一種魚油中EPA、DHA及總w-3酸含量測定的色譜方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于氣相色譜法(GC)在食品藥品組分分析中的具體應(yīng)用，更具體地說，涉及一種魚油中EPA、DHA及總w-3酸含量測定的色譜方法。
【背景技術(shù)】
[0002]魚油是一種具有很高利用價值的天然保健食品。其富含的w-3不飽和脂肪酸具有幫助降低膽固醇，防止血液凝固，預(yù)防血栓、動脈硬化及高血壓疾病，降低血液黏度，促進(jìn)血液循環(huán)，消除疲勞，緩和痛風(fēng)及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎癥的功效。魚油中所富含的《-3不飽和脂肪酸中，尤以二十碳五烯酸(EPA) (C20:5 n-3)和二十二碳六烯酸(DHA) (C22:6 n_3)最為重要。EPA對肺病、腎病、2型糖尿病、大腸潰瘍和節(jié)段性回腸炎等的治療都會起到積極作用；DHA為大腦及視網(wǎng)膜中含量最高的w-3脂肪酸，占大腦中多元不飽和脂肪酸的40%，視網(wǎng)膜中多元不飽和脂肪酸的60%，對腦和視覺的發(fā)育和功能維持起到重要作用。同時EPA和DHA能阻止血小板在血管壁上的沉積，預(yù)防或減輕動脈粥樣硬化和冠心病等發(fā)生。因此，準(zhǔn)確測定魚油中EPA、DHA及總w-3酸的含量對魚油產(chǎn)品的生產(chǎn)加工、功效評價等有重要意義。色譜法是測定EPA、DHA和總w-3酸含量的標(biāo)準(zhǔn)方法，但操作過程中通常需要提前配置抗氧化溶液，再用抗氧化溶液配置標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液，用多份溶液分別優(yōu)化測定條件，并分別測定后得出EPA、DHA和總w-3酸的含量。已有操作方法復(fù)雜，且測定過程中易出現(xiàn)溶劑揮發(fā)造成所得結(jié)果異常。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]、要解決的問題
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于提出一套簡便的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品處理方法，并選擇相應(yīng)的色譜條件，同時測定魚油中EPA、DHA和總w-3酸含量的方法，通過直接加入2，6_ 二叔丁基對甲酚(BHT)、鹽類物質(zhì)來配置標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液，直接進(jìn)樣進(jìn)行測定。
[0004]、技術(shù)方案
為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
一種魚油中EPA、DHA及總w-3酸含量測定的色譜方法，包括以下步驟:
(O酯化處理:EPA對照品和樣品進(jìn)行甲酯化處理轉(zhuǎn)換成酯；
(2)樣品溶液配制:精密稱取約含10mg DHA的樣品于容量瓶中，加少量氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，100° C水浴加熱5分鐘；加適量三氟化硼甲醇溶液，混勻，在100° C水浴加熱2分鐘，冷卻至50° C，加入含BHT的異辛烷溶液，混勻，加飽和氯化鈉溶液定容至刻度；當(dāng)異辛烷層和水層分離時，移取適量異辛烷層至具塞的容量瓶中，加適量水至容量瓶中，混勻；移取上層溶液至第二個同樣大小的容量瓶中，加水混勻；移取上層溶液至第三個同樣大小的容量瓶中，加少量無水硫酸鈉混勻；
(3)標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制:將DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、已酯化的EPA標(biāo)準(zhǔn)品和含有C18:3，C20:4，C20:5, C22:5和C22:6的混合脂肪酸的酯的對照品直接用樣品溶劑配成標(biāo)準(zhǔn)溶液待測；
(4)色譜條件設(shè)定:
a.色譜柱:DBFF_FFAP,15mnT0.53mm,涂層1.0 um或等效的柱子；
b.載氣:氮?dú)猓?br>c.流速:0.5 ml ,/mi η ；
d.分流比:20:1;
e.進(jìn)樣體積:2μ L ；
f.進(jìn)口溫度:250° C ；
g.檢測器溫度:270° C ;
h.加熱程序:爐溫:170°C保持1.5 min，升溫速度:3° C/min，240° C保持30min;
(5)進(jìn)樣順序:EPA標(biāo)準(zhǔn)溶液6針作為系統(tǒng)適用性，DHA標(biāo)準(zhǔn)溶液2針，混合脂肪酸對照溶液I針，樣品2針,最后再進(jìn)I針EPA標(biāo)準(zhǔn)溶液；
(6)通過待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間和峰面積關(guān)系進(jìn)行對比，確定樣品中的含量，具體算法為:
EPA (mg/g) = (A 樣)(Wst) *1000/ (Ast) / (W 樣)
DHA (mg/g)=(A 樣)(Wst) *1000*328.51/ (Ast) / (W 樣)/342.51總 w_3 酸(mg/g) =EPA+DHA+ An-3 (EPA+DHA) / (Aepa+Adha)
其中:An-3=Acl8:3+Ac20:4+Ac22:5
式中:A樣:樣品中組分EPA或DHA的峰面積
Ast:標(biāo)準(zhǔn)溶液中組分EPA或DHA的峰面積
W樣:樣品的稱重，mg
Wst:EPA或DHA標(biāo)準(zhǔn)品的稱重，mg。
[0005]進(jìn)一步的，測定對象包括EPA、DHA、總w_3酸或總w_3酸中的其它單獨(dú)一種或幾種。
[0006]更進(jìn)一步的，除魚油保健品外，還適用于含有一種或多種w-3酸的藥品和藥用動植物的測定。
[0007]、有益效果
相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為:
本發(fā)明在皂化反應(yīng)完成后直接用三氟化硼甲醇溶液進(jìn)行成酯反應(yīng)；反應(yīng)后直接用含有BHT的異辛烷溶液提取不飽和脂肪酸酯進(jìn)樣測定，由于巧妙選擇了酯化和提取試劑，使操作過程得到簡化，測定結(jié)果更加穩(wěn)定可靠，很大程度上避免了由于揮發(fā)等因素導(dǎo)致的測定結(jié)果異常等情況的發(fā)生。
【附圖說明】
[0008]圖1為本方法對一種魚油產(chǎn)品EPA、DHA和總w_3酸含量測定圖譜；
圖中A為EPA標(biāo)準(zhǔn)品圖；B為DHA標(biāo)準(zhǔn)品圖；C為混合脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品圖，C18:3、C20:4和 C22:5 的保留時間分別為 10.56 min、15.07 min和 20.87 min ;D*Mega EPA/DHA 300mgsoftgels樣品檢測圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步進(jìn)行描述。
[0010]如圖1 所示，Mega EPA/DHA 300mg softgels 樣品中 EPA、DHA 和總 w_3 酸含量的測定:
(I)試劑和儲備溶液:
14%的三氟化硼甲醇溶液
甲醇，氯化鈉，異辛烷，無水硫酸鈉，氫氧化鈉，2，6- 二叔丁基對甲酚(BHT)
0.5 N氫氧化鈉的甲醇溶液:稱取2g氫氧化鈉于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度；
BHT溶液:稱取25mgBHT至500ml容量瓶中，加異辛烷溶解并稀釋至刻度；
標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液:在100 ml水中溶解足夠多的氯化鈉(即氯化鈉飽和溶液)。
[0011]對照品:DHA甲酷，EPA標(biāo)準(zhǔn)品。
[0012](2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:對照品中EPA和樣品同時處理轉(zhuǎn)換成酯。而DHA和混合脂肪酸對照品因本身就是酯，不用處理，直接用溶劑溶解后進(jìn)樣。
[0013](3)樣品溶液的制備:精密稱取相當(dāng)于10 mg DHA的樣品于25 mL容量瓶中，加3mL 0.5 N氫氧化鈉溶液，混勻，在100° C水浴加熱5分鐘，加5 mL 14%三氟化硼甲醇溶液，混勻，在100° C水浴加熱2分鐘，冷卻至50° C，加入10 mL含50 mg BHT /L的異辛烷，混勻，加飽和氯化鈉溶液定容至刻度。當(dāng)異辛烷層和水層分離時，移取適量異辛烷層至具塞的5 mL的容量瓶中，加I mL水至5 mL容量瓶中，混勻。移取上層溶液至第二個5 mL容量瓶中，加I mL水混勻。移取上層溶液至第三個5 mL容量瓶中，加少量的無水硫酸鈉混勻。
[0014](4)按照第三部分
【發(fā)明內(nèi)容】
中所述的色譜條件和進(jìn)樣順序設(shè)定色譜檢測條件，進(jìn)樣檢測，并在相應(yīng)保留時間處讀取峰面積。按照如下公式計(jì)算各組分含量:
EPA (mg/g) = (A 樣)(Wst) *1000/ (Ast) / (W 樣)
DHA (mg/g) =(A 樣)(Wst) *1000*328.51/ (Ast) / (W 樣)/342.51總 w_3 酸(mg/g) =EPA+DHA+ An-3 (EPA+DHA) / (Aepa+Adha)
其中:An-3=Acl8:3+Ac20:4+Ac22:5
式中:A樣:樣品中組分EPA或DHA的峰面積
Ast:標(biāo)準(zhǔn)溶液中組分EPA或DHA的峰面積
W樣:樣品的稱重，mg
Wst:EPA或DHA標(biāo)準(zhǔn)品的稱重，mg
得到樣品中EPA含量為:168.4 mg/g
DHA 含量為:129.1 mg/g
總w-3酸含量為:328.2 mg/g
測定結(jié)果證明，本方法所用成酯反應(yīng)試劑和萃取試劑合理，操作周期短，簡便易行，能夠有效避免操作和反應(yīng)過程中的揮發(fā)問題，測定結(jié)果可靠。因此，本方法非常適合于魚油等保健食品或藥品中EPA、DHA和總w-3酸含量的實(shí)際測定，尤其適用于工業(yè)生產(chǎn)等需要規(guī)模化測定的場合。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種魚油中EPA、DHA及總W-3酸含量測定的色譜方法，其特征在于，包括以下步驟: (O酯化處理:EPA對照品和樣品進(jìn)行甲酯化處理轉(zhuǎn)換成酯； (2)樣品溶液配制:精密稱取約含10mg DHA的樣品于容量瓶中，加少量氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，100° C水浴加熱5分鐘；加適量三氟化硼甲醇溶液，混勻，在100° C水浴加熱2分鐘，冷卻至50° C，加入含BHT的異辛烷溶液，混勻，加飽和氯化鈉溶液定容至刻度；當(dāng)異辛烷層和水層分離時，移取適量異辛烷層至具塞的容量瓶中，加適量水至容量瓶中，混勻；移取上層溶液至第二個同樣大小的容量瓶中，加水混勻；移取上層溶液至第三個同樣大小的容量瓶中，加少量無水硫酸鈉混勻； (3)標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制:將DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、已酯化的EPA標(biāo)準(zhǔn)品和含有C18:3，C20:4，C20:5，C22:5和C22:6的混合脂肪酸的酯的對照品直接用樣品溶劑配成標(biāo)準(zhǔn)溶液待測； (4)色譜條件設(shè)定: a.色譜柱:DBFF_FFAP,15mnT0.53mm,涂層1.0 um或等效的柱子； b.載氣:氮?dú)?；c.流速:0.5 ml ,/mi η ； d.分流比:20:1; e.進(jìn)樣體積:2μ L ； f.進(jìn)口溫度:250° C ； g.檢測器溫度:270° C ; h.加熱程序:爐溫:170°C保持1.5 min，升溫速度:3° C/min，240° C保持30 min ； (5)進(jìn)樣順序:EPA標(biāo)準(zhǔn)溶液6針作為系統(tǒng)適用性，DHA標(biāo)準(zhǔn)溶液2針，混合脂肪酸對照溶液I針，樣品2針,最后再進(jìn)I針EPA標(biāo)準(zhǔn)溶液； (6)通過待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間和峰面積關(guān)系進(jìn)行對比，確定樣品中的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述魚油中EPA、DHA及總w-3酸含量測定的色譜方法，其特征在于:測定對象包括EPA、DHA、總w-3酸或總w_3酸中的其它單獨(dú)一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述魚油中EPA、DHA及總w-3酸含量測定的色譜方法，其特征在于:除魚油保健品外，還適用于含有一種或多種《-3酸的藥品和藥用動植物的測定。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種魚油中EPA、DHA及總w-3酸含量測定的色譜方法，包括以下步驟：（1）酯化處理；（2）樣品溶液配制；（3）標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制；（4）色譜條件設(shè)定；（5）進(jìn)樣順序；（6）通過待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間和峰面積關(guān)系進(jìn)行對比，確定樣品中的含量；在含有w-3脂肪酸的魚油試樣處理過程中，對不飽和脂肪酸皂化反應(yīng)完成后，直接用三氟化硼甲醇溶液進(jìn)行成酯反應(yīng)；之后直接用含有BHT的異辛烷溶液提取不飽和脂肪酸酯作為測定試樣。本方法采用恰當(dāng)?shù)某甚シ椒ê驮嚇雍筇幚矸椒?，測試操作周期短，能夠有效避免操作中的揮發(fā)等問題，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，尤其適合于工業(yè)生產(chǎn)等需要規(guī)模化測定的場合。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-88
【公開號】CN104634908
【申請?zhí)枴緾N201310559451
【發(fā)明人】盛潔, 包亞君
【申請人】江蘇艾蘭得營養(yǎng)品有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2013年11月12日