諾如病毒檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種諾如病毒檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]諾瓦克病毒(NorwalkViruses, NV)是人類杯狀病毒科(Human Calicivirus,HuCV)中諾如病毒(Norovirus，NV)屬的原型代表株。NV是一組形態(tài)相似、抗原性略有不同的病毒顆粒。諾瓦克病毒最早是從1968年在美國諾瓦克市暴發(fā)的一次急性腹瀉的患者糞便中分離的病原。此后，世界各地陸續(xù)自胃腸炎患者糞便中分離出多種形態(tài)與之相似但抗原性略異的病毒樣顆粒，均以發(fā)現(xiàn)地點(diǎn)命名，如:Hawaii Virus (HV)、Snow MountainVirus (SMV) > Mexico Virus (MxV) Southampton Virus (SOV)等，先是稱為小圓結(jié)構(gòu)病毒(Small Round Structural Virus, SRSV),后稱為諾瓦克樣病毒(Norwalk-like virus,NLV)。直至2002年8月第八屆國際病毒命名委員會(huì)批準(zhǔn)名稱為諾如病毒(Norovirus，NV)。諾如病毒與在日本發(fā)現(xiàn)的札幌樣病毒(Sapporo-like Virus，SLV)，現(xiàn)在的正式名稱為札如病毒(Sapovirus, SV),合稱為人類杯狀病毒。
[0003]NV有許多共同特征:直徑約為26?35nm，無包膜，表面粗糙，球形，呈二十面體對(duì)稱；從急性胃腸炎病人的糞便中分離，不能在細(xì)胞或組織中培養(yǎng)，也沒有合適的動(dòng)物模型；基因組為單股正鏈RNA ;在氯化銫密度梯度中的浮力密度為1.36?1.41g / cm3 ;電鏡下缺乏顯著的形態(tài)學(xué)特征，負(fù)染色電鏡照片顯示，NV是具有典型的羽狀外緣，表面有凹痕的小圓狀結(jié)構(gòu)病毒。
[0004]諾如病毒感染性腹瀉是由諾如病毒屬病毒引起的腹瀉，具有發(fā)病急、傳播速度快、涉及范圍廣等特點(diǎn)，是引起非細(xì)菌性腹瀉暴發(fā)的主要病因。諾如病毒感染性強(qiáng)，以腸道傳播為主，可通過污染的水源、食物、物品、空氣等傳播，常在社區(qū)、學(xué)校、餐館、醫(yī)院、托兒所、孤老院及軍隊(duì)等處引起集體暴發(fā)。
[0005]諾如病毒遺傳高度變異，在同一時(shí)期和同一社區(qū)內(nèi)可能存在遺傳特性不同的毒株流行。諾如病毒抗體沒有顯著的保護(hù)作用，尤其是沒有長期免疫保護(hù)作用，極易造成反復(fù)感染。
[0006]諾如病毒感染性腹瀉在全世界范圍內(nèi)均有流行，全年均可發(fā)生感染，感染對(duì)象主要是成人和學(xué)齡兒童，寒冷季節(jié)呈現(xiàn)高發(fā)。美國每年在所有的非細(xì)菌性腹瀉暴發(fā)中，60-90%是由諾如病毒引起。荷蘭、英國、日本、澳大利亞等發(fā)達(dá)國家也都有類似結(jié)果。在發(fā)展中國家，諾如病毒感染性腹瀉普遍存在，也常引起暴發(fā)流行。在我國5歲以下腹瀉兒童中，諾如病毒檢出率為15%左右，血清抗體水平調(diào)查表明我國人群中諾如病毒的感染亦十分普遍。1995年，我國報(bào)道了首例諾如病毒感染，之后山西、北京、安徽、福州、武漢、廣州等地區(qū)先后發(fā)生多起諾如病毒感染性腹瀉暴發(fā)疫情。
[0007]目前，該項(xiàng)目檢測(cè)主要應(yīng)用的檢測(cè)方法為:直接電鏡法(EM)、免疫電鏡法(IEM)、放射免疫法(RIA)、生物素-親和素免疫法(B1tin-Avidin Immunoassy)和酶聯(lián)免疫法(ELISA)、雜交技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等方法進(jìn)行檢測(cè)。但是，這些檢測(cè)方法均需要依賴相應(yīng)的儀器設(shè)備、并需要使用液體試劑等，不便于實(shí)地檢測(cè)，而且試劑的保存和使用也受到限制，也不便于快速簡便的得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0008]因而，目前需要一種能夠早期、快速、簡便、可靠地診斷諾如病毒的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種諾如病毒檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。
[0010]本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0011]本發(fā)明提供一種諾如病毒檢測(cè)試劑盒，包括樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水濾紙和反應(yīng)支持物；其中，所述樣品墊、所述膠體金墊、所述硝酸纖維素膜、所述吸水濾紙依次設(shè)置在所述反應(yīng)支持物上；所述樣品墊設(shè)置在所述反應(yīng)支持物的底端，所述樣品墊的頂端壓住所述膠體金墊的底端并與之粘貼，所述膠體金墊的頂端壓住所述硝酸纖維素膜的底端并與之粘貼，所述硝酸纖維素膜的頂端被所述吸水濾紙的底端壓住并與之粘貼。
[0012]優(yōu)選的，所述吸水濾紙長度為33.0_，所述吸水濾紙與所述硝酸纖維素膜重疊粘貼在一起的重疊長度為1.0mm。
[0013]優(yōu)選的，所述膠體金墊的長度為6.0mm，所述膠體金墊與所述硝酸纖維素膜重疊粘貼在一起的重疊長度為1.0mm。
[0014]優(yōu)選的，所述樣品墊的長度為25.0mm，所述樣品墊與所述膠體金墊重疊粘貼在一起的重疊長度為2.0mm。
[0015]優(yōu)選的，所述膠體金墊為含有膠體金標(biāo)記的諾如病毒衣殼蛋白單克隆抗體的膠體金墊。
[0016]優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜設(shè)置有檢測(cè)條帶和質(zhì)控條帶，所述檢測(cè)條帶設(shè)置于靠近所述膠體金墊的一側(cè)并含有諾如病毒衣殼蛋白單克隆抗體，所述質(zhì)控條帶設(shè)置于遠(yuǎn)離所述膠體金墊的一側(cè)并含有羊抗鼠IgG多克隆抗體。
[0017]優(yōu)選的，所述反應(yīng)支持物為塑料。
[0018]本發(fā)明提供一種應(yīng)用諾如病毒檢測(cè)試劑盒進(jìn)行諾如病毒檢測(cè)的方法，包括以下步驟:
[0019](I)將待檢樣本用稀釋液處理；其中，所述待檢樣本為糞便或者嘔吐物；
[0020](2)將稀釋好的樣本滴加至諾如病毒檢測(cè)試劑盒的樣品墊上；樣本將依次沿著反應(yīng)支持物上的各個(gè)附著物向吸水濾紙的方向移動(dòng)；
[0021](3)若所述樣本中含有諾如病毒，則諾如病毒中的諾如病毒衣殼蛋白在經(jīng)過所述膠體金墊的過程中，與所述膠體金墊標(biāo)記的諾如病毒衣殼蛋白單克隆抗體特異性結(jié)合形成復(fù)合物；所述復(fù)合物在經(jīng)過所述硝酸纖維素膜的過程中，依次與相對(duì)于所述復(fù)合物不足量的諾如病毒衣殼蛋白單克隆抗體以及羊抗鼠IgG多克隆抗體特異性結(jié)合；則檢測(cè)條帶處出現(xiàn)紅色或粉紅色，樣本為陽性；
[0022]若所述樣本中不含有諾如病毒，則檢測(cè)條帶處未出現(xiàn)紅色或粉紅色，樣本為陰性:
[0023](4)如果質(zhì)控條帶處出現(xiàn)紅色或粉紅色，則表明實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效；如果質(zhì)控條帶處未出現(xiàn)紅色或粉紅色，則表明膠體金失效或者實(shí)驗(yàn)操作有誤，實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效。
[0024]優(yōu)選的，步驟(I)中，使用2%的NP40和0.5%的十二烷基苯磺酸鈉的0.02M磷酸鹽緩沖液作為樣品稀釋液，稀釋待檢樣本。
[0025]本發(fā)明的有益效果如下:
[0026]本發(fā)明提供的諾如病毒檢測(cè)試劑盒，能夠簡化糞便或者嘔吐物樣本中諾如病毒的檢測(cè)流程。利用該種檢測(cè)試劑盒檢測(cè)諾如病毒，不對(duì)任何實(shí)驗(yàn)儀器、環(huán)境或者操作人員具有依賴性，操作簡單、方便、檢測(cè)周期短、易于判讀；另外，不需要特殊的儀器設(shè)備，不需要專業(yè)培訓(xùn)，適應(yīng)性強(qiáng)，便于隨時(shí)隨地的監(jiān)測(cè)和檢驗(yàn)。
[0027]本發(fā)明提供的檢測(cè)方法操作簡單方便、不依賴較高實(shí)驗(yàn)室條件、用于快速檢測(cè)諾如病毒，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)快速簡便的輔助診斷腹瀉等相關(guān)疾病的病因。
【附圖說明】
[0028]圖1是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒的正面示意圖；
[0029]圖2是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒的側(cè)面示意圖；
[0030]圖3是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果陽性示意圖；
[0031]圖4是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果陰性示意圖；
[0032]圖5是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒結(jié)果無效示意圖；
[0033]圖6是本發(fā)明的一個(gè)檢測(cè)試劑盒結(jié)果無效示意圖。
[0034]其中:1、吸水濾紙；2、硝酸纖維素膜；3、膠體金墊；4、樣品墊；5、反應(yīng)支持物；T、檢測(cè)條帶；C、質(zhì)控條帶。
【具體實(shí)施方式】