去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及樹葉中有機污染物質(zhì)的檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]通過干、濕沉降于樹葉表面的蠟質(zhì)層，樹葉能吸收和富集大氣中的多種有機污染物質(zhì)。因此樹葉能夠作為被動采樣器以獲得大氣中持久性有機污染物的來源、時空分布、毒性等信息。
[0003]目前，樹葉中有機污染物質(zhì)常用的檢測方法為氣相色譜質(zhì)譜法。由于樹葉的基質(zhì)復(fù)雜，含有大量物理化學(xué)性質(zhì)不同的基質(zhì)成分，在檢測過程中存在由共萃取脂類引起的嚴(yán)重的基質(zhì)干擾。因此在檢測前常通過凝膠滲透色譜、凝膠滲透色譜聯(lián)用固相萃取、柱層析等方法去除樹葉中的脂類物質(zhì)。但這些方法都具有耗時、耗力、耗溶劑、操作復(fù)雜、不能完全去除脂類物質(zhì)的缺點，使得對樹葉中有機污染物質(zhì)的檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度降低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了克服技術(shù)存在的不足而提供一種簡便、快速、有效的去除樹葉中脂類物質(zhì)的的分離方法。經(jīng)該方法處理后，去除了樹葉中大部分脂類物質(zhì)，避免了有機污染物質(zhì)檢測過程中脂類物質(zhì)的干擾，使檢測能夠有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度。
[0005]為實現(xiàn)上述的目的而采用的技術(shù)方案是:
一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，包括如下步驟:
固相萃取:將植物葉經(jīng)二氯甲烷超聲萃取的萃取液經(jīng)填裝了吸附劑的固相萃取柱凈化、洗脫，去除磷脂、糖脂和留類脂類物質(zhì)；
氣流吹掃微萃取:將上述經(jīng)固相萃取得到的洗脫液濃縮后經(jīng)氣流吹掃微萃取儀萃取，去除烯萜類脂類物質(zhì)，得到樹葉的氣相色譜質(zhì)譜分析樣品。
[0006]進一步地，所述的固相萃取的吸附劑為硅膠和氧化鋁。
[0007]進一步地，所述的固相萃取柱下層的吸附劑為1.5 g硅膠和上層的吸附劑為0.8 g
氧化鋁。
[0008]進一步地，所述固相萃取的洗脫過程為先棄去正己烷3 mL，再用正己烷與二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑6 mL洗脫。
[0009]進一步地，所述氣流吹掃微萃取的溫度為300 V，所述氣流吹掃微萃取的時間為5min，所述氣流吹掃微萃取的萃取溶劑為正己烷。
[0010]進一步地，所述的將氣流吹掃微萃取的萃取液定容至10yL,得到樹葉的氣相色譜質(zhì)譜分析樣品。
[0011]本發(fā)明采取固相萃取和氣流吹掃微萃取兩個過程，分步去除樹葉中大部分脂類物質(zhì)。固相萃取利用目標(biāo)物與脂類物質(zhì)的極性差異，導(dǎo)致其在固定相與洗脫相間分配系數(shù)不同，達(dá)到去除與目標(biāo)物極性不同的脂類物質(zhì)的目的。氣流吹掃微萃取是近年來開發(fā)的一種集萃取、凈化、濃縮于一體的凈化方法。氣流吹掃微萃取利用目標(biāo)物與脂類物質(zhì)的沸點差異，去除與目標(biāo)物沸點不同的脂類物質(zhì)。氣流吹掃微萃取與固相萃取機理互補，將倆者聯(lián)用可以有效的去除樹葉中的脂類物質(zhì)，相對于現(xiàn)有技術(shù)，如通過凝膠滲透色譜、凝膠滲透色譜聯(lián)用固相萃取、柱層析等方法去除樹葉中的脂類物質(zhì)而言，本發(fā)明更加簡便、快速。本發(fā)明去除了樹葉中大部分脂類物質(zhì)，避免了有機污染物質(zhì)檢測過程中脂類物質(zhì)的干擾，使檢測能夠有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度。
【附圖說明】
[0012]圖1為柳樹葉樣品未經(jīng)除脂的萃取液的液相色譜圖。
[0013]圖2為柳樹葉樣品經(jīng)吸附劑為硅膠和氧化鋁的固相萃取柱凈化(洗脫溶劑為正己烷和二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑)的液相色譜圖。
[0014]圖3為柳樹葉樣品未經(jīng)除脂的萃取液的氣相色譜質(zhì)譜圖。
[0015]圖4為柳樹葉樣品經(jīng)吸附劑為硅膠的固相萃取柱凈化(洗脫溶劑為正己烷和二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑)的氣相色譜質(zhì)譜圖。
[0016]圖5為柳樹葉樣品經(jīng)吸附劑為硅膠和氧化鋁的固相萃取柱凈化(洗脫溶劑為正己烷和二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑)的氣相色譜質(zhì)譜圖。
[0017]圖6為柳樹葉樣品經(jīng)洗脫過程為用正己烷洗脫(棄掉)，再用正己烷和二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑洗脫的氣相色譜質(zhì)譜圖。
[0018]圖7為柳樹葉樣品經(jīng)氣流吹掃微萃取凈化的氣相色譜質(zhì)譜圖。
[0019]圖8為本發(fā)明實施例得到的白樺樹葉萃取液的氣相色譜質(zhì)譜圖。
[0020]圖9為本發(fā)明實施例得到的白樺樹葉經(jīng)固相萃取凈化的氣相色譜質(zhì)譜圖。
[0021]圖10為本發(fā)明實施例得到的白樺樹葉經(jīng)固相萃取聯(lián)用氣流吹掃微萃取凈化的氣相色譜質(zhì)譜圖。
【具體實施方式】
[0022]一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，包括固相萃取和氣流吹掃微萃取步驟，
固相萃取:首先將樹葉樣品經(jīng)二氯甲烷超聲萃取的萃取液經(jīng)填裝了吸附劑的固相萃取柱凈化去除磷脂、糖脂和留類脂類物質(zhì)。對固相萃取的吸附劑優(yōu)選結(jié)果:下層為1.5 g硅膠、上層為0.8 g氧化鋁，去除磷脂、糖脂類、留醇類脂類物質(zhì)。對固相萃取的洗脫過程優(yōu)選結(jié)果:先棄去正己烷3 mL,再用正己烷與二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑6 mL洗脫，去除甾類脂類物質(zhì)。本發(fā)明對所述固相萃取的玻璃柱沒有特殊的限制，采用內(nèi)徑為1.5 cm左右的柱筒即可，如可以使用金壇市明陽玻璃制品廠的10 mL玻璃注射器的針筒。
[0023]氣流吹掃微萃取:將上述固相萃取的洗脫液濃縮后經(jīng)氣流吹掃微萃取儀萃取，去除烯萜類脂類物質(zhì)。為了使樣品適用于氣相色譜質(zhì)譜分析，所述氣流吹掃微萃取的溫度為300 °C，所述氣流吹掃微萃取的時間為5 min，所述氣流吹掃微萃取的萃取溶劑為正己烷；將氣流吹掃微萃取的萃取液定容至100 μ L，得到樹葉氣相色譜質(zhì)譜分析樣品。
[0024]為了進一步說明本發(fā)明，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的脂類物質(zhì)的去除方法進行詳細(xì)地描述，但不能將它們理解為對本發(fā)明保護范圍的限定。
[0025]下述實施例采用的試劑與儀器: 試劑:正己烷、二氯甲烷，均為色譜級，購自于Caledon公司，硅膠、氧化鋁，均為色譜級，購于Supelco公司。無水硫酸鈉，純度99.999%的氮氣購于大連大特氣體有限公司。
[0026]儀器:氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用儀GC/MS2010(日本島津公司)，100 μ L和250 μ L微型注射器(美國HAMIL TON公司)，超聲波清洗器AS20500AH型(天津AU-TO-SCIENCE), ΜΕ-101多功能微萃取儀，GF-3000電子天平，進樣墊(日本島津公司)，聚四氟乙烯管。
[0027]本實施例檢測的樹葉樣品為白樺樹葉。
[0028]準(zhǔn)確稱取白樺樹葉樣品3份，每份0.5 go放入20 mL樣品瓶中，加入4 mL 二氯甲烷超聲萃取三次，每次15分鐘，合并萃取液。將其中倆份濃縮至I mL，經(jīng)固相萃取柱凈化，吸附劑分別為1.5 g硅膠(下層)和氧化鋁0.8 g (上層)，用正己烷洗脫(棄去3 mL)用正己烷與二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑6 mL洗脫，將其中一份洗脫液定容至10 mL作為氣相色譜質(zhì)譜分析的樣品，另一份濃縮至I mL。
[0029]取10 μ L濃縮的洗脫液放入ME-101多功能微萃取儀的樣品管中，將樣品管放入樣品池中，用隔墊將樣品池口密封，將200 yL內(nèi)插管放在冷凝器的支持架上，用聚四氟乙烯管連接兩根針，一端放進200 UL內(nèi)插管內(nèi)，至剛好到達(dá)襯管底部為止，另一端沿著密封墊插入樣品池中，至剛好穿過密封墊下部為止，在200 yL襯管中加入50 yL左右的正己烷萃取溶劑，打開氮氣，氣流速率2.0 mL/min為定值，吹掃5 s后開始萃取，設(shè)置萃取時間為5 min，樣品池的加熱溫度分別為300°C，萃取相的溫度為_4°C。萃取完成后，定容至100 UL，作為氣相色譜質(zhì)譜分析的樣品。
[0030]將另一份萃取液定容至10 mL，作為氣相色譜質(zhì)譜分析的樣品。
[0031]取2yL分析樣品進氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)分析，氣相色譜條件:
色譜柱:DB-5MS 毛細(xì)石英柱(30mX 0.25mmX 0.25 μ m)；
流動相:氦氣，流速:1 mL/min ;不分流進樣；進樣口溫度:280°C，程序升溫由80°C開始，保持2 min，以20°C/min的速率升至100°C，再以10°C/min的速率升至200°C，再以20°C/min的速率升至280°C，保持21 min ;質(zhì)譜條件:離子源溫度:200°C ;接口溫度:2800C ;離子化模式:EI ;電子能量:70eV。
[0032]有關(guān)結(jié)果、對比參看圖1 —圖10，其中，由圖8 —圖10中可以看出，經(jīng)本發(fā)明處理后，去除了樹葉中大部分脂類物質(zhì)，避免了有機污染物質(zhì)檢測過程中脂類物質(zhì)的干擾，使檢測具有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度。
【主權(quán)項】
1.一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，包括如下步驟: 固相萃取:將植物葉經(jīng)二氯甲烷超聲萃取的萃取液經(jīng)填裝了吸附劑的固相萃取柱凈化、洗脫，去除磷脂、糖脂和留類脂類物質(zhì)； 氣流吹掃微萃取:將上述經(jīng)固相萃取得到的洗脫液濃縮后經(jīng)氣流吹掃微萃取儀萃取，去除烯萜類脂類物質(zhì)，得到樹葉的氣相色譜質(zhì)譜分析樣品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，其特征在于所述的固相萃取的吸附劑為硅膠和氧化鋁。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，其特征在于所述的固相萃取柱下層的吸附劑為1.5 g硅膠和上層的吸附劑為0.8 g氧化鋁。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，其特征在于所述固相萃取的洗脫過程為先棄去正己烷3 mL，再用正己烷與二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑6 mL洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，其特征在于所述氣流吹掃微萃取的溫度為300 0C，所述氣流吹掃微萃取的時間為5 min，所述氣流吹掃微萃取的萃取溶劑為正己烷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，其特征在于所述的將氣流吹掃微萃取的萃取液定容至100 μ L，得到樹葉的氣相色譜質(zhì)譜分析樣品。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種去除樹葉中脂類物質(zhì)的分離方法，包括固相萃取和氣流吹掃微萃取步驟：將植物葉經(jīng)二氯甲烷超聲萃取的萃取液經(jīng)填裝了吸附劑的固相萃取柱凈化、洗脫，去除磷脂、糖脂和甾類脂類物質(zhì)，其中，吸附劑為下層的1.5g硅膠和上層的0.8g氧化鋁，洗脫過程為先棄去正己烷3mL，再用正己烷與二氯甲烷體積比1:1的混合溶劑6mL洗脫；再將上述經(jīng)固相萃取得到的洗脫液濃縮后經(jīng)氣流吹掃微萃取儀萃取，去除烯萜類脂類物質(zhì)，得到樹葉的氣相色譜質(zhì)譜分析樣品。經(jīng)本發(fā)明處理后，去除了樹葉中大部分脂類物質(zhì)，避免了有機污染物質(zhì)檢測過程中脂類物質(zhì)的干擾，使檢測具有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度（圖10）。
【IPC分類】G01N30-14
【公開號】CN104678030
【申請?zhí)枴緾N201510118318
【發(fā)明人】李東浩, 李會杰, 王洪軍
【申請人】延邊大學(xué)
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月18日