuǎn)移至 石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以體積比為1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15mL洗 脫，收集洗脫液，氮吹至近干，隨后加入上述內(nèi)標(biāo)貯備液5yL，加乙腈定容至lmL，作為供試 品溶液；
[0019] (3)精密量取上述各濃度混合對照品溶液及供試品溶液各400yL，并分別加入上 述分析保護(hù)劑100yL混勻，隨后分別精密吸取1yL，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定；其 中，
[0020] 氣相色譜分析條件為：取規(guī)格為30mX0. 25mmX0. 25um的彈性石英毛細(xì)管柱 DB17ms，以高純氦氣為載氣，柱流速1. 3mL/分鐘，進(jìn)樣量1yL，采用高壓不分流進(jìn)樣，設(shè)置 進(jìn)樣口溫度為230°C，升溫程序具體為：初始溫度60°C，以30°C/分鐘升至120°C、以10°C/ 分鐘升至200°C、以2°C/分鐘升至230°C、以30°C/分鐘升至300°C，并保持7分鐘；
[0021] EI源質(zhì)譜測定的條件為：設(shè)置電子能量70eV，離子源溫度230°C，接口溫度250°C。
[0022] 本發(fā)明的黨參藥材的檢測方法，農(nóng)藥殘留量測定中，上述GPC凝膠滲透色譜凈化 步驟的條件具體為：填料為Bio-BeadsS-X3 200-400目，凈化柱為2. 5mmX40cm，具體洗脫 參數(shù)為凈化去雜900s，目標(biāo)物收集1200s，柱子清洗300s。
[0023] 本發(fā)明的黨參藥材的檢測方法，農(nóng)藥殘留量測定中，上述農(nóng)藥對照品包括敵敵畏、 甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、a-六六六、0 -六六六、y-六六六、6 -六六六、 氧化樂果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地蟲硫磷、磷胺I、樂果、七氯、五氯苯胺、百菌清、 甲基毒死蜱、艾氏劑、克菌丹、磷胺II、甲基對硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜 靈、三唑酮、毒死蜱、馬拉硫磷、殺螟硫磷、對硫磷、二甲戊靈、順式環(huán)氧七氯、反式環(huán)氧七 氯、三唑醇A、三唑醇B、反式氯丹、順式硫丹、順式氯丹、反式硫丹、pp' -DDE、PP' -DDD、 OP' -DDT、PP' -DDT、狄氏劑、殺撲磷、異狄氏劑、乙硫磷、三苯基磷酸酯、聯(lián)苯菊酯、硫丹硫 酸酯、異菌脲、甲氰菊酯、三氯殺螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯殺螨砜、伏殺硫磷、氯菊酯 1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。
[0024] 本發(fā)明的黨參藥材的檢測方法，黨參炔苷含量測定中，上述供試品的超聲條件為 功率250W，頻率40kHz。
[0025] 本發(fā)明的黨參藥材的檢測方法，黨參炔苷含量測定中，上述待測藥材的粒徑為 180-2000um。
[0026] 本發(fā)明的黨參藥材的檢測方法，黨參炔苷含量測定中，上述黨參炔苷對照品的干 燥步驟為用五氧化二磷減壓干燥12小時(shí)以上。
[0027] 本發(fā)明的黨參藥材的檢測方法，農(nóng)藥殘留量測定中，上述待測藥材的粒徑為 180-2000um。
[0028] 本發(fā)明上述方法通過對黨參藥材所含的黨參炔苷含量的測定以及對黨參藥材農(nóng) 藥殘留量的測定，進(jìn)行黨參藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣的判定標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明通過高效液相色譜法檢測黨 參炔苷的含量，不僅準(zhǔn)確且簡單易行。本發(fā)明通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方式檢測藥材的 殘留農(nóng)藥量，不僅檢測的準(zhǔn)確度高，方法簡單、快速，而且通過對檢測條件的特定篩選，可一 次性將黨參藥材中常見的農(nóng)藥種類進(jìn)行一次性的有效檢測，可同時(shí)完成多個(gè)檢測指標(biāo)，上 述方法準(zhǔn)確率及實(shí)用效果均較好，更有利于對黨參藥材質(zhì)量的控制，有助于提高該藥物使 用的安全性和穩(wěn)定性。
【附圖說明】
[0029] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例并結(jié)合 附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中：
[0030] 圖1為實(shí)施例1中黨參炔苷對照品的HPLC色譜圖；
[0031] 圖2為實(shí)施例1中黨參待測藥材的HPLC色譜圖；
[0032] 圖3為實(shí)施例2中農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的全掃描氣相色譜圖；
[0033] 圖4為實(shí)施例2中農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的0-10分鐘掃描氣相色譜圖；
[0034] 圖5為實(shí)施例2中農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的10-20分鐘全掃描氣相色譜圖；
[0035] 圖6為實(shí)施例2中農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的20-40分鐘全掃描氣相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0036] 下述實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明但不限于本發(fā)明。
[0037] 實(shí)施例1黨參藥材中黨參炔苷的含量測定
[0038] 1儀器與試藥
[0039] 1. 1儀器
[0040] Agilentl200高效液相色譜儀（安捷倫公司）；
[0041] 檢測器G131513二極管陣列檢測器（美國）；
[0042] BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；
[0043] OHAUS Corporation DV SERIES型電子天平（奧豪斯儀器有限責(zé)任公司制造）；
[0044] KQ-250高頻數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。
[0045] 1. 2試劑
[0046] 黨參炔苷對照品（中國食品藥品檢驗(yàn)研宄院，批號：111732-200904);
[0047] 乙腈（產(chǎn)品批準(zhǔn)號：Q/12NK 4021-2003,天津市光復(fù)精細(xì)化工研宄所，色譜純）； [0048]甲醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠，分