一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥指紋圖譜領(lǐng)域，特別涉及一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 青風(fēng)藤為防己科植物青藤或毛青藤等的藤莖。6至7月割取藤莖，除去細(xì)莖枝葉， 曬干；或用水潤(rùn)透，切段，曬干。亦可秋冬采老藤，切段，曬干。曬干后的青風(fēng)藤呈長(zhǎng)圓柱形， 微彎曲，細(xì)莖彎繞成束，長(zhǎng)20至70厘米或更長(zhǎng)，直徑0. 5至2厘米。表面綠褐色至蹤褐色， 有細(xì)縱紋及皮孔。節(jié)稍膨大，有分枝痕。體輕，質(zhì)硬而脆，易折斷，斷面不平坦，灰黃色或淡 灰蹤色，皮部窄，木部射線放射狀排列；髓部小，淡黃白色或黃蹤色，氣微，味苦。W條均勻者 為佳。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中青風(fēng)藤含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)在中國(guó)藥典2010版中規(guī)定內(nèi)容如下：
[0004] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)；十八垸基娃焼鍵合娃膠為填充劑；W甲醇-磯酸鹽 緩沖液（0. 〇〇5mol/L磯酸氨二軸溶液，W 0. 〇〇5moI/L的磯酸二氨軸調(diào)節(jié)抑值至8. 0,再W 1 %H己胺調(diào)節(jié)抑值至9. 0)巧5 ;45)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為262皿。理論板數(shù)按青藤堿峰 計(jì)算應(yīng)不低于1500。
[000引對(duì)照品溶液的制備；精密稱取青藤堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶 液，即得。
[0006] 供試品溶液的制備；本品粉末（過(guò)H號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加人70%己醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率20曲Z) 20分鐘，放冷， 再稱定重量，用70 %己醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0007] 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液5 y 1，分別注入液相色譜儀，測(cè) 定，即得。本品按干燥品計(jì)算，含青藤堿咕化3〇4)不得少于0.50%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，該方法在控 制青風(fēng)藤的質(zhì)量，有效的指導(dǎo)臨床和生產(chǎn)中使用、保證用藥的有效、安全和可靠具有積極作 用。
[0009] 本發(fā)明的一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，包括：
[0010] (1)取青風(fēng)藤藥材粉碎成中粉，精密稱定，加入甲醇，超聲溶解，過(guò)濾并蒸干，殘?jiān)?用初始流動(dòng)相溶解并定容，濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；
[0011] (2)取木蘭花堿對(duì)照品、青藤堿對(duì)照品、四氨表小築堿對(duì)照品，精密稱定，分別加入 甲醇制成對(duì)照品溶液；
[0012] (3)分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀測(cè)定，即得青風(fēng) 藤指紋圖譜；其中，色譜條件為：色譜柱；Waters Xselect CSH C18柱；柱溫；3(TC ;檢測(cè)波 長(zhǎng)；280皿；記錄時(shí)間80min ;進(jìn)樣體積；10 y 1 ;流速；1ml ?mirTS流動(dòng)相：流動(dòng)相A為0. 1% 甲酸水，流動(dòng)相B為甲醇；梯度洗脫程序：從5% B開(kāi)始等度洗脫18min，再W線性洗脫的方 式經(jīng)7min達(dá)到8% B，W線性洗脫的方式經(jīng)35min達(dá)到20% B，W線性洗脫的方式經(jīng)25min 達(dá)到30% B。
[001引所述步驟（1)中的青風(fēng)藤中粉與己醇的比例為0. 05g:20ml。
[0014] 所述步驟（2)中的甲醇的體積百分?jǐn)?shù)為5%。
[0015] 所述步驟（2)中的對(duì)照品溶液具體為：每1ml各含木蘭花堿13化g、青藤堿80ng、 四氨表小築堿4ng的混合溶液。
[0016] 所述步驟（3)中的Waters Xselect CSH C18柱的規(guī)格為4. 6mmX 250mm，填料粒度 大小為5 ji m。
[0017] 所述步驟（3)中的青風(fēng)藤指紋圖譜中11個(gè)色譜峰被確定為共有色譜峰，通過(guò)與對(duì) 照品保留時(shí)間的比較，確定峰3為青藤堿，峰7為木蘭花堿，峰10為四氨表小築堿。
[0018] 有益效果
[0019] 本發(fā)明特對(duì)藥材指紋圖譜進(jìn)行了研究，建立了液相指紋圖譜測(cè)定條件，并進(jìn)行了 方法學(xué)考察，根據(jù)多批大生產(chǎn)樣品，制訂了青風(fēng)藤液相指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，在生產(chǎn)過(guò)程中可有效 的指導(dǎo)投料、規(guī)范生產(chǎn)操作，真正確保了臨床用藥的安全、有效、可靠，對(duì)所測(cè)得的指紋圖譜 的辨認(rèn)，采用國(guó)家藥典委員會(huì)提供的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，操作方便、快捷， W其得出的相似度結(jié)果，對(duì)藥材指紋圖譜進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)論較為客觀、準(zhǔn)確。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為10個(gè)批次青風(fēng)藤指紋圖譜；
[0021] 圖2為青風(fēng)藤標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；其中，3為青藤堿；7為木蘭花堿；10為四氨表小築 堿。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，該些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可W對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，該些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] 1、名稱、漢語(yǔ)拼音
[00幼名稱；青風(fēng)藤雙語(yǔ)拼音；Qin奸engteng
[0026] 2、供試品來(lái)源；由上海黃海制藥有限責(zé)任公司提供。
[0027] 3、供試品溶液的制備
[0028] 將青風(fēng)藤粉碎成中粉，稱取0. 05g，精密加入20ml甲醇，超聲溶解，過(guò)濾并蒸干，殘 渣用初始流動(dòng)相溶解并定容至10ml，濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得；
[0029] 4、參照物溶液的制備
[0030] 青風(fēng)藤主要有效成分為青藤堿（Sinomenine)、木蘭花堿、四氨表小築堿等，經(jīng)過(guò)試 驗(yàn)研究，選擇出峰時(shí)間穩(wěn)定且峰面積適中的青藤堿作為參照物，由中國(guó)生物制品檢定所提 供（批號(hào)；110774-200507,供含量測(cè)定用）。
[0031] 5、檢測(cè)方法的建立
[0032] 5. 1儀器、試劑和色譜條件
[0033] 儀器；Agilent 1200液相色譜；Agilent LC色譜工作站。
[0034] 試劑；己膳、甲醇為色譜純（Spectrum)，水為超純水，其余試劑均為分析純。
[00巧]色譜柱；Waters Xselect C甜 C18 (4. 6mmX 250mm，5 y m);測(cè)定波長(zhǎng)；254nm、 280nm、264nm、268nm ;柱溫；30°C ;流速；1ml ? mirfi;進(jìn)樣 lOy 1。
[0036] 5. 2流動(dòng)相的選擇
[0037] 經(jīng)比較、篩選，發(fā)現(xiàn)（A)0. 1%甲酸水-做甲醇系統(tǒng)W線性梯度洗脫，所得液相色 譜圖基線較平穩(wěn)、色譜峰峰形對(duì)稱、分離度較好，因此選擇0. 1 %甲酸水-甲醇系統(tǒng)為流動(dòng) 相。
[0038] 5. 3梯度洗脫程序的優(yōu)化
[0039] 經(jīng)系統(tǒng)摸索、優(yōu)化、現(xiàn)發(fā)現(xiàn)如下線性梯度洗脫程序既能較全面的檢出藥材中的 化學(xué)成分，又可使該些成分獲得較為理想的分離效果；洗脫程序?yàn)閺?% B開(kāi)始等度洗脫 18min，再W線性洗脫的方式經(jīng)7min達(dá)到8% B，W線性洗脫的方式經(jīng)35min達(dá)到20% B，W 線性洗脫的方式經(jīng)25min達(dá)到30% B，記錄時(shí)間為5?80min。
[0040] 5. 4最佳測(cè)定波長(zhǎng)的確定
[0041] 經(jīng)液相色譜一紫外光譜H維圖譜的比較分析，發(fā)現(xiàn)各個(gè)譜圖中，40min左右處色 譜峰和20min左右處色譜峰的峰高均為兩個(gè)主色譜峰；254nm下的譜圖各峰峰高均較低； 280nm下各色譜峰較平均，效果最好；264nm、268nm下的色譜圖中峰高兩極分化大，且色譜 峰數(shù)量不及280nm下的色譜圖，不能全面反映制劑的成分。綜合考慮色譜峰的數(shù)目、基線及 信號(hào)相應(yīng)強(qiáng)弱，確定280nm為制劑指紋圖譜的最佳檢測(cè)波長(zhǎng)。
[0042] 5. 5青風(fēng)藤液相色譜指紋圖譜中主要色譜峰的指認(rèn)
[0043] 根據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、UV譜對(duì)照，可指認(rèn)成品色譜圖中主要色譜峰：確定 S (峰3)為青藤堿，是青風(fēng)藤的主要有效成分；峰7為木蘭花堿，峰10為四氨表小築堿。在 該指紋圖譜測(cè)定條件下，所測(cè)得的藥材指紋圖譜能夠反映青風(fēng)藤的主要有效成分。
[0044] 指紋圖譜至少包含10個(gè)特征峰和1個(gè)參照峰，各特征峰相對(duì)于參照峰（巧的相對(duì) 保留時(shí)間的波動(dòng)范圍符合下表的規(guī)定。
[0045] 青風(fēng)藤標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相對(duì)保留時(shí)間波動(dòng)范圍
[0046]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，包括： (1) 取青風(fēng)藤藥材粉碎成中粉，精密稱定，加入甲醇，超聲溶解，過(guò)濾并蒸干，殘?jiān)贸?始流動(dòng)相溶解并定容，濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液； (2) 取木蘭花堿對(duì)照品、青藤堿對(duì)照品、四氫表小檗堿對(duì)照品，精密稱定，分別加入甲醇 制成對(duì)照品溶液； (3) 分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀測(cè)定，即得青風(fēng)藤指 紋圖譜；其中，色譜條件為：色譜柱:Waters Xselect CSH C18柱；柱溫：30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)： 280nm ;記錄時(shí)間80min ;進(jìn)樣體積：10 y 1 ;流速：lml ? min-1 ;流動(dòng)相：流動(dòng)相A為0. 1 %甲 酸水，流動(dòng)相B為甲醇；梯度洗脫程序：從5% B開(kāi)始等度洗脫18min，再以線性洗脫的方式 經(jīng)7min達(dá)到8% B，以線性洗脫的方式經(jīng)35min達(dá)到20% B，以線性洗脫的方式經(jīng)25min達(dá) 到 30% B。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（1) 中的青風(fēng)藤中粉與乙醇的比例為〇. 〇5g:20ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（2) 中的甲醇的體積百分?jǐn)?shù)為5%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（2) 中的對(duì)照品溶液具體為：每lml各含木蘭花堿130ng、青藤堿80ng、四氫表小檗堿4ng的混 合溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（3) 中的Waters Xselect CSH C18柱的規(guī)格為4. 6mmX 250mm，填料粒度大小為5 um。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（3) 中的青風(fēng)藤指紋圖譜中11個(gè)色譜峰被確定為共有色譜峰，通過(guò)與對(duì)照品保留時(shí)間的比較， 確定峰3為青藤堿，峰7為木蘭花堿，峰10為四氫表小檗堿。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種青風(fēng)藤指紋圖譜的測(cè)定方法，包括：(1)取青風(fēng)藤藥材粉碎成中粉，精密稱定，加入甲醇，超聲溶解，過(guò)濾并蒸干，殘?jiān)贸跏剂鲃?dòng)相溶解并定容，濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；(2)制備對(duì)照品溶液；(3)分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀測(cè)定，即得青風(fēng)藤指紋圖譜。本發(fā)明對(duì)于指導(dǎo)在臨床用藥及生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)于原料藥有效的投料指導(dǎo)、確保質(zhì)量的可靠具有積極作用；操作方便、快捷，以其得出的相似度結(jié)果，對(duì)中藥材青風(fēng)藤質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)論較為客觀、準(zhǔn)確。
【IPC分類】G01N30-02
【公開(kāi)號(hào)】CN104597152
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410852010
【發(fā)明人】張寧
【申請(qǐng)人】上?，F(xiàn)代中醫(yī)藥股份有限公司, 上海中醫(yī)藥大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年5月6日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日