一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的lc-ms/ms測定方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法，更具體地說是采 用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)定性定量測定蔬菜和水果中殘留的四氯蟲酰胺含量的方 法，屬于農(nóng)藥殘留量的測定技術領域。
【背景技術】
[0002] 雙酰胺類殺蟲劑是近年來全球熱門的殺蟲劑產(chǎn)品，可廣泛應用于水稻、蔬菜、棉花 等作物的害蟲控制，具有低毒、環(huán)境安全、高活性等優(yōu)點，包括氯蟲苯甲酰胺、氰蟲酰胺、氟 蟲雙酰胺等品種，四氯蟲酰胺（SYP-9080)是由中化集團下屬沈陽化工研究院研發(fā)、中化農(nóng) 化有限公司經(jīng)營的新產(chǎn)品，我國首個具有自主知識產(chǎn)權的雙酰胺類殺蟲劑，已獲得國家農(nóng) 業(yè)部的臨時登記。
[0003] 四氯蟲酰胺（SYP-9080)屬于魚尼丁受體激活劑類殺蟲劑，其通過與害蟲體內(nèi)魚 尼丁受體結合，打開鈣離子通道，使儲存在細胞內(nèi)的鈣離子持續(xù)釋放到肌漿中，鈣離子和肌 漿中基質(zhì)蛋白結合，引起肌肉持續(xù)收縮。昆蟲體癥狀表現(xiàn)為抽搐、拒食，最終死亡。四氯蟲 酰胺為低毒、廣譜殺蟲劑，對鱗翅目害蟲均具有很好的活性。防治對象包括稻縱卷葉螟、二 化螟、小菜蛾、甜菜夜蛾、玉米螟、甘蔗螟、小卷蛾、食心蟲等。
[0004] 隨著四氯蟲酰胺的登記、推廣和使用，有關四氯蟲酰胺殘留消解動態(tài)及最終殘留 量等環(huán)境行為的研究勢必增加，同時，作為我國主要出口市場的歐盟、日本等國家規(guī)定若田 間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記，沒有制定相應的殘留限量標準時，出口至其國家的食品農(nóng) 產(chǎn)品包括畜禽肉等動物源性食品中殘留限量均實行0. 〇lmg/L的"一律標準"。
[0005] 迄今為止，未見國內(nèi)外有關于食品農(nóng)產(chǎn)品中四氯蟲酰胺殘留量檢測方法的報道， 使用LC-MS/MS測定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點，因此建立簡 便、快速、準確、耐用、能準確定性和定量分析蔬菜和水果中四氯蟲酰胺殘留量的LC-MS/MS 檢測方法具有重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法。
[0007] 為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術方案是：一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的 LC-MS/MS測定方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取樣品于具塞離心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取lmin，加入氯 化納或乙fe納中的一種和無水硫fe緩，振湯后尚心。
[0009] (2)凈化 移取樣品提取液上清液于離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩離心，過膜 后，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)檢測；
[0010] ⑶標準工作溶液的配制 將不含四氯蟲酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 液，用空白提取凈化液配制成至少3個濃度的四氯蟲酰胺系列混合標準工作液；
[0011] ⑷液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS)測定 將步驟（3)中的各濃度梯度的標準工作液進行LC-MS/MS測定，以標準工作液的色譜 峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線；在相同條件下將步驟（2)中凈化 后的樣品液注入LC-MS/MS進行測定，測得樣品液中四氯蟲酰胺的色譜峰面積，代入標準曲 線，得到樣品液中四氯蟲酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到樣品中四 氯蟲酰胺殘留量。
[0012] 步驟（1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟（1)中采用乙腈提取時加入氯化鈉鹽析，采用含1 %乙酸的乙腈溶液提取時 加入乙酸鈉鹽析；含水量較少的樣品鹽析時需加入一定量的水。
[0014] 步驟（2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無水硫酸鎂、C18和PSA組成，每體積提取液中 無水硫酸鎂、C18和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟⑷中液相色譜的流動相為：含5mmol/L乙酸銨的水溶液和乙腈，流速 0. 2-0. 4mL/min，進樣量 5iiL。
[0016] 步驟（4)中液相色譜使用梯度洗脫的方法，梯度洗脫程序為：
【主權項】
1. 一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法，其特征在于，所述方法包括以下 步驟： (1) 提取 稱取蔬菜和水果樣品于具塞離心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取 Imin，加入氣化納或乙酸納中的一種和無水硫酸緩振湯后尚心； (2) 凈化 移取樣品提取液上清液于離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩離心，過膜 后，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)檢測； (3) 標準工作溶液的配制 將不含四氯蟲酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 液，用空白提取凈化液配制成至少3個濃度的四氯蟲酰胺系列混合標準工作液； (4) 測定和結果計算 將步驟（3)中的各濃度梯度的標準工作液進行LC-MS/MS測定，以標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質(zhì)標準工作曲線；在相同條件下將步驟（2)中凈 化后的樣品液注入LC-MS/MS進行測定，測得樣品液中四氯蟲酰胺的色譜峰面積，代入基質(zhì) 標準曲線，得到樣品液中四氯蟲酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到樣 品中四氯蟲酰胺殘留量。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法，其特征在 于，步驟（1)中蔬菜和水果樣品若為脫水樣品，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤。
3. 根據(jù)權利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法，其特征在 于，步驟（1)中采用乙腈提取時需加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時需加 入乙酸鈉鹽析。
4. 根據(jù)權利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法，其特征在 于，步驟（2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無水硫酸鎂、C 18和PSA組成，每體積提取液中無水硫 酸鎂、C18和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
5. 根據(jù)權利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法，其特征在 于，步驟（4)中LC-MS/MS的液相色譜分析條件為：填料為C 18的色譜柱，柱溫為30°C ;進樣 體積為5 μ L· ;流動相為：含5mmol/L乙酸銨的水溶液和乙腈，梯度洗脫；梯度洗脫程序為:
質(zhì)譜條件為：電噴霧質(zhì)譜檢測；電噴霧電壓為-3500至-4500V ;霧化氣壓力為 275. 9kPa ;干燥氣為氮氣；干燥氣溫度為350°C ;干燥氣流速為10. OL/min ;多反應監(jiān)測 (MRM)負離子掃描模式；四氯蟲酰胺的母離子為535. 3?536. 3,子離子分別為499. 2? 502. 2 和 201. 4 ?202. 4。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測定方法，用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取樣品中殘留的四氯蟲酰胺，提取液經(jīng)乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷鍵合相（C18）基質(zhì)分散凈化后，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測，采用不含待測農(nóng)藥的空白基質(zhì)溶液建立校正的標準曲線，外標法定量。本方法平均回收率為88.3%～92.1%，平均相對標準偏差（RSD）為3.6%～5.3%，檢出限低于0.73μg/kg，具有操作簡便、快速、靈敏度高、重復性好、定性定量準確的優(yōu)點。能滿足0.01mg/kg殘留限量的“一律標準”技術要求，為保障我國人民食品安全、對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術支撐。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104535692
【申請?zhí)枴緾N201510026280
【發(fā)明人】崔淑華, 程剛, 劉潤珠, 趙峰
【申請人】山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2015年1月19日