一種同時檢測幾種植物油中α-生育酚和角鯊烯的含量測定方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥用輔料與食品領域，具體地說，涉及一種同時檢測植物油中a-生 育酷和角蠻帰兩種成分的含量測定方法，植物油包括大豆油、特級初棒橄攬油、茶油、葵花 巧油。
【背景技術】
[0002] 大豆油、茶油、橄攬油W及葵花巧油，均含有大量的不飽和脂肪酸、微量元素、維生 素、角蠻帰、黃麗類物質和多酷化合物，營養(yǎng)豐富，具有多種醫(yī)療保健功效，大豆油和橄攬油 已應用于脂肪乳制劑。該四種功能性植物油中大量的不飽和脂肪酸，有學者已做過大量的 研究，進行脂肪酸的定性和定量的檢測，而生育酷和角蠻帰的含量測定，雖有文獻報道，但 是，一般是采用氣相色譜法及GC-MS內標法分別單獨測定或者同時測定兩種成分的 含量。而本專利發(fā)明并建立了簡便、快速、準確可靠的一種HPLC法，同時檢測幾種植物油中 a-生育酷和角蠻帰兩種成分的含量測定方法，實用性強，對植物油中活性成分的研究、篩 選可W提供數(shù)據(jù)支持和參考。
[0003] 參考文獻；[1]耿樹香，寧德魯，張艷麗，陳海云，李勇杰.不同品種及成熟度橄 攬油中角蠻帰的檢測分析[J](英文）.Agri州hural Science&Technology 20131482? 1485. [2]張東生，薛雅琳，金青哲，王興國，張東，鐘誠.油茶巧油中角蠻帰含量的測定[J] 中國油脂.2013年年第卷第期.85-88. [3]毛多斌，賈春曉，孫曉麗，楊公明.幾種功能性植 物油中角蠻帰和維生素E分析[J].中國糧油學報.2007年3月第22卷第2期.79-82.

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明提供一種含量測定方法同時檢測四種植物油（大豆油、特級初棒橄攬油、 茶油、葵花巧油）中a-生育酷和角蠻帰的含量，該方法采用高效液相色譜分離技術，供試 品無需進行皂化處理，直接用溶劑溶解后在同一種色譜條件下同時測定a -生育酷和角蠻 帰兩種成分的含量，為該幾種植物油成分的分析研究提供參考數(shù)據(jù)，是一種更簡便、快速、 準確的質量分析方法，實用性強，也說明了該含量測定方法的科學性、先進性及測定結果的 準確可靠性。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：
[0006] 一種同時檢測幾種植物油中a-生育酷和角蠻帰的含量測定方法，包括如下步 驟：
[0007] (1)供試品溶液的制備：
[000引取供試品（大豆油、茶油、特級初棒橄攬油、葵花巧油）各1. 5g，精密稱定，置25ml 量瓶中，分別加甲醇-異丙醇-正已焼（體積比15:65:20)溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為 供試品溶液；
[0009] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量測定：
[0010] 高效液相色譜實驗條件如下：色譜柱為Ci8色譜柱；流動相系統(tǒng)；W甲醇-己膳 (70:30)為流動相A，W甲醇-異丙醇-正已焼（體積比15:65:20)為流動相B;洗脫梯度： 0-25min ： 100 % A ；25-27min ：!00% -30% A ；27-37min ：30% A ；37-39min ：30% -100% A ； 39-50min ;100% A ;洗脫時間；50min ;二極管陣列檢測器檢測波長；210皿和285皿；流速： 1. 2ml ?1. 6ml/min ;柱溫；32°C?38°C ;樣品進樣量；20 y 1 ;
[0011] 對照品溶液的制備；取a-生育酷對照品，制成每1ml分別含3 yg、6yg、12 yg、 30 y g、60 y g的對照品溶液；
[0012] 取角蠻帰對照品，制成每1ml分別含60y g、120y g、240y g、360y g、600y g的對 照品溶液；
[0013] 高效液相色譜測定法；不同濃度的對照品溶液分別W 20 y 1進樣，測得210nm波長 下角蠻帰的峰面積和285nm波長下a -生育酷的峰面積，；W所得各標準對照品峰面積為縱 坐標，各對應標準對照品濃度為橫坐標分別做標準曲線，分別計算a -生育酷和角蠻帰的 線性回歸方程；然后對四種植物油的供試品溶液進行高效液相色譜測定，得到210nm波長 下角蠻帰的峰面積和285nm波長下a -生育酷的峰面積，根據(jù)各自的標準曲線計算供試品 中a-生育酷和角蠻帰的含量，并結合供試品的質量，經(jīng)計算得到a-生育酷的含量和角蠻 帰的含量，結果見表6。
[0014] 在上述含量測定方法中，所述步驟（2)的色譜條件中流動相系統(tǒng)；W甲醇-己膳 (70 ;30)為流動相A，W甲醇-異丙醇-正已焼（15:65:20)為流動相B ;洗脫梯度；0-25min : 100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min : 100% A ;洗脫時間；50min ;二極管陣列檢測器檢測波長；210皿和285皿；樣品進樣量： 20U 1 ；
[0015] 在上述含量測定方法中所述步驟（2)的色譜條件中流速為1. 4ml/min。
[0016] 在上述含量測定方法中所述步驟（2)的色譜條件中所用的色譜柱為；Agilent 肥-Ci8 (4. 6mmX 250mm，5 y m)。
[0017] 在上述含量測定方法中，所述步驟（2)的色譜條件中色譜柱溫為35°C。
[0018] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果；本發(fā)明利用一種高效液相色譜條件 同時對四種植物油中a -生育酷和角蠻帰的含量進行了測定，供試品溶液無需進行皂化處 理，直接溶解后經(jīng)高效液相色譜分離測定，產(chǎn)品的甘油H醋成分能洗脫流出，不殘留于色譜 柱中，故該檢測方法能準確的測定植物油中a-生育酷和角蠻帰兩種成分的含量，既可對 植物油該兩種活性成分進行分析研究，也可為原料質量標準的制訂提供參考，方法簡單，可 操作性強，重現(xiàn)性好，準確度高，是檢測植物油中a -生育酷和角蠻帰含量的有效方法。
【附圖說明】
[0019] 圖1為實施例6的210皿下的HPLC色譜圖；
[0020] 1角蠻帰對照品；2 a -生育酷對照品；3溶劑；4橄攬油；5葵花巧油；6大豆油；7 茶油。
[0021] 圖2為實施例6的285皿下的HPLC色譜圖。
[0022] 1溶劑；2 a -生育酷對照品；3橄攬油；4葵花巧油；5茶油；6大豆油。
【具體實施方式】
[0023] 實施例1
[0024] (1)供試品溶液的制備
[00巧]取供試品（特級初棒橄攬油）1.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇-異丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液；
[0026] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量測定
[0027] 高效液相色譜實驗條件如下；Ci8色譜柱（Agilent肥-Cig4. 6mmX 250mm，5 y m) ; W 甲醇-己膳（70:30)為流動相A, W甲醇-異丙醇-正已焼（15:65:20)為流動相B;洗脫梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脫時間；50min ;二極管陣列檢測器檢測波長；210nm和285nm ;流 速；1. 4ml/min ;柱溫；32°C ;樣品進樣量；20iil ;
[0028] a -生育酷和角蠻帰的含量測定方法如下：取a -生育酷對照品，制成每1ml分別 含 3 y g、6 y g、12 y g、30 y g、60 y g 的對照品溶液；
[0029] 取角蠻帰對照品，制成每1ml分別含60y g、120y g、240y g、360y g、600y g的對 照品溶液；
[0030] 高效液相色譜測定法；不同濃度的對照品溶液分別W 20 y 1進樣，測得210nm波長 下角蠻帰的峰面積和285nm波長下a -生育酷的峰面積，；W所得各標準對照品峰面積為縱 坐標，各對應標準對照品濃度為橫坐標分別做標準曲線，分別計算a -生育酷和角蠻帰的 線性回歸方程；然后對供試品溶液進行高效液相色譜測定，得到210nm波長下角蠻帰的峰 面積和285nm波長下a-生育酷的峰面積，根據(jù)各自的標準曲線計算供試品中a-生育酷 和角蠻帰的含量，并結合供試品的質量，經(jīng)計算得到a -生育酷的含量為0. 016%，角蠻帰 的含量為0. 32%。
[00引]實施例2
[0032] (1)供試品溶液的制備
[0033] 取供試品（特級初棒橄攬油）1. 5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇-異丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液；
[0034] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量測定
[003引 高效液相色譜實驗條件如下；Ci8色譜柱（Agilent肥-Cis4. 6mmX 250mm，Sum) 甲醇-己膳（70:30)為流動相A, W甲醇-異丙醇-正已焼（15:65:20)為流動相B;洗脫梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脫時間；50min ;二極管陣列檢測器檢測波長；210nm和285nm ;流 速；1. 4ml/min ;柱溫；38°C ;樣品進樣量；20iil ;
[0036] a -生育酷和角蠻帰的含量測定方法如下：取a -生育酷對照品，制成每1ml分別 含 3 y g、6 y g、12 y g、30 y g、60 y g 的對照品溶液；
[0037] 取角蠻帰對照品，制成每1ml分別含60 y g、120 y g、240 y g、360 y g、600 y g的對 照品溶液；
[003引高效液相色譜測定法；不同濃度的對照品溶液分別W 20 y 1進樣，測得210nm波長 下角蠻帰的峰面積和285nm波長下a -生育酷的峰面積，；W所得各標準對照品峰面積為縱 坐標，各對應標準對照品濃度為橫坐標分別做標準曲線，分別計算a -生育酷和角蠻帰的 線性回歸方程；然后對供試品溶液進行高效液相色譜測定，得到210nm波長下角蠻帰的峰 面積和285nm波長下a-生育酷的峰面積，根據(jù)各自的標準曲線計算供試品中a-生育酷 和角蠻帰的含量，并結合供試品的質量，經(jīng)計算得到a -生育酷的含量為0. 015%，角蠻帰 的含量為0. 35%。
[00測 實施例3
[0040] (1)供試品溶液的制備
[0041] 取供試品（特級初棒橄攬油）1.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇-異丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液；
[0042] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量測定
[004引 高效液相色譜實驗條件如下；Ci8色譜柱（Agilent肥-Cis4. 6mmX 250mm，Sum) 甲醇-己膳（70:30)為流動相A, W甲醇-異丙醇-正已焼（15:65:20)為流動相B;洗脫梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脫時間；50min ;二極管陣列檢測器檢測波長；210nm和285nm ;流 速；1. 2ml/min ;柱溫；35°C ;樣品進樣量；20iil ;
[0044] a -生育酷和角