氨芐青霉噻唑酸檢測(cè)試劑盒和檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于酶聯(lián)免疫試劑盒領(lǐng)域，具體涉及一種氨芐青霉噻唑酸檢測(cè)試劑盒和檢 測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 青霉素類抗生素具有殺菌活性強(qiáng)、毒副作用小等特點(diǎn)，在動(dòng)物飼養(yǎng)中應(yīng)用非常廣 泛，主要用于治療動(dòng)物疾病，部分產(chǎn)品同時(shí)具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用。然而，動(dòng)物性食品中 殘留的抗生素進(jìn)入人體后，具有一定的危害作用。一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物性食品中殘留的抗生素對(duì) 人并不表現(xiàn)為急性毒性作用。人們長(zhǎng)期攝入低劑量殘留抗生素的食品，隨著時(shí)間的推移，人 體內(nèi)殘留的抗生素逐漸蓄積，從而引起各種慢性毒性作用。某些過(guò)敏體質(zhì)的人在接觸殘留 的抗生素后也可引起過(guò)敏（變態(tài)）反應(yīng)。動(dòng)物性食品中的抗生素殘留對(duì)人體健康的影響廣 泛，會(huì)造成人體胃腸道菌群失調(diào)，導(dǎo)致機(jī)會(huì)性感染的可能性增加，還可表現(xiàn)為過(guò)敏、毒性作 用、細(xì)菌耐藥性、致畸、致突變和致癌作用等多個(gè)方面。
[0003] 氨芐青霉素為P-內(nèi)酰胺類藥物，其結(jié)構(gòu)中的0 -內(nèi)酰胺環(huán)不穩(wěn)定，在堿性環(huán)境及 3 _內(nèi)酰胺酶存在的情況下易發(fā)生斷裂，生成氨芐青霉噻唑酸，不易被相應(yīng)氨芐青霉素抗體 檢出。而用其他檢測(cè)方法，如薄層色譜法（TLC)和高效液相色譜法（HPLC)檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)結(jié) 果易受流動(dòng)相pH值、溫度和其他因素的影響而開環(huán)，導(dǎo)致TLC和HPLC方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn) 性不好，回收率不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種氨芐青霉噻唑酸檢測(cè)試劑 盒和檢測(cè)方法，具有快速高效、靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。
[0005] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0006] 一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCCN0. 10112,保藏日期為2014年12月5 日，保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng) 區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
[0007] -種由雜交瘤細(xì)胞株分泌的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體。
[0008] 氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體在制備檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒方面的應(yīng)用。
[0009] -種用于檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒，包括酶標(biāo)板、封閉液、氨芐青霉噻唑酸標(biāo) 準(zhǔn)品、抗體工作液、酶標(biāo)記抗體、顯色液及終止液；所述抗體工作液為所述雜交瘤細(xì)胞株分 泌的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體的稀釋液。
[0010] 一種用于檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒，還包括樣品稀釋液和濃縮洗滌液，所述 樣品稀釋液為PH6. 5-8. 5的磷酸鹽緩沖液，所述濃縮洗滌液為樣品稀釋液與吐溫20的混合 液。
[0011] 一種氨芐青霉噻唑酸試劑盒在檢測(cè)動(dòng)物性食品中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的有益效果為：采用特異性的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體，定量檢測(cè)青霉 素類藥物及其代謝產(chǎn)物在動(dòng)物性食品中的殘留；檢測(cè)結(jié)果快速、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、檢測(cè) 靈敏度高。
【附圖說(shuō)明】 圖1是本發(fā)明進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 本實(shí)驗(yàn)采用氨芐青霉噻唑酸偶聯(lián)蛋白作為免疫原，從而獲得氨芐青霉噻唑酸特異 性抗體。氨芐青霉素結(jié)構(gòu)如（式1)所示，青霉素代謝產(chǎn)物青霉噻唑酸的結(jié)構(gòu)如（式2)所 示，氨芐青霉噻唑酸結(jié)構(gòu)式為（式3)所示。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCC NO. 10112。
2. -種由權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株分泌的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的單克隆抗體在制備檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒方面的應(yīng) 用。
4. 一種用于檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒，其特征在于：包括酶標(biāo)板、封閉液、氨芐青 霉噻唑酸標(biāo)準(zhǔn)品、抗體工作液、酶標(biāo)記抗體、顯色液及終止液；所述抗體工作液為如權(quán)利要 求1所述的雜交瘤細(xì)胞株分泌的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體的稀釋液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用于檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒，其特征在于：還包 括樣品稀釋液和濃縮洗滌液，所述樣品稀釋液為PH6. 5?8. 5的磷酸鹽緩沖液，所述濃縮洗 滌液為樣品稀釋液與吐溫20的混合液。
6. -種利用權(quán)利要求4-5任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒在檢測(cè)動(dòng) 物性食品中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種雜交瘤細(xì)胞株、雜交瘤細(xì)胞株分泌的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體和單克隆抗體在制備檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒方面的應(yīng)用。一種用于檢測(cè)氨芐青霉噻唑酸的試劑盒，包括酶標(biāo)板、封閉液、氨芐青霉噻唑酸標(biāo)準(zhǔn)品、抗體工作液、酶標(biāo)記抗體、顯色液及終止液；所述抗體工作液為所述雜交瘤細(xì)胞株分泌的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體的稀釋液。本發(fā)明還涉及一種雜交瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞分泌的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體。本發(fā)明的有益效果為：采用特異性的氨芐青霉噻唑酸單克隆抗體，定量檢測(cè)部分青霉素類藥物及其代謝產(chǎn)物在動(dòng)物性食品中的殘留；檢測(cè)結(jié)果快速、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、檢測(cè)靈敏度高。CGMCC NO.1011220141205
【IPC分類】G01N33-577
【公開號(hào)】CN104614529
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510018846
【發(fā)明人】陸彥, 吳國(guó)娟, 劉雨琦, 高琦, 王晶, 趙紅玉
【申請(qǐng)人】北京農(nóng)學(xué)院, 陸彥
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年1月14日