蘭索拉唑中蘭索氯化物的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥品檢測，具體是蘭索拉唑中基因毒性雜質(zhì)檢測，更具體是蘭索拉唑 中蘭索氯化物的測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 基因毒性雜質(zhì)是在以DNA反應(yīng)物質(zhì)為主要研宄對像的體內(nèi)體外試驗(yàn)中，如果發(fā)現(xiàn) 它們對DNA有替在的破壞性，那可稱之為基因毒性。根據(jù)目前研宄實(shí)踐，具有體內(nèi)遺傳毒性 的化合物在任何暴露劑量下均有可能對DNA產(chǎn)生損傷，而這種損傷有可能引發(fā)腫瘤。
[0003] 目前，歐美國家對基因毒性雜質(zhì)控制較為嚴(yán)格，對所有可能含有基因毒性雜質(zhì)的 藥品，均要求檢測其基因毒性雜質(zhì)的含量，并發(fā)布了《基因毒性雜質(zhì)限度指南》。根據(jù)EM 《基因毒性雜質(zhì)限度指南》(2006年）規(guī)定，2-氯甲基-3-甲基-4-(2, 2, 2-三氟乙氧基）吡 啶鹽酸鹽（又名蘭索氯化物）為基因毒性雜質(zhì)，應(yīng)對其在蘭索拉唑中的含量進(jìn)行嚴(yán)格的控 制。按閾值法來計算，TTC(threshold of toxicological concern,毒理學(xué)關(guān)注閾值）為 1. 5 μ g/d，蘭索拉唑最大日用劑量為180mg/d，其控制限度為不得過8ppm (限度=TTC/最大 日用劑量）。
[0004] 而目前蘭索拉唑藥品是進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測。如"用加校正因子的自身對照法檢測 蘭索拉唑的有關(guān)物質(zhì)的含量"（譚宏宇，高麗，《黑龍江醫(yī)藥》2012年第6期）。有關(guān)物質(zhì)的 檢測方法的靈敏度不高，檢測限約為700ppm，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到《基因毒性雜質(zhì)限度指南》中對蘭 索拉唑中基因毒性物質(zhì)的控制要求。
[0005] 目前尚未公開有專門用于蘭索拉唑中蘭索氯化物的檢測方法，所以迫切需要開發(fā) 新的方法，專門用于蘭索拉唑中蘭索氯化物的含量測定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決上述問題，滿足生產(chǎn)實(shí)際的要求，本發(fā)明提供一種蘭索拉唑中蘭索氯化 物的測定方法。
[0007] 本發(fā)明所述的測定方法，采用高效液相色譜法中的雜質(zhì)對照品外標(biāo)法，色譜柱為 反相強(qiáng)極性柱，流動相為乙腈-PH6. 2~6. 5磷酸鹽緩沖液，稀釋劑為乙腈-PH10. 5磷酸鹽 緩沖液，檢測波長為210nm。
[0008] 進(jìn)一步，反相強(qiáng)極性柱選用氨基十六烷基硅膠色譜柱。
[0009] 所述的氨基十六烷基硅膠色譜柱規(guī)格為：5 μ m，250 X 4. 6mm。
[0010] 進(jìn)一步，流動相體積比例為：乙腈：pH6. 2~6. 5磷酸鹽緩沖液=35:65。
[0011] 進(jìn)一步，稀釋劑體積比例為：乙腈：pH10. 5磷酸鹽緩沖液=50:50。
[0012] 所述的磷酸鹽緩沖液的配制方法包括：無水磷酸氫二鈉加入到水中溶解，用磷酸 調(diào)PH值。
[0013] 本發(fā)明測定時流速控制I. 0ml/min。測定時進(jìn)樣量為50 μ 1。測定時柱溫為 25°C -35°C。
[0014] 本發(fā)明具體測定的過程包括：
[0015] 1)、用稀釋劑配制雜質(zhì)對照品液；
[0016] 2)、用稀釋劑配制供試液；
[0017] 3)、用稀釋劑配制分離度試驗(yàn)液；
[0018] 4)、測定：取稀釋劑作空白液、分離度試驗(yàn)液各50 μ 1，其中一份雜質(zhì)對照品液平 行5針各50 μ 1，另一份雜質(zhì)對照品液和供試液分別平行2針各50 μ 1，分別注入高效液相 色譜儀測定，記錄色譜圖；
[0019] 5)、按面積外標(biāo)法計算蘭索拉唑中蘭索氯化物的含量X% :
[0020] X%= (AX*C對 /A對 /Cx)*100%
[0021] 其中：4表示供試品中蘭索氯化物的峰面積；
[0022] Cx表示供試品溶液的濃度，μ g/ml ;
[0023] C對表示對照品溶液的濃度，μ g/ml ;
[0024] A5fit表示蘭索氯化物對照品的峰面積。
[0025] 本發(fā)明的方法為目前主流的高效液相色譜法（HCLP)，靈敏度極高，實(shí)驗(yàn)顯示檢測 限為0. 5ppm，完全達(dá)到《基因毒性雜質(zhì)限度指南》中對蘭索拉唑中基因毒性物質(zhì)Sppm的控 制要求，專屬性好，準(zhǔn)確度高。根據(jù)ICH指導(dǎo)原則《Q2b方法學(xué)》進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果均符 合指導(dǎo)原則要求。
【附圖說明】
[0026] 圖1140408-供試液1-1的HCLP圖譜。表示批號為140408的供試液第一份樣第 一針的HCLP色譜圖，以下類似；
[0027] 圖 2140408-供試液 1-2 的 HCLP 圖譜；
[0028] 圖3140408-供試液2-1的HCLP圖譜，表示批號為140408的供試液第二份樣第一 針的HCLP色譜圖，以下類似；
[0029] 圖 4140408-供試液 2-2 的 HCLP 圖譜；
[0030] 圖 5140409-供試液 1-1 的 HCLP 圖譜；
[0031] 圖 6140409-供試液 1-2 的 HCLP 圖譜；
[0032] 圖 7140409-供試液 2-1 的 HCLP 圖譜；
[0033] 圖 8140409-供試液 2-2 的 HCLP 圖譜；
[0034] 圖 9140410-供試液 1-1 的 HCLP 圖譜；
[0035] 圖 10140410-供試液 1-2 的 HCLP 圖譜；
[0036] 圖 11140410-供試液 2-1 的 HCLP 圖譜；
[0037] 圖 12140410-供試液 2-2 的 HCLP 圖譜；
[0038] 圖13測試三批樣品時的對照液1-1的HCLP圖譜。圖中蘭索氯化物的峰面積為 4890 ；
[0039] 圖14測試三批樣品時的對照液1-2的HCLP圖譜。圖中蘭索氯化物的峰面積為 4874 ；
[0040] 圖15測試三批樣品時的對照液2-1的HCLP圖譜。圖中蘭索氯化物的峰面積為 4960 ；
[0041] 圖16測試三批樣品時的對照液2-2的HCLP圖譜。圖中蘭索氯化物的峰面積為 4937 ；
[0042] 圖17測試三批樣品時的空白液的HCLP圖譜，圖中數(shù)據(jù)如下表；
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 蘭索拉唑中蘭索氯化物的測定方法，采用高效液相色譜法中的雜質(zhì)對照品外標(biāo)法， 色譜柱為反相強(qiáng)極性柱，流動相為乙腈-PH6. 2~6. 5磷酸鹽緩沖液，稀釋劑為乙腈-PH10. 5 磷酸鹽緩沖液，檢測波長為210nm。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于：反相強(qiáng)極性柱選用氨基十六烷基硅 膠色譜柱。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于：氨基十六烷基硅膠色譜柱規(guī)格為： 5 μ m，250 X 4. 6mm。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于：流動相體積比例為：乙腈：pH6. 2~ 6. 5磷酸鹽緩沖液=35:65。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于：稀釋劑體積比例為：乙腈：ρΗΙΟ. 5磷 酸鹽緩沖液=50:50。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1、4或5所述的測定方法，其特征在于：磷酸鹽緩沖液的配制方法包 括：無水磷酸氫二鈉加入到水中溶解，用磷酸調(diào)PH值。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于：測定時流速控制1.0 ml/min。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于：測定時進(jìn)樣量為50 μ 1。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于：測定時柱溫為25°C _35°C。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于：具體測定的過程包括： 1) 、用稀釋劑配制雜質(zhì)對照品液； 2) 、用稀釋劑配制供試液； 3) 、用稀釋劑配制分離度試驗(yàn)液； 4) 、測定：取稀釋劑作空白液、分離度試驗(yàn)液各50 μ 1，其中一份雜質(zhì)對照品液平行5針 各50 μ 1，另一份雜質(zhì)對照品液和供試液分別平行2針各50 μ 1，分別注入高效液相色譜儀 測定，記錄色譜圖； 5) 、按面積外標(biāo)法計算蘭索拉唑中蘭索氯化物的含量X% : X%= (Ax^/A5it/Cx)*100% 其中：\表示供試品中蘭索氯化物的峰面積； Cx表示供試品溶液的濃度，μg/ml ; 表示對照品溶液的濃度，μg/ml ; Aw表示蘭索氯化物對照品的峰面積。
【專利摘要】本發(fā)明所述的蘭索拉唑中蘭索氯化物的測定方法，采用高效液相色譜法中的雜質(zhì)對照品外標(biāo)法，色譜柱為反相強(qiáng)極性柱，流動相為乙腈-pH6.2～6.5磷酸鹽緩沖液，稀釋劑為乙腈-pH10.5磷酸鹽緩沖液，檢測波長為210nm。本發(fā)明的方法為目前主流的高效液相色譜法(HCLP)，靈敏度極高，實(shí)驗(yàn)顯示檢測限為0.5ppm，完全達(dá)到《基因毒性雜質(zhì)限度指南》中對蘭索拉唑中基因毒性物質(zhì)8ppm的控制要求，專屬性好，準(zhǔn)確度高。根據(jù)ICH指導(dǎo)原則《Q2b方法學(xué)》進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果均符合指導(dǎo)原則要求。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104634892
【申請?zhí)枴緾N201510040575
【發(fā)明人】時孟軍, 于利慶, 葉家強(qiáng), 唐世錠, 陳如, 黎德南, 張曉程
【申請人】桂林華信制藥有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年1月27日