一種電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)療診斷儀器用試劑，尤其涉及一種電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液 及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，針對人體中疾病相關(guān)痕量物質(zhì)的定量檢測常用的方法有化學發(fā)光免疫法和 電化學發(fā)光免疫法，化學發(fā)光免疫發(fā)和電化學發(fā)光免疫法不但對檢測者身體無害，檢測敏 感度和精密度較高，而且試劑穩(wěn)定，并可進行全自動分析，是理想的標記免疫測定方法。
[0003] 然而電化學發(fā)光免疫法以其高靈敏度(可達KTn~l(r17mol/L)和良好的重復性得 到了廣泛的應用。電化學發(fā)光免疫法分為有機化合物的發(fā)光體系和無機物的發(fā)光體系。有 機發(fā)光物有酰肼類化合物、吖啶酯和光澤精等，無機化合物電化學發(fā)光體系中，最典型的發(fā) 光試劑是釕聯(lián)吡啶化合物，該試劑在水溶液和有機溶液中的溶解度好，發(fā)光效率高，可進行 可逆的單電子反應，在電化學發(fā)光理論和應用研究中占有重要的地位。
[0004] 電化學發(fā)光反應的原理為：電化學發(fā)光（electro - chemiluminescence, ECL)是 一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應，實際上包括了電化學和化學發(fā)光兩 個過程?；瘜W發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3] 2+和電子供體三丙胺（TPA)在陽電極表面同 時各失去一個電子發(fā)生氧化反應。二價的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三價，后者是一種強氧 化劑。TPA被氧化成陽離子自由基TPA+%后者很不穩(wěn)定，自發(fā)地失去一個質(zhì)子（H+ )，形成 自由基TPA%這是一種非常強的還原劑。這兩個高反應基團在電極表面迅速反應，三價的 [Ru(bpy)3] 3+被還原形成激發(fā)態(tài)的二價[Ru(bpy)3] 2+%能量來源于[Ru(bpy)3]3+和TPA*之 間存在的高電化學電位差。TPA #自身被氧化成二丙胺和丙醛。接著激發(fā)態(tài)的[Ru(bpy)3] 2+* 衰減成基態(tài)的[Ru (bpy) 3]2+，同時發(fā)射一個波長620nm的光子。這一過程在電極表面周而復 始地進行，產(chǎn)生許多光子，使光信號得以增強；以三聯(lián)吡啶釕作為標記物，標記抗原或抗體， 通過免疫反應及ECL反應，即可進行電化學發(fā)光免疫測定。
[0005] 羅氏電化學發(fā)光免疫三丙胺清洗緩沖液（簡稱羅氏緩沖液）是適用于羅氏電化學 發(fā)光分析儀的緩沖液，該緩沖液不需要專門灌注或定標，可以長期使用延長測量池壽命。羅 氏的電化學發(fā)光分析儀用緩沖液通過以三聯(lián)吡啶釕作為標記物，標記抗原或抗體，檢測激 素、甲狀腺功能、腫瘤標記物、傳染病、心肌標記物和其他的骨標志，糖尿病和貧血等等疾病 的指標，在臨床上有十分重要的意義。目前美國羅氏公司（ROCHE)實現(xiàn)了三丙胺（TPA)緩沖 液的工業(yè)化，該三丙胺緩沖液配方為磷酸鹽緩沖液300mmol/L、三丙胺180mmol/L、去垢劑 =0. 1%、防腐劑，pH6. 8。該配方三丙胺的濃度為25g/L，使用的三丙胺濃度較高，三丙胺的 蒸氣或霧對眼、粘膜和上呼吸道有和皮膚都有很強的刺激性，而且三丙胺的揮發(fā)性很強，對 操作人員和環(huán)境存在均較大的危害，不利于該試劑的推廣和應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液長期依賴進口的現(xiàn)狀，試劑成 本高，三丙胺用量多的缺陷，本發(fā)明目的在于提供一種成本低廉、三丙胺量少，試劑性能優(yōu) 越的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明提供的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液，其組分和含量包括：磷酸二 氫鉀40. 0-50.0 g/L、吐溫20 0.5-3. Og/L、十二烷基聚乙二醇醚0.1-1. 0 g/L、聚多卡 醇1.0-5.(^/1、三丙胺12.0-16.(^/1、檸檬酸0.1-1.0§/1，所述的緩沖液的口11值為 6. 5-7. 0。
[0008] 本發(fā)明的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液，優(yōu)選的組分和含量為：磷酸二氫 鉀45. 0-48.0 g/L、吐溫20 0.5-1. 5g/L、十二烷基聚乙二醇醚0.4-0. 6g/L、聚多卡醇 1. 0-2. Og/L、三丙胺14. 0-16. 0 g/L、檸檬酸0? 5-0. 8g/L，所述的緩沖液的pH值為6. 5-7. 0。
[0009] 本發(fā)明的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液，進一步優(yōu)選的組分和含量為：磷酸二 氫鉀46.8 g/L、吐溫20 l.Og/L、十二烷基聚乙二醇醚0.5g/L、聚多卡醇1.009g/L、三丙胺 15g/L、檸檬酸0. 6085g/L，所述的緩沖液的pH值為6. 8。
[0010] 另外，本發(fā)明還提供了一種電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液的制備方法，包括如 下步驟： 按配方稱取所需磷酸二氫鉀、檸檬酸、聚多卡醇、吐溫20和十二烷基聚乙二醇醚放入 燒杯中，加入適量的去離子水，加熱攪拌至完全溶解，冷卻后加入三丙胺，攪拌20min，攪拌 均勻后用去離子水定容至1L，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為6. 5-7.0,過濾，即為緩沖液。
[0011] 本發(fā)明的緩沖液經(jīng)研究新加入聚多卡醇和吐溫20,同時減少三丙胺的用量，三丙 胺的濃度為為12. 0-16. Og/L，而羅氏的三丙胺的濃度達25g/L，檢測人員長期接觸該緩沖 液，對其身體造成極大的影響，所以，降低毒性較大，揮發(fā)性強的三丙胺的濃度是保證檢測 人員身體健康的重要保障。
[0012] 本發(fā)明的磷酸二氫鉀主要起緩沖液的作用，維持反應體系的pH值，而且本發(fā)明聚 多卡醇、吐溫20和十二烷基聚乙二醇醚主要是起增強發(fā)光的作用，提高發(fā)光效率，可以減 少三丙胺的用量。
[0013] 甲胎蛋白（AFP)是一種糖蛋白，正常情況下，這種蛋白主要來自胚胎的肝細胞， 胎兒出生后約兩周甲胎蛋白從血液中消失，因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20 微克/升，AFP主要是檢測診斷原發(fā)性肝癌的一個特異性臨床指標，本發(fā)明實施例2的電 化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液與羅氏緩沖液的AFP項目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性R達到 0.9984。
[0014] 癌胚抗原（CEA)是大腸癌組織產(chǎn)生的一種糖蛋白，作為抗原可引起患者的免疫反 應。可廣泛存在于內(nèi)胚葉起源的消化系統(tǒng)癌，也存在于正常胚胎的消化管組織中，在正常人 血清中也可有微量存在。癌胚抗原是一個廣譜性腫瘤標志物，它能向人們反映出多種腫瘤 的存在，對大腸癌、乳腺癌和肺癌的療效判斷、病情發(fā)展、監(jiān)測和預后估計是一個較好的腫 瘤標志物，本發(fā)明實施例2的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液與羅氏緩沖液的CEA項目的 測試結(jié)果對比相關(guān)線性R達到0. 9987。
[0015] 血清游離三碘甲腺原氨酸（FT3)，是診斷甲亢最靈敏的一項指標，血清游離甲狀 腺素（FT4)，是反應甲狀腺功能狀態(tài)的標志物，促甲狀腺激素（TSH)等項目，本發(fā)明實施例2 的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液與羅氏緩沖液的FT3項目和FT4項目的測試結(jié)果對比相 關(guān)線性R均達到0. 99以上，表現(xiàn)為良好的相關(guān)性。
[0016] 孕酮（PROG)是內(nèi)分泌失調(diào)檢查中重要的一項檢查，如果過低則表明垂體和卵巢功 能低下，可能為無排卵或月經(jīng)不調(diào)，或者先兆流產(chǎn)。本發(fā)明實施例2的電化學發(fā)光免疫分析 儀用緩沖液與羅氏緩沖液的PR0G項目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性R達到0. 9999。
[0017] 本發(fā)明實施例1制備的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液與羅氏緩沖液的AFP、 CEA、FT3、FT4、TSH和PR0G項目的測試結(jié)果對比相關(guān)線性R可以達到0. 98以上，本發(fā)明實 施例3制備的電化學發(fā)光免疫分析儀用緩沖液與羅氏緩沖液的AFP