一種中藥不同品質等級的快速鑒別方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領域，具體涉及一種中藥不同品質等級的快速鑒別方法。
【背景技術】
[0002] 中藥治療疾病的最直接的物質基礎是其中所含有的各類化學成分。由于受到基因 變異及環(huán)境條件變化的影響，生物體系代謝物及次生代謝物的成分種類及含量將會發(fā)生顯 著地變化，導致其品質發(fā)生變化。為了保證中藥的品質及其臨床治療疾病穩(wěn)定的有效性， 必須對中藥品質進行定量準確判別。
[0003] 中藥材的品種、產(chǎn)地、生長時期、采集加工工藝及儲存條件的變化，導致其中成分 種類及含量的顯著變化。中藥復方由多味中藥材組成，這可能會導致不同廠家的同一配伍 組成的中藥復方的品質具有比單味藥材更加顯著的變化范圍。
[0004] 中藥品質等級分為兩個方面，其一，中藥材品質等級，目前主要是依據(jù)品種、產(chǎn) 地、尺寸、多種宏觀性狀及單位質量藥材所包含的個頭數(shù)來確定其品質等級。生物效價法亦 用于研宄不同產(chǎn)地的中藥材的品質。有學者利用液相色譜指紋圖譜，人為主觀確定某些參 數(shù)值標準對不同廠家的十全大補丸進行了品質等級研宄，但該法難以保證準確反映其品 質的實際差異。
[0005] 中藥材及復方皆具有多效性，中藥的成分針對不同的疾病作用效果不同。因此，目 前中國藥典中法定采用一種或幾種成分的含量來評價中藥的質量，嚴重缺乏品質及藥效的 代表性，無法得到準確的質量評價結果。無論是中藥材還是中藥復方，目前尚缺乏基于生 物內(nèi)在規(guī)律建立的內(nèi)稟品質等級標準，以擺脫主觀經(jīng)驗，實現(xiàn)對中藥品種的無偏質量評價。 上述諸多問題都說明對中藥材及中藥復方進行準確的品質評價具有重大的意義及應用價 值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的就是為了解決上述問題，提供一種中藥不同品質等級的快速鑒別方 法。
[0007] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：
[0008] 一種中藥不同品質等級的快速鑒別方法，包括以下步驟：
[0009] (1)將待進行品質鑒別的中藥低溫（<4°C )冷凍保存；若為固體樣品，則粉碎處理 所述固體樣品，粉碎后的固體樣品過40~120目篩，然后將過篩后的粉末在50~90°C烘 干1~6h，將烘干后的粉末低溫冷凍保存；固體提取物、液體提取物或提取物濃縮液，則可 直接低溫（<4°C )冷凍保存。
[0010] 固體提取物即采用溶劑提取中藥成分，揮干溶劑后是固體的提取物。
[0011] 液體提取物如揮發(fā)油等。
[0012] (2)使用KBr壓片法測定步驟（1)中處理過的固體樣品或固體提取物的紅外指 紋圖譜；使用液膜法測定步驟（1)中處理過的提取物濃縮溶液或液體提取物的紅外指紋圖 譜；使用色譜法測定提取物濃縮溶液或液體提取物的色譜指紋圖譜。
[0013] (3)確定所有樣品的共有峰組：根據(jù)Shaprio-Wilk W檢驗法，紅外指紋圖譜以指 紋峰波數(shù)為變量、色譜指紋峰以相對保留值為變量，確定每個樣品2個以上指紋圖譜的共 有峰組以及確定不同樣品的指紋圖譜之間的共有峰組，紅外指紋圖譜中每個共有峰組對應 的指紋峰的波數(shù)，采用該組所有指紋峰波數(shù)的平均值表示；色譜指紋圖譜中每個共有峰組 對應的指紋峰的相對保留時間，采用該組所有指紋峰的相對保留時間的平均值表示。
[0014] (4)計算同類樣品所有指紋圖譜中，各個共有峰組對應的峰出現(xiàn)的頻率（即次 數(shù)），簡稱峰頻率。指紋圖譜中指紋峰作為分子層次的多種性狀，其頻率遵從正態(tài)分布，據(jù)此 構建指紋峰的頻率尺度，
[0015] /^/+xSf (1)
[0016] 其中，f?是指紋峰頻率，；7是指紋圖譜中所有指紋峰的平均頻率，Sf是指紋圖譜中 所有指紋峰頻率的標準偏差，-3 g x g 3〇
[0017] (5)確定不同品質等級的指紋峰頻率分布范圍，F(xiàn)j,j = 1，2, 3, 4，其中，優(yōu)級指紋 峰匕，/蘭7+知；良級指紋峰知；中級指紋峰F3, 合格級指紋峰 F4. / = 7 ~0-5 ^
[0018] 中藥不同品質等級判別標準
[0019] 根據(jù)建立的不同品質等級的指紋峰頻率分布范圍：Fj, j = 1，2, 3, 4,確定屬于不同 品質等級的指紋峰，f多匕的指紋峰組作為該中藥的優(yōu)級品質特征，f多F 2的指紋峰組作 為該中藥的良級品質特征，f多F3的指紋峰組作為該中藥的中級品質特征，f多F 4的指紋 峰組作為該中藥的合格級品質特征，f多Fj中的j越大，說明中藥品質越低。
[0020] (6)中藥不同品質等級的快速鑒別
[0021] 根據(jù)雙指標信息理論方程I = _(PglnPg+PalnPva+PblnP vb) (Pa，Pb分別是相互比較的 兩個指紋圖譜a，b中，a，b的變異峰數(shù)與兩個指紋圖譜獨立峰數(shù)的比值；P va與Pvb分別是相 互比較的兩個指紋圖譜a，b中，a，b的變異峰率），依據(jù)其得到的相同品質等級生物體系的 相似度滿足P g> 61%，作為生物體系屬于同一品質等級的定量判別標準，而不同品質等級 樣品的判別規(guī)則如下：
【主權項】
1. 一種中藥不同品質等級的快速鑒別方法，包括以下步驟： (1) 將待進行品質鑒別的中藥在<4°C下冷凍保存；若為固體，則粉碎處理所述固體樣 品，粉碎后的固體樣品過40~120目篩，然后將過篩后的粉末在50~90°C烘干1~6h，將 烘干后的粉末低溫冷凍保存；若為固體提取物、液體提取物或提取物濃縮溶液，則可直接在 <4°C下冷凍保存； (2) 使用KBr壓片法測定步驟（1)中處理過的固體樣品或固體提取物的紅外指紋圖 譜； 使用液膜法測定步驟（1)中處理過的提取物溶液或液體提取物的紅外指紋圖譜； 使用色譜法測定步驟（1)中處理過的提取物溶液或液體提取物的色譜指紋圖譜； ⑶確定所有樣品的共有峰組：根據(jù)Shaprio-WilkW檢驗法，紅外指紋圖譜以指紋峰 波數(shù)為變量、色譜指紋峰以相對保留值為變量，確定每個樣品2個以上指紋圖譜的共有峰 組以及確定不同樣品的指紋圖譜之間的共有峰組，每個共有峰組對應的指紋峰的波數(shù)，采 用該組所有指紋峰波數(shù)的平均值表示；色譜指紋圖譜中每個共有峰組對應的指紋峰的相對 保留時間，采用該組所有指紋峰的相對保留時間的平均值表示； (4) 計算同類樣品所有指紋圖譜中，各個共有峰組對應的峰出現(xiàn)的頻率，簡稱峰頻率， 構建指紋峰的頻率尺度，
兵甲，f定指級_頻準，/定指級圖諧甲所有指紋峰的平均頻率，Sf是指紋圖譜中所有 指紋峰頻率的標準偏差，_3 <x< 3 ; (5) 確定不同品質等級的指紋峰頻率分布范圍，F(xiàn)j,j= 1，2, 3, 4，其中，優(yōu)級指紋 峰匕，/蘭7+務；良級指紋峰F2, /蘭7+〇.55>;中級指紋峰F3, /芎/:合格級指紋峰 F4,f^f -0.5 Sn (6) 中藥不同品質等級的快速鑒別 根據(jù)雙指標信息理論方程I= -(PglnPg+PalnPva+PblnPvb)，Pa，Pb分別是相互比較的兩 個指紋圖譜a，b中，a，b的變異峰數(shù)與兩個指紋圖譜獨立峰數(shù)的比值；Pva與Pvb分別是相互 比較的兩個指紋圖譜a，b中，a，b的變異峰率；依據(jù)其得到的相同品質等級生物體系的相似 度滿足Pg> 61%，作為生物體系屬于同一品質等級定量判別標準，而不同品質等級樣品的 判別規(guī)則如下：
2. 根據(jù)權利要求1所述的鑒別方法，其特征在于：步驟（1)中所述粉碎處理過的固體 樣品，過80目篩，在60°C下烘干2h。
3. 根據(jù)權利要求1所述的鑒別方法，其特征在于：所述步驟（2)中KBr壓片法測定指 紋圖譜的過程如下：取1~30mg經(jīng)步驟（1)處理后的樣品粉末或采用溶劑提取的固體成分 于研缽中，再取樣品質量60~200倍的KBr粉末于研缽中，與樣品混合，并且在紅外燈下研 磨均勻；將適量研磨好的樣品裝于干燥的模具內(nèi)，放入壓片機中在10~20MPa壓力下加壓， 維持1~4min，放氣卸壓后，取出模具脫模，得到了KBr壓片；全部用KBr粉末并且按以上 步驟制片，用做參照物；測量，每個樣品平行測定2~15次。
4. 根據(jù)權利要求3所述的鑒別方法，其特征在于：所述KBr粉末的質量為樣品質量的 100 倍。
5. 根據(jù)權利要求3所述的鑒別方法，其特征在于：將適量研磨好的樣品裝于干燥的模 具內(nèi)，放入壓片機中在14MPa壓力下加壓。
6. 根據(jù)權利要求1所述的鑒別方法，其特征在于：所述步驟⑵中的液膜法為用KBr晶 體片做載體，以空氣為參照物，采用液膜法測定藥品的紅外指紋圖譜的方法，每個樣品平行 測定2~15次。
7. 根據(jù)權利要求6所述的鑒別方法，其特征在于：每個樣品平行測定9~12次；紅外 指紋圖譜以14~40CHT1平滑處理，標峰靈敏度范圍是50~90。
8. 根據(jù)權利要求7所述的鑒別方法，其特征在于：所述紅外指紋圖譜以~25CHT1平滑 處理，測定脂溶性提取物的標峰靈敏度范圍為50~70,中等極性提取物的標峰靈敏度范圍 為60~80,強極性提取物的標峰靈敏度范圍為70~90,中藥復方粉末的標峰靈敏度范圍 為60~80。
9. 根據(jù)權利要求1所述的鑒別方法，其特征在于：所述步驟（2)中采用色譜法測定每 個中藥樣品提取物濃縮液或液體提取物的色譜指紋圖譜，每個樣品平行測定9~12次。
10. 根據(jù)權利要求1所述的鑒別方法，其特征在于：所述步驟（6)中中藥的不同品質等 級的鑒別順序為：依次進行優(yōu)級、良級、中級以及合格級鑒別。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種中藥不同品質等級的快速鑒別方法，該方法依據(jù)反映中藥體系內(nèi)在成分含量、種類和結構信息的指紋圖譜信息，確定反映不同品質等級中藥的信息閾值標準，建立中藥的不同品質等級的科學快速鑒別方法。通過提出不同品質等級中藥的指紋峰頻率閾值范圍：優(yōu)級x＝1；良級x＝0.5；中級x＝0；合格等級x＝-0.5，由此確定研究的所有同類樣品的指紋圖譜中，屬于每個品質等級的指紋峰數(shù)。然后確定每個樣品指紋圖譜中屬于不同品質等級的指紋峰數(shù)，根據(jù)建立的中藥優(yōu)級品標準、良級品標準、中級品標準、合格級品標準，確定每個樣品所屬的品質等級，實現(xiàn)對中藥品質等級的精確快速鑒別。
【IPC分類】G01N33-15
【公開號】CN104698144
【申請?zhí)枴緾N201510137610
【發(fā)明人】鄒華彬
【申請人】山東大學
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年3月26日