一種大葉千斤拔的質(zhì)量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥的質(zhì)量檢測方法，具體設(shè)及一種大葉千斤拔的質(zhì)量檢測方法。
【背景技術(shù)】
[000引大葉千斤拔為蝶形花科千斤拔屬大葉千斤拔Flemingia macrophylla(Willd.) Prain.的干燥根，為云南、湖南、廣西、廣東等省的常用中藥，其中湖南、廣西地方標(biāo)準(zhǔn)記載 有千斤拔的原植物大葉千斤拔的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有藥材性狀描述及顯微特征記錄，該對開發(fā)新 藥有很大程度的影響。
[0003] 大葉千斤拔屬植物主要含有黃酬、祗、醬類等成分，其中W黃酬類物質(zhì)為主，大部 分是異黃酬，而其中更是W異戊締基取代的異黃酬類化合物占大多數(shù)。
[0004] 近年來，隨著研究的深入大葉千斤拔藥材越來越多應(yīng)用于臨床的各種制劑，其表 現(xiàn)很強的藥理活性，主要有抗炎止痛，降血糖，抗癌，促骨髓細胞生成作用，免疫調(diào)節(jié)作用， 抗追疾，抗菌，收縮子宮平滑肌等方面。
[0005] 大葉千斤拔藥材在作為治療婦科疾病藥物中原藥材應(yīng)用已廣泛推廣，并投入工業(yè) 生產(chǎn)多年。申請人的主導(dǎo)品種婦科千金片中的君藥就W大葉千斤拔入藥，效果顯著，產(chǎn)品受 到廣泛消費者的親睞。
[0006] 大葉千斤拔盡管藥用歷史悠久，臨床應(yīng)用廣泛，但一直W來對其有效成分缺乏系 統(tǒng)研究，其質(zhì)量缺乏有效的控制標(biāo)準(zhǔn)，阻礙了大葉千斤拔的深入開發(fā)利用。
[0007] 現(xiàn)有文獻中對大葉千斤拔的研究報道不多，現(xiàn)有文獻中報道了染料木巧、染料木 素，在大葉千斤拔中是活性較強的黃酬類化合物。
[000引《染料木巧對FFAs誘導(dǎo)的化pG2細胞膜島素抵抗的影響》，中西醫(yī)結(jié)合研究2010年 8月底2卷第4期，報道了，染料木巧具有改善膜島素抵抗的作用等藥理活性。
[0009] 《燃料木素的藥理作用》，藥學(xué)與臨床研究2010.化n ; 18(3)，報道了，染料木素能顯 著降低去卵巢大鼠總膽固醇及肝膽固醇的含量，并能有效防治慢性缺氧性動脈高壓，并報 道染料木素具有較強的氧化應(yīng)急損傷保護作用等藥理活性。
[0010] 因此，對大葉千斤拔的深入開發(fā)利用，尋找簡便、高效的質(zhì)量檢測方法，提高其入 藥的藥效，提高藥品質(zhì)量的可控性，降低成本是申請人要解決的一大難題。
[0011] 有關(guān)千斤拔質(zhì)量檢測方法的報道如下：
[0012] 《=種千斤拔的化學(xué)成分預(yù)分析和薄層鑒定》，西南民族大學(xué)學(xué)報.自然科學(xué)報公 開了薄層色譜分析方法，取樣品粉末（過3號篩）2g，加50mL甲醇，超聲30min，過濾，將濾 液揮干，殘渣加ImL甲醇溶解，作為供試品。W染料木素、5,7,2'，4'-四哲基異黃酬、3,5， 7, 3'，5' -五哲基-4' -甲氧基黃燒的甲醇溶液作為對照品，照2010版《中國藥典》薄層色譜 法（附錄VI B)實驗.吸取適量供試品溶液，分別點于同一娃膠G薄層板上，W氯仿-甲醇 (9:1)為展開劑，展開前飽和15min，之后展開，取出，驚干，噴10%硫酸己醇溶液，105°C加 熱2-3min。從文中圖譜顯示，大葉千斤拔分離度較低。
[001引 CN201410015559. UCN103760263A)提供了一種蔓性千斤拔的質(zhì)量檢測方法，其中 供試品溶液的制備方法包括W下步驟：取蔓性千斤拔藥材粉末（過四號篩）約2g，精密稱 定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mU密塞，稱定重量，加熱回流1小時，冷卻，再稱定重 量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25mU蒸干，殘渣加20%甲醇溶液 10血使其溶解，加在聚酷胺柱化0-80目，5g，內(nèi)徑1. 5cm)上，W 80%甲醇溶液120血洗脫， 收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇適量使其溶解，轉(zhuǎn)移至10血容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度， 超聲處理（功率250W，頻率50曲Z) 15分鐘，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；供試品溶液 的含量測定；C18色譜柱；250mmX4. 6mm，5 ym ;流動相：己膳（A)-0. 2%磯酸溶液炬）梯度 洗脫，見下表，流速1. 0血/min,檢測波長為258皿，柱溫30°C，進樣量10 y 1。
[0014]
【主權(quán)項】
1. 一種大葉千斤拔的質(zhì)量檢測方法，該方法包括鑒別和含量測定兩個部分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述鑒別包括以下步驟：供試品 溶液的制備、對照藥材溶液的制備和檢測。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述含量測定方法包括：供試品 溶液的制備、對照品溶液的制備、色譜條件和檢測。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述供試品溶液的制備包括 以下步驟：大葉千斤拔藥材粉末4. 0-6.Og，加入100-200mL體積比為85 :15的乙醇和水的 混合物，在30°C下60Hz超聲提取30-50min，冷卻后水浴蒸干，加10-30mL蒸餾水溶解，然后 乙酸乙酯萃取3次，前兩次100mL，后一次50ml，放置20min，取上層合并蒸干，加10mL色譜 純甲醇充分溶解，濾過，取濾液，即得。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述供試品溶液的制備包括 以下步驟：大葉千斤拔藥材粉末4.0-6.(^，加入100-2001^濃度為95%的乙醇，于70°〇回 流提取lh，過濾，回收乙醇，得浸膏，浸膏加入10-30mL水溶解，加入200mL乙酸乙酯萃取，取 上層清液蒸干，蒸干后的固體物用甲醇定容至10mL，搖勻得供試品溶液。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述供試品溶液的制備包 括以下步驟：大葉千斤拔藥材粉末4. 0-6. 0g，加入100-200mL濃度為95%的乙醇，于水浴中 80°C回流提取lh，過濾，濾液加入10-30mL水，進行固相萃取，先后以50mL水、50mL體積比 為60 :40-80 :20的甲醇和水的混合物為洗脫劑，洗脫液濃縮蒸干，蒸干后的固體物用甲醇 定容至10mL量瓶中，搖勻得供試品溶液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述鑒別包括以下步 驟： 供試品溶液的制備：采用權(quán)利要求4-6任一項所述的供試品溶液的制備方法； 對照藥材溶液的制備：取購買的大葉千斤拔藥材粉末1. 0-2. 0g，加20-30mL甲醇，熱回 流提取lh-3h，過濾，蒸干，加l-3mL甲醇溶解，作為對照藥材溶液； 所述檢測方法：取上述供試品溶液及對照藥材溶液各15yL，分別點于同一硅膠G板 上，以體積比為2 :1的石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液適 量，在105°C加熱至斑點清晰，日光下檢視，供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同 顏色的斑點。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述色譜條件為：色譜柱： Kromasil100-5C18柱（250mmX4. 6mm);流動相：乙腈和0? 1 %磷酸水溶液；梯度洗脫，流 速為lmL/min，柱溫：35°C;進樣量：20yL。 所述流動相按照梯度洗脫梯度為： 表1梯度洗脫程序
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9. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述含量測定方法包 括以下步驟： 1) 供試品溶液的制備：選用權(quán)利要求4-6任一項所述的供試品溶液的制備方法； 2) 對照品溶液的制備：精密稱取染料木苷和染料木素對照品各7.lmg，置10mL量瓶 中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成含染料木苷和染料木素〇. 71mg/mL和0. 71mg/mL 的混合對照品貯備溶液，分別吸取0. 15mL，0. 3mL，0. 6mL，1. 2mL，2. 4mL于5mL的容量瓶中 定容，配制成濃度分別為 21. 3yg/mL，42. 6yg/m，85. 2yg/mL，170. 4yg/mL，340. 8yg/mL， 710. 0yg/mL梯度試液； 3)色譜條件：所述色譜條件為：色譜柱：Kromasil100-5C18柱（250mmX4.6mm);流動 相：乙腈-0. 1%磷酸水溶液；梯度洗脫，流速為lmL/min，柱溫：35°C;進樣量：20yL; 所述流動相按照梯度洗脫梯度為： 表1梯度洗脫程序
4) 測定方法：取大葉千斤拔樣品，將等量的對照品溶液和供試品溶液分別稀釋25倍， 微孔濾膜過濾后，按照上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20yL，注 入液相色譜儀，記錄60min內(nèi)的色譜峰。
10. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的含量測定方法，其特征在于，所述染料木苷含量為： 1. 087-1. 247mg/g，染料木素含量為：0? 481-0. 514mg/g。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種大葉千斤拔的質(zhì)量檢測方法，該方法包括鑒別和含量測定兩個部分。本發(fā)明提供了一種常用中藥材大葉千斤拔的質(zhì)量檢測方法。相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的方法穩(wěn)定性好，靈敏度高，能更簡便、更直觀的鑒定原藥材，為大葉千斤拔的定性定量檢測提供依據(jù)，而且可以更好的保障以大葉千斤拔入藥的藥物質(zhì)量和療效，更好的利用大葉千斤拔的藥材資源。
【IPC分類】G01N30-02, G01N30-90, G01N30-06
【公開號】CN104569192
【申請?zhí)枴緾N201410826910
【發(fā)明人】龔云, 張鵬, 林鵬飛, 彭開鋒
【申請人】株洲千金藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月25日