一種鑒定恒河猴血型的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種鑒定恒河猴血型的方法。 技術(shù)背景
[0002] 近似于人類,恒河猴也有AB0血型系統(tǒng)。但和人類及少部分靈長類動物(如類人 猿)不同,恒河猴的AB0血型抗原都表達(dá)在組織器官內(nèi),其外周血紅細(xì)胞上不表達(dá)AB抗原, 或是非常弱。這些血型抗體與移植器官上表達(dá)的AB抗原結(jié)合同樣可以造成類似于人類AB0 血型不合的同種異體器官移植排斥反應(yīng)。
[0003] 由于恒河猴的AB0血型抗原并不表達(dá)在外周血紅細(xì)胞上,且血漿中的纖維蛋白原 和人-猴種屬間非特異性抗體都會對部分檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾,容易產(chǎn)生假陽性或者假陰性 結(jié)果。所以恒河猴血型鑒定一直較難。
[0004] 目前,檢測恒河猴血型最可靠的方法是組織切片免疫組織化學(xué)染色法,但是由于 其有創(chuàng)性,標(biāo)本不易獲得,故一般只用于回顧驗(yàn)證性研究。其他傳統(tǒng)的一些方法如傳統(tǒng)試管 法抗球蛋白試驗(yàn)和毛果云香堿用藥后唾液的AB抗原鑒定,這些方法存在不易標(biāo)準(zhǔn)化,人為 因素大,影響因素多的缺點(diǎn),容易出現(xiàn)假陽性或者假陰性,造成血型判斷不能明確或者判斷 錯誤。
[0005] 尋找更準(zhǔn)確便捷恒河猴類人AB0血型的方法,對于某些相關(guān)科研領(lǐng)域極為重要, 對更加全面的了解恒河猴的血型系統(tǒng)特點(diǎn)也有重要的意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 針對上述問題,本發(fā)明提供了一種鑒定恒河猴血型的新方法,利用正常人的AB0 抗原鑒定恒河猴血清中的抗體。
[0007] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn): 一種鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,先去除恒河猴血清標(biāo)本中存在的抗人非特 異性抗體,再分別利用正常人的A型血紅細(xì)胞與B型血紅細(xì)胞與處理后的血清中的抗體進(jìn) 行抗原_抗體凝血測試,根據(jù)是否產(chǎn)生凝集現(xiàn)象來判斷待測恒河猴的血型。
[0008] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法,包括以下步驟: (1) 去除恒河猴血清標(biāo)本中存在的抗人非特異性抗體; (2) 將經(jīng)步驟(1)處理后的血清分別與正常人的A型血全血和B型血全血混合; (3) 根據(jù)步驟(2)中混合后的凝集情況判斷待測恒河猴的血型:若只在與B型血抗原 混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為A型血,若只在與A型血抗原混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為B型血,若 兩種混合條件下均出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為0型血,若兩種混合條件下均不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為AB 型血。
[0009] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法,包括以下步驟: (1) 去除恒河猴血清標(biāo)本中存在的抗人非特異性抗體; (2) 將經(jīng)步驟(1)處理后的血清分別與正常人的A型血紅細(xì)胞和B型血紅細(xì)胞混合; (3)根據(jù)步驟(2)中混合后的血細(xì)胞凝集情況判斷待測恒河猴的血型:若只在與B型 血抗原混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為A型血,若只在與A型血抗原混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為B 型血,若兩種混合條件下均出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為〇型血,若兩種混合條件下均不出現(xiàn)凝集現(xiàn) 象則為AB型血。
[0010] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,在凝血測試時還可以向所述去除 抗人非特異性抗體后的血清中加入正常人的A型血紅細(xì)胞作為陰性對照試驗(yàn),以排除假陽 性結(jié)果。
[0011] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,在凝血測試之前還包括去除恒河 猴血液標(biāo)本中存在的纖維蛋白原的步驟。
[0012] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,在所述步驟(1)中將恒河猴的血清 與正常人0型血紅細(xì)胞吸附處理后取清液。通過吸附處理可同時消除血漿內(nèi)的纖維蛋白原 和人-猴種屬間非特異性抗體。
[0013] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,所述吸附處理中,血清與正常人0 型紅細(xì)胞的體積是1:1。
[0014] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,所述吸附處理具體為:取恒河猴血 清,與正常人0型紅細(xì)胞混勻后,室溫孵育60min,8000r/min離心5min后取上清,得吸附后 血清。
[0015] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,所述步驟(2)中待測血清與紅細(xì)胞 的混合體積比為1:1。
[0016] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,通過顯微鏡觀察凝集現(xiàn)象是否產(chǎn) 生。
[0017] 作為可選方式,上述鑒定恒河猴血型的方法中,通過玻片凝集法進(jìn)行抗原-抗體 凝血測試。進(jìn)一步,所述玻片凝集法具體為:玻片上先加標(biāo)準(zhǔn)AB紅細(xì)胞,再加吸附后血清, 3min后通過顯微鏡觀察是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象來判斷血型。
[0018] 本說明書中公開的所有特征,或公開的所有方法或過程中的步驟,除了互相排斥 的特征和/或步驟以外,均可以以任何方式組合。
[0019] 本發(fā)明的有益效果: 本發(fā)明的通過使正常人紅細(xì)胞與處理過的恒河猴血清混合,觀察紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象, 用于判斷恒河猴的血型。該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確,實(shí)驗(yàn)操作簡單,可用于科研及交叉配血的預(yù) 防并可為臨床個體化治療提供幫助。
[0020]
[0021]
【具體實(shí)施方式】: 以下通過實(shí)施例的【具體實(shí)施方式】再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng) 當(dāng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。在不脫離本發(fā)明的精神和原則之 內(nèi)做的任何修改,以及根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的等同替換或者改進(jìn),均 應(yīng)包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0022] 實(shí)施例1 選取20只恒河猴,全血采集后,離心出血清標(biāo)本,用同體積正常人標(biāo)準(zhǔn)的0型紅細(xì)胞, 吸附恒河猴血清中存在的抗人非特異性抗體。在玻片上分別滴定量的正常人標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞, 在紅細(xì)胞上再滴加同體積吸附后的血清,使血清和紅細(xì)胞混勻,在顯微鏡的低倍鏡下觀察 紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。若鏡下出現(xiàn)成塊,顆粒狀或者細(xì)油狀的凝塊,則表明紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集;若 鏡下紅細(xì)胞分布均勻,則表明未出現(xiàn)凝集。根據(jù)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象來判斷恒河猴最終血型(如表1所 示)。
[0023] 表1血型判斷鋤_
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,先去除恒河猴血清標(biāo)本中存在的抗人非 特異性抗體,再分別利用正常人的A型血紅細(xì)胞與B型血紅細(xì)胞與處理后的血清中的抗體 進(jìn)行抗原-抗體凝血測試,根據(jù)是否產(chǎn)生凝集現(xiàn)象來判斷待測恒河猴的血型。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,包括以下步驟: (1) 去除恒河猴血清標(biāo)本中存在的抗人非特異性抗體; (2) 將經(jīng)步驟(1)處理后的血清分別與正常人的A型血全血和B型血全血混合; (3) 根據(jù)步驟(2)中混合后的凝集情況判斷待測恒河猴的血型:若只在與B型血抗原 混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為A型血,若只在與A型血抗原混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為B型血,若 兩種混合條件下均出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為O型血,若兩種混合條件下均不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為AB 型血。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,包括以下步驟: (1) 去除恒河猴血清標(biāo)本中存在的抗人非特異性抗體; (2) 將經(jīng)步驟(1)處理后的血清分別與正常人的A型血紅細(xì)胞和B型血紅細(xì)胞混合; (3) 根據(jù)步驟(2)中混合后的血細(xì)胞凝集情況判斷待測恒河猴的血型:若只在與B型 血抗原混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為A型血,若只在與A型血抗原混合后出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為B 型血,若兩種混合條件下均出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則為〇型血,若兩種混合條件下均不出現(xiàn)凝集現(xiàn) 象則為AB型血。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,在凝血測試之前還包 括去除恒河猴血液標(biāo)本中存在的纖維蛋白原的步驟。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,在所述步驟(1)中將恒 河猴的血清與正常人O型血紅細(xì)胞吸附處理后取清液。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,所述吸附處理中,血清 與正常人O型紅細(xì)胞的體積是1:1。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,所述吸附處理具體為: 取恒河猴血清,與正常人O型紅細(xì)胞混勻后,室溫孵育60min,8000r/min離心5min后取上 清,得吸附后血清。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,所述步驟(2)中待測血 清與紅細(xì)胞的混合體積比為1:1。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,通過顯微鏡觀察凝集 現(xiàn)象是否產(chǎn)生。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定恒河猴血型的方法,其特征在于,通過玻片凝集法進(jìn)行 抗原-抗體凝血測試。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種恒河猴血型鑒定方法,是一種恒河猴鑒定的實(shí)驗(yàn)方法,屬生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種用于恒河猴類人ABO血型的鑒定方法。本發(fā)明的主要特點(diǎn)在于通過使用正常人標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞與處理過的恒河猴血清,觀察紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象,用于判斷恒河猴的血型。該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確,實(shí)驗(yàn)操作簡單,主要用于科研及交叉配血的預(yù)防并可為臨床個體化治療提供幫助。
【IPC分類】G01N33-80
【公開號】CN104698193
【申請?zhí)枴緾N201510078280
【發(fā)明人】曾文, 吳英, 王毅, 龔立
【申請人】四川普萊美行之生物科技有限公司
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年2月14日