一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬物質分離測定領域，尤其涉及一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和 芥子醇含量的方法。
【背景技術】
[0002] 松柏醇和芥子醇都是研究較少的化學物質，松柏醇的結構式見圖1，芥子醇的結構 式見圖2,對它們的許多理化性質都是未知的，對于松柏醇和芥子醇還需要更深入的研究， 并且它們是梨次生代謝形成木質素的途徑中的關鍵中間代謝產(chǎn)物，松柏醇和芥子醇分別為 G-木質素和S-木質素的前體物質。研究松柏醇和芥子醇有利于更好的研究梨的代謝途徑。 梨的口感好壞與石細胞有關，而石細胞又是由木質素聚合而成，故研究松柏醇和芥子醇， 在實際生產(chǎn)生活中有利于控制石細胞的含量，能改善梨的口感，提高梨的品質。
[0003] 松柏醇和芥子醇屬于酚醇類化合物，松柏醇沸點為163_165°C，芥子醇沸點為 384. 7°C，其在常壓下沸點較低，根據(jù)其理化性質來判斷，檢測松柏醇和芥子醇應用氣相色 譜更適合，但是已有人應用液相色譜測定梨代謝過程中主要酚酸類如芥子酸、肉桂酸、檸檬 酸、蘋果酸等的含量，所以應用高效液相色譜法來測定其含量更合適，使得我們能在同一個 水平上對不同的物質進行分析，可以減少不同檢測方法對實驗數(shù)據(jù)造成的影響。
[0004] 另外，松柏醇和芥子醇的結構相似，芥子醇與松柏醇相比，只多了一個甲氧基，通 過紫外分光光度計的波長掃描，我們可以看出二者的峰型一致，在同一檢測波長下，二者的 吸光度是相同的，而HPLC檢測光為紫外光，故想要用HPLC分離檢測松柏醇和芥子醇還是有 一定的難度，前人都沒有做過。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提出一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方 法。
[0006] 為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術方案： 一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方法，其特征在于，包括以下 步驟： (1)、標準曲線的測定 (a) 應用分析天平分別準確稱取lmg的松柏醇和芥子醇的標準品； (b) 分別溶于10mL60%的色譜級甲醇溶液中； (c) 分別在松柏醇和芥子醇標準品溶液中取2. 5mL，然后混到一起，制成松柏醇和芥子 醇總濃度為50ug/mL的混標溶液； (d) 按色譜條件進行分離檢測； 色譜條件為：色譜柱參數(shù)為C18Column250x4. 6mm5um((長度為250mm的C18填料 的色譜柱，該色譜柱的內(nèi)徑為4. 6mm，色譜柱填料顆粒的大小為5um).流動相為甲醇和純 水，梯度洗脫，體積流量為0. 4-0. 7mL/min，柱溫為25-30°C，分析時間為70min，檢測波長為 275nm，進樣量為20uL; (2 )、供試品溶液的制備 選取待測物，稱取4-5g待測樣品，加入70mL水，在85-90°C水浴鍋中水浴3-5min， 去掉水，再加70-80mL水，在85-90°C水浴鍋中水浴3-5min，去掉水，用研缽進行研磨，力口 15mL75%-80%的乙醇溶液，水浴75-80°C回流2-3h，取上清，再加15mL75%-80%的乙醇溶液， 水浴75-8CTC回流2-3h，，取上清，合并兩次所得上清液，旋轉蒸發(fā)至干，加5-10mL55%-70% 的色譜級甲醇溶液中復溶，用〇. 22ym微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液； (2)、供試品測定 按照步驟（1)所述的色譜條件，測定供試品HPLC色譜圖，并對譜圖數(shù)據(jù)進行分析，得到 待測物中松柏醇和芥子醇高效液相色譜圖。
[0007] 所述的一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方法，其特征在 于：液相色譜儀的檢測器為紫外檢測器。
[0008] 所述的一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方法，其特征在 于：色譜柱為Alltima?HPC18Column250x4. 6mm5um。
[0009] 所述的用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方法的制備方法，其特 征在于：梯度洗脫的具體液相條件見表1 : 表1梯度洗脫程序
【主權項】
1. 一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方法，其特征在于，包括以 下步驟： (1)、標準曲線的測定 (a) 應用分析天平分別準確稱取Img的松柏醇和芥子醇的標準品； (b) 分別溶于10mL55%-65%的色譜級甲醇溶液中； (c) 分別在松柏醇和芥子醇標準品溶液中取2. 5mL，然后混到一起，制成松柏醇和芥子 醇總濃度為50ug/mL的混標溶液； (d) 按色譜條件進行分離檢測； 色譜條件為：色譜柱參數(shù)為C18 Column 250x4. 6mm 5um，（長度為250mm的C18填料 的色譜柱，該色譜柱的內(nèi)徑為4. 6mm，色譜柱填料顆粒的大小為5um);流動相為甲醇和純 水，梯度洗脫，體積流量為〇. 4-0. 7mL/min，柱溫為25-30°C，分析時間為70min，檢測波長為 275nm，進樣量為20uL ; (2 )、供試品溶液的制備 選取待測物，稱取4-5g待測樣品，加入70mL水，在85-90°C水浴鍋中水浴3-5min， 去掉水，再加70-80mL水，在85-90°C水浴鍋中水浴3-5min，去掉水，用研缽進行研磨，力口 15mL75%-80%的乙醇溶液，水浴75-80°C回流2-3h，取上清，再加15mL75%-80%的乙醇溶液， 水浴75-80°C回流2-3h，，取上清，合并兩次所得上清液，旋轉蒸發(fā)至干，加5-10mL55%-70% 的色譜級甲醇溶液中復溶，用〇. 22 μ m微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液； (3)、供試品測定 按照步驟（1)所述的色譜條件，測定供試品HPLC色譜圖，并對譜圖數(shù)據(jù)進行分析，得到 待測物中松柏醇和芥子醇高效液相色譜圖。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方 法，其特征在于：液相色譜儀的檢測器為紫外檢測器。
3. 根據(jù)權利要求1所述的一種用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方 法，其特征在于：色譜柱為 Alltima?HP C18 Column 250x4. 6mm 5um。
4. 根據(jù)權利要求I所述的用高效液相色譜法分離測定松柏醇和芥子醇含量的方法的 制備方法，其特征在于：梯度洗脫的具體液相條件見表1 : 表1梯度洗脫程序
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用高效液相色譜法分離檢測松柏醇和芥子醇含量的方法。打破了常規(guī)用高相氣相色譜測定松柏醇的方法，并且此方法可以同時檢測松柏醇和芥子醇。另外可以實現(xiàn)和酸類物質在同一種條件下測定的方法，使實驗數(shù)據(jù)更能說明問題。該方法采用C18柱，流動相為水和甲醇，體積流量為0.4-0.7mL/min，柱溫為25-30℃，分析時間為70min，檢測波長為275nm，進樣量為20uL，能夠有效的檢測分離松柏醇和芥子醇，并且峰形較好，能夠用來分離測定樣品中松柏醇和芥子醇。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-02, G01N30-74
【公開號】CN104535667
【申請?zhí)枴緾N201410605969
【發(fā)明人】蔡永萍, 李姝妹, 閆沖沖, 金青, 林毅
【申請人】安徽農(nóng)業(yè)大學
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年10月30日