一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中丁酸的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于食用菌培養(yǎng)液中有機酸的測定領域，特別涉及一種利用離子排阻色譜 柱檢測食用菌培養(yǎng)液中丁酸的方法。
【背景技術】
[0002] 有機酸作為生物生長過程中的代謝產(chǎn)物會不斷變化，食用菌生長過程中培養(yǎng)料內(nèi) 的有機酸逐漸積累導致pH下降，直接影響菌絲細胞的新陳代謝和整個生命活動，所以了解 菌絲有機酸的種類和變化，有利于了解其代謝機制，更好的調(diào)控培養(yǎng)條件使之更適合菌絲 的生長。
[0003] 目前分析有機酸的方法主要有：酸堿滴定法、氣相色譜法、薄層色譜法及高效液相 色譜法等。酸堿滴定法只能測定總酸量，且操作繁瑣；氣相色譜法需衍生步驟，誤差較大； 薄層色譜法定量精度差；而高效液相色譜法操作簡便，準確度高，重現(xiàn)性好，可同時定量多 種有機酸，已被廣泛用于各種食品和天然物中有機酸的測定。但不同的柱子針對不同的物 質(zhì)分離所需的色譜條件不同，利用串聯(lián)離子排阻色譜柱（SH1011和KC-811，Shodex公司） 對食用菌培養(yǎng)液中有機酸的定性定量檢測尚未見報導。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液 中丁酸的方法，該方法簡單，耗時少，精密度高，重復性好，穩(wěn)定性好。
[0005] 本發(fā)明的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中丁酸的方法，包括：
[0006] (1)分別取草酸、檸檬酸、酒石酸、甲酸、丁酸標準品置于容量瓶中，加超純水定容 作儲備液；將儲備液稀釋配制不同濃度的混標，進樣分析，根據(jù)峰面積和有機酸含量繪制標 準曲線；
[0007] (2)選用SH1011柱和KC-811柱為分析柱，SH-G柱為保護柱，色譜條件為：流動 相4mmol/L高氯酸溶液，柱溫為60°C，流動相流速1.OmL/min，紫外可見檢測器檢測，波長 210nm；
[0008] (3)取待測食用菌斜面培養(yǎng)物，活化后打碎，接入到PDB液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)， 定期取樣，無紡布過濾菌絲，濾液離心后取上清液備用；
[0009] (4)分別取步驟⑶中的上清液lmL，濾膜過濾后上樣，上樣量10yL，采用和標準 品相同的條件重復檢測；根據(jù)樣品對應丁酸的峰面積和標準曲線，計算樣品中丁酸的含量。
[0010] 所述步驟（1)中的不同濃度具體為草酸200yg/mL，檸檬酸200yg/mL，酒石酸 200yg/mL，甲酸 1yL/mL，丁酸 1yL/mL。
[0011] 所述步驟（1)中丁酸在精密度實驗中的RSD為0. 33%，在重復性實驗中的RSD為 0. 44 %，在穩(wěn)定性實驗中的RSD為0. 43 %，標樣回收率為95. 8 %。
[0012] 所述步驟⑵中的SH1011柱的參數(shù)為：8.0mmX3000mm，6ym;KC-811柱的參數(shù) 為：8.OmmX3000mm，6ym;SH_G柱的參數(shù)為：6.OmmX50mm，10ym。
[0013] 三個色譜柱串聯(lián)使用，串聯(lián)先后順序為SH-G柱串聯(lián)SH1011柱串聯(lián)KC-811柱。
[0014] 所述步驟（3)中的食用菌為杏鮑菇XH、金針菇G1或金針菇F29。
[0015] 所述步驟（4)中的打碎具體為高低檔間隔打碎50s，直徑0. 6cm且菌齡相同的菌塊 個數(shù)與無菌水容積比為2. 5:1。
[0016] 所述步驟（4)中的濾膜孔徑為0. 22ym。
[0017] 所述步驟⑷中所取的樣品菌絲生長要正常，平行間的差別盡量小。
[0018] 通過利用離子排阻色譜柱（SH1011和KC-811串聯(lián)，Shodex公司）對食用菌培養(yǎng) 液中的丁酸定性定量的測定方法，該方法精密度高，重復性好，穩(wěn)定性強，可快速高效的檢 測出食用菌培養(yǎng)液中丁酸的含量。對特定種類真菌菌絲培養(yǎng)液的丁酸的標準曲線一經(jīng)建立 可重復使用，且樣品前處理簡單易行，需時少。
[0019] 本發(fā)明通過利用離子排阻色譜柱（SH1011和KC-811串聯(lián)，Shodex公司）對食用 菌培養(yǎng)液中的丁酸定性定量的測定方法，樣品前處理簡單。檢測系統(tǒng)一經(jīng)確定可對相應培 養(yǎng)模式或生長環(huán)境中的真菌菌絲培養(yǎng)液中的丁酸進行長期、穩(wěn)定的監(jiān)測。
[0020] 有益效果
[0021] (1)本發(fā)明的方法簡單，用時少，樣品前處理簡單；待測種類真菌的菌絲培養(yǎng)液離 心取上清，0. 22ym濾膜過濾即可上樣；
[0022] (2)本發(fā)明的方法精密度高，重復性好，穩(wěn)定性強，丁酸的RSD都小于5% ;
[0023] (3)本發(fā)明檢測系統(tǒng)一經(jīng)確定可對相應培養(yǎng)模式或生長環(huán)境中的真菌菌絲培養(yǎng)液 中的丁酸進行長期、穩(wěn)定的監(jiān)測。
【附圖說明】
[0024] 圖1為5種有機酸標準品混標的液相圖譜；其中，1為草酸；2為檸檬酸；3為酒石 酸；4為甲酸；5為丁酸。
[0025] 圖2為丁酸標準品圖譜；
[0026] 圖3為樣品中金針菇G1發(fā)酵液樣品中丁酸的圖譜；其中，1為丁酸。
【具體實施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領域技術人 員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。
[0028] 實施例1
[0029] 確定金針菇G1，金針菇F29,杏鮑菇XH菌絲搖瓶培養(yǎng)培養(yǎng)液中丁酸的含量：
[0030] (1)繪制標準曲線
[0031] 分別準確稱取l〇mg草酸，檸檬酸，酒石酸標準品，吸取甲酸，丁酸標準品50yL置 于10mL容量瓶中，加超純水定容作儲備液。將儲備液稀釋配制不同濃度的混標，進樣分析， 根據(jù)峰面積和有機酸含量繪制標準曲線。結(jié)果如表1。
[0032] 表1標準曲線、相關系數(shù)和線性范圍
[0033]
【主權(quán)項】
1. 一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法，包括： (1) 分別取草酸、巧樣酸、酒石酸、甲酸、了酸標準品置于容量瓶中，加超純水定容作儲 備液；將儲備液稀釋配制不同濃度的混標，進樣分析，根據(jù)峰面積和有機酸含量繪制標準曲 線； (2) 選用甜1011柱和KC-811柱為分析柱，SH-G柱為保護柱，色譜條件為；流動相 4mmol/L高氯酸溶液，柱溫為60°C，流動相流速1. OmL/min，紫外可見檢測器檢測，波長 210nm ; (3) 取待測食用菌斜面培養(yǎng)物，活化后打碎，接入到PDB液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)，定期 取樣，無紡布過濾菌絲，濾液離屯、后取上清液備用； (4) 分別取步驟（3)中的上清液山以濾膜過濾后上樣，上樣量10 ^以采用和標準品相 同的條件重復檢測；根據(jù)樣品對應了酸的峰面積和標準曲線，計算樣品中了酸的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法， 其特征在于；所述步驟（1)中的不同濃度具體為草酸200 yg/mU巧樣酸200 yg/mU酒石酸 200 y g/mL，甲酸 1 y L/mL，了酸 1 y L/血。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法， 其特征在于；所述步驟（1)中了酸在精密度實驗中的RSD為0. 33%，在重復性實驗中的RSD 為0. 44 %，在穩(wěn)定性實驗中的RSD為0. 43 %，標樣回收率為95. 8 %。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法， 其特征在于；所述步驟（2)中的甜1011柱的參數(shù)為；8. 0mmX3000mm，6 ym ;KC-811柱的參 數(shù)為；8. OmmX 3000mm，6 y m ;甜-G 柱的參數(shù)為；6. OmmX 50mm，10 y m。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法， 其特征在于；S個色譜柱串聯(lián)使用，串聯(lián)先后順序為甜-G柱串聯(lián)甜1011柱串聯(lián)KC-811柱。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法， 其特征在于；所述步驟（3)中的食用菌為杏鮑茹XH、金針茹G1或金針茹巧9。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法， 其特征在于；所述步驟（4)中的打碎具體為高低檔間隔打碎50s，直徑0.6cm且菌齡相同的 菌塊個數(shù)與無菌水容積比為2. 5:1。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中了酸的方法， 其特征在于；所述步驟（4)中的濾膜孔徑為0. 22 ym。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養(yǎng)液中丁酸的方法，包括：(1)配制標準品母液，梯度稀釋，繪制標準曲線；(2)調(diào)整色譜條件；(3)PDB搖瓶培養(yǎng)食用菌，過濾離心后取上清液待用；(4)根據(jù)標準品的方法檢測培養(yǎng)基質(zhì)和樣品中丁酸的含量。本發(fā)明的方法簡單，有很好的精密度和穩(wěn)定性，能快速準確的檢測出食用菌發(fā)酵液中丁酸的含量，一經(jīng)檢測系統(tǒng)確定可對相應培養(yǎng)模式或生長環(huán)境中的食用菌培養(yǎng)液中的丁酸進行長期、穩(wěn)定的監(jiān)測。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-02
【公開號】CN104535674
【申請?zhí)枴緾N201410782338
【發(fā)明人】汪虹, 曹暉, 王言, 陳明杰, 唐慶九, 余昌霞
【申請人】上海市農(nóng)業(yè)科學院
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月16日