一種薄芝糖肽注射液的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥品檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及薄芝糖肽注射液的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 薄芝糖肽注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字H11022156,北京賽升藥業(yè)股份有限公司生 產(chǎn)）是以靈芝屬薄樹(shù)芝（G.capense)菌株經(jīng)液體深層發(fā)酵培養(yǎng)法制得的薄樹(shù)芝 [Ganodermacapense (Lloyd)Teng]干燥菌絲體粉末中提取制得的滅菌水溶液，其主要成分 為多糖和多肽。薄芝糖肽具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用，對(duì)機(jī)體非特異性免疫、體液免疫及 細(xì)胞免疫等均有促進(jìn)作用；具有抗氧化作用，能夠清除氧自由基；此外，尚有促進(jìn)核酸、蛋 白質(zhì)生物合成等作用。薄芝糖肽注射液主要用于進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良、萎縮性肌強(qiáng)直及各種 原因引起的眩暈等疾病，如高血壓并美尼爾癥、植物神經(jīng)功能紊亂、前庭功能障礙、癲癇、肢 麻、失眠等；亦可用于免疫功能障礙引起的各種疾病，如腫瘤、肝炎等的輔助治療。
[0003] 經(jīng)多年臨床應(yīng)用，已證明薄芝糖肽具有很好的療效。目前市場(chǎng)上經(jīng)靜脈給藥劑型 只有水針劑，經(jīng)過(guò)國(guó)家批準(zhǔn)生產(chǎn)的只有薄芝糖肽注射液。該藥品在臨床應(yīng)用多年，療效可 靠，市場(chǎng)用量大。但與化學(xué)合成的藥品相比，其產(chǎn)品組成不夠明確，不同發(fā)酵批次間相對(duì)分 子質(zhì)量會(huì)有不同，多肽與多糖的比例亦難以控制。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)薄芝糖肽的質(zhì)量控制方法不夠全面，無(wú)高分子量物質(zhì)與過(guò)敏反應(yīng)的 檢查項(xiàng)，以致無(wú)法對(duì)產(chǎn)品中易于引起不良反應(yīng)的成分進(jìn)行控制，增加了產(chǎn)品在臨床應(yīng)用中 的安全風(fēng)險(xiǎn)，為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的這一突出的問(wèn)題，有必要對(duì)現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法 進(jìn)行改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種薄芝糖肽注射液的質(zhì)量控制方法。
[0006] 為達(dá)到上述目的，具體采用如下的技術(shù)方案：一種薄芝糖肽注射液的質(zhì)量控制方 法，包括薄芝糖肽注射液中高分子量物質(zhì)的檢測(cè)方法，具體包括以下步驟：
[0007] (1)對(duì)照溶液的制備：選取核糖核酸酶A、人胰島素、胸腺肽α 1、生長(zhǎng)抑素、醋酸奧 曲肽標(biāo)準(zhǔn)品，分別用流動(dòng)相配制成濃度為〇. 2~0. 5mg/ml的溶液；
[0008] (2)供試品溶液的制備：選取薄芝糖肽注射液，用流動(dòng)相配制成濃度為0. 2~ 0· 5mg/ml的溶液；
[0009] (3)檢測(cè)：分別吸取供試品溶液和對(duì)照溶液10~50 μ 1注入高效液相色譜儀，按 照高效液相色譜法測(cè)定各溶液的色譜，將先于人胰島素出峰時(shí)間的峰視為高分子物質(zhì)，按 面積歸一化法計(jì)算其含量；
[0010] 其中，色譜條件如下：色譜柱為凝膠色譜柱；以體積比為I: (600~700) : (300~ 400)的三氟醋酸-水-乙腈的混合溶液為流動(dòng)相；流速為0.5-0. 7ml/min ;流速為 0. 5-0. 7ml/min ;理論板數(shù)按核糖核酸酶A計(jì)算應(yīng)不得低于5000,分離度按相鄰峰高與峰谷 之比計(jì)算均不得小于3.0。按照本發(fā)明給出的檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)，可以快速、靈敏、準(zhǔn)確的對(duì) 高分子量物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，且具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。
[0011] 本發(fā)明的技術(shù)方案，還包括薄芝糖肽注射液的過(guò)敏反應(yīng)檢測(cè)方法，具體包括如下 步驟：
[0012] (1)致敏：取體重250-350g的健康豚鼠6只或6只以上，隔日每只豚鼠腹腔注射 薄芝糖肽注射液〇. 2~0. 5mL，共3次，進(jìn)行致敏；
[0013] (2)激發(fā)：豚鼠均分為2組，分別在首次注射后第14日和第21日，由靜脈注射薄 芝糖肽注射液原液0. 8~ImL進(jìn)行激發(fā)，觀察激發(fā)30分鐘內(nèi)豚鼠有無(wú)過(guò)敏反應(yīng)癥狀。
[0014] 本發(fā)明提供的薄芝糖肽注射液的質(zhì)量控制方法，能夠更加全面、完善地對(duì)薄芝糖 肽注射液進(jìn)行質(zhì)量控制，降低薄芝糖肽注射液在臨床使用中的風(fēng)險(xiǎn)，更好的滿足人們的需 要。
[0015] 優(yōu)選地，薄芝糖肽注射液中高分子量物質(zhì)的檢測(cè)方法中步驟（1)選取核糖核酸 酶A、人胰島素、胸腺肽α 1、生長(zhǎng)抑素、醋酸奧曲肽標(biāo)準(zhǔn)品，分別用流動(dòng)相配制成濃度為 0.2mg/ml的溶液。此時(shí)可以以較低的標(biāo)準(zhǔn)品濃度即得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，且具有更佳的分 離度，使得出的標(biāo)準(zhǔn)曲線更加準(zhǔn)確。
[0016] 步驟⑵選取薄芝糖肽注射液，用流動(dòng)相配制成濃度為0. 2mg/ml的溶液。此時(shí)以 較低的濃度即完成樣品的檢測(cè)，可以更好的控制檢測(cè)樣品的成本而不影響準(zhǔn)確度，使檢測(cè) 具有良好的經(jīng)濟(jì)性。
[0017] 優(yōu)選地，在步驟（3)中分別吸取供試品溶液和對(duì)照溶液20 μ 1注入高效液相色譜 儀。
[0018] 在步驟（3)中以體積比為I :650 :350的三氟醋酸-水-乙腈的混合溶液為流動(dòng) 相；流速為〇. 5ml/min。
[0019] 在步驟（3)中所述檢測(cè)器為VWD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為214±lnm，更優(yōu)選地，檢測(cè)波 長(zhǎng)為214nm。
[0020] 在步驟（3)中所述色譜柱為凝膠色譜柱TSK GEL2000SWxl。
[0021] 上述的優(yōu)選條件單一使用或結(jié)合使用均可以更好的控制理論板數(shù)按核糖核酸酶A 計(jì)算不低于5000,分離度按相鄰峰高與峰谷之比計(jì)算均不小于3. 0,使檢測(cè)得出的結(jié)果更 加準(zhǔn)確。
[0022] 本發(fā)明提供的檢測(cè)薄芝糖肽注射液中高分子量物質(zhì)的方法簡(jiǎn)便易行、耗費(fèi)少、時(shí) 間短、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性都很好。
[0023] 具體的，在薄芝糖肽注射液的過(guò)敏反應(yīng)檢測(cè)方法中，健康豚鼠優(yōu)選為健康合格，雌 鼠應(yīng)無(wú)孕；在致敏和激發(fā)過(guò)程中，均應(yīng)按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)，做過(guò)過(guò)敏反應(yīng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的豚鼠 不得重復(fù)使用。
[0024] 過(guò)敏反應(yīng)癥狀為：在同一只動(dòng)物上出現(xiàn)堅(jiān)毛、發(fā)抖、干嘔、連續(xù)噴嚏3聲、連續(xù)咳嗽 3聲、紫癜和呼吸困難現(xiàn)象中的2種或2種以上，或出現(xiàn)二便失禁、步態(tài)不穩(wěn)或倒地、抽搐、休 克、死亡現(xiàn)象之一。
[0025] 本發(fā)明提供的薄芝糖肽注射液的過(guò)敏反應(yīng)檢測(cè)方法具有方法簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)、 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)明確、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于薄芝糖肽注射液過(guò)敏物質(zhì)的檢查有良好的適 用性。
[0026] 本發(fā)明在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了對(duì)高分子量物質(zhì)及過(guò)敏反應(yīng)的檢查，提供 了一種簡(jiǎn)便易行、耗費(fèi)少、時(shí)間短、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性都很好的檢測(cè)薄芝糖肽注射液中高分子 量物質(zhì)的分子排阻色譜檢測(cè)方法，及適用于薄芝糖肽注射液的過(guò)敏反應(yīng)檢查法，能夠更加 全面、完善地對(duì)薄芝糖肽注射液進(jìn)行質(zhì)量控制。
【附圖說(shuō)明】
[0027] 圖1為實(shí)施例1高分子量物質(zhì)的檢測(cè)方法中分子量標(biāo)準(zhǔn)品圖譜；
[0028] 圖2為實(shí)施例1的分子量對(duì)數(shù)（y)_保留時(shí)間（X)曲線；
[0029] 圖3為不同檢測(cè)器及波長(zhǎng)比較的圖譜；
[0030] 圖4為定量限和檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)中定量限圖譜；
[0031] 圖5為定量限和檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)限圖譜；
[0032] 圖6為強(qiáng)制破壞實(shí)驗(yàn)中未破壞溶液的圖譜；
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