一種體外簡(jiǎn)便模擬骨密度可控下降及快速檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開(kāi)了一種體外簡(jiǎn)便模擬骨密度可控下降及快速檢測(cè)方法。本發(fā)明通過(guò)浸泡法，按照不同的時(shí)間段用拉曼測(cè)出圖譜，得出骨密度下降的速率對(duì)比，尤其實(shí)驗(yàn)中涉及到了一個(gè)可控骨密度下降的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]骨組織由很多種細(xì)胞成分以及大量鈣化的細(xì)胞間質(zhì)組成。骨的形態(tài)和功能是互相制約的，由于骨功能的不同，骨有不同的形態(tài)?；究煞譃樗念?長(zhǎng)骨、短骨、扁骨和不規(guī)則骨。骨的鈣化細(xì)胞間質(zhì)又稱骨基質(zhì)，由有機(jī)成分和無(wú)機(jī)成分構(gòu)成。
[0003]骨是動(dòng)物體內(nèi)最堅(jiān)硬的組織，能承受很大的壓力和張力，并富有彈性。骨的物理特性不僅取決于骨的形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，而且還與骨的化學(xué)成分有密切關(guān)系。骨由有機(jī)物和無(wú)機(jī)物構(gòu)成，有機(jī)物決定其彈性，無(wú)機(jī)物決定其硬度。有機(jī)物的主要成分有膠原纖維、骨粘蛋白和硫酸軟骨素。骨中的無(wú)機(jī)物又稱骨鹽，主要成分有磷酸鈣和碳酸鈣等，它們以羥磷灰石[Ca5(PO4)3OH]和無(wú)定形的膠體磷酸鈣等形式分布于有機(jī)物中。如果將骨除去有機(jī)物，則骨強(qiáng)度變低骨易碎。骨中的有機(jī)物與無(wú)機(jī)物的比例不是一成不變的。一般成年人骨含有2/3的無(wú)機(jī)物和1/3的有機(jī)物。
[0004]拉曼成像與化學(xué)發(fā)光成像不同，不需要特殊的發(fā)光標(biāo)記物，并且能夠提供檢測(cè)范圍的信息，此外相對(duì)于紅外光譜來(lái)說(shuō)，拉曼光譜可以實(shí)現(xiàn)更高的分辨率。專利CN2657585Y公開(kāi)了一種涉及骨密度測(cè)量用X射線前臂骨一像轉(zhuǎn)換裝置。裝置殼體中設(shè)有X射線發(fā)生器，能將骨像轉(zhuǎn)換模擬量變換為數(shù)字信號(hào)輸出而提高分辨率。輻照盒能夠容納包括手掌在內(nèi)的前臂，其輻照部位的擴(kuò)展有利于檢測(cè)骨密度。這種技術(shù)相對(duì)于本發(fā)明過(guò)程較為繁瑣，計(jì)算量大，成本較高，不夠客觀直接。
[0005]拉曼光譜在骨組織研宄中的主要應(yīng)用目前任然停留在基礎(chǔ)研宄上，然而由于骨組織所處位置的特殊性，使得通過(guò)拉曼技術(shù)進(jìn)行研宄存在很大的困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明旨在發(fā)明一種體外簡(jiǎn)便模擬骨密度可控下降及快速檢測(cè)方法，較前人所做的工作，不僅具備成本低，操作簡(jiǎn)單方便的優(yōu)點(diǎn)，并且該方法通過(guò)拉曼圖譜檢測(cè)，檢測(cè)線性范圍廣泛，選擇性好，結(jié)果精確可靠，具有極大的潛力可以推廣使用。
[0007]本發(fā)明的一種體外簡(jiǎn)便模擬骨密度可控下降及快速檢測(cè)方法，是將骨粉浸泡于乙二胺四乙酸二鈉的模擬體液溶液中，采集其衰減拉曼光譜，以960cm-l處吸收峰為特征峰，根據(jù)峰高值測(cè)定骨密度下降的速率。具體包含了以下的步驟:
[0008]I)在室溫和常壓條件下將一定量的乙二胺四乙酸二鈉溶于一定量模擬體液中，可以加熱加快溶解，用磁力攪拌器進(jìn)行5min的充分?jǐn)嚢琛Ｒ叶匪囊宜岫c質(zhì)量在3-8g之間，模擬體液體積在50ml-150ml之間。
[0009]2)在室溫和常壓條件下將一定量的疊氮化鈉溶解于步驟I)中。磁力攪拌器充分?jǐn)嚢?，使疊氮化鈉盡可能均勻分散在體系中。疊氮化鈉質(zhì)量在0.5-lg之間。
[0010]3)將Ig骨粉浸泡在步驟2)配置好的溶液中一定時(shí)間。時(shí)間在1-4周之間。
[0011]4)設(shè)置拉曼檢測(cè)條件。
[0012]5)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:在步驟3)得到的樣品的濃度范圍內(nèi)至少選取5個(gè)時(shí)間段的樣品，采集各個(gè)時(shí)間的拉曼圖譜，測(cè)得各樣品在960cm—1吸收峰峰高值Hi，繪制H1-Ti標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0013]6)采集步驟3)得到的樣品的拉曼光譜，測(cè)其在960cm—1的吸收峰峰高值。
[0014]7)根據(jù)步驟3)得到的樣品960cm—1吸收峰的峰高值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算骨密度下降的速率。
[0015]所述步驟4)至步驟7)中檢測(cè)條件為:掃描范圍βΟΟΟ-δΟΟαιΓ1，曝光時(shí)間l_2s，曝光次數(shù)30-60次，背景曝光次數(shù)512次，激光780nm，光闌50，光柵400刻線/mm。
[0016]所述步驟2)中疊氮化鈉的濃度范圍為I %。_2%。(wt%0)。
[0017]本發(fā)明通過(guò)浸泡法，以乙二胺四乙酸二鈉的模擬體液溶液中為反應(yīng)體系，稱取一定量的骨粉浸泡，按照不同的時(shí)間段用拉曼測(cè)出圖譜，得出骨密度下降的速率對(duì)比。該體外模擬方法較之前傳統(tǒng)的方法不僅具備成本低，操作簡(jiǎn)單方便的優(yōu)點(diǎn)，并且該方法通過(guò)拉曼圖譜檢測(cè)，檢測(cè)線性范圍廣泛，選擇性好，結(jié)果可靠；填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)骨質(zhì)下降的方法的不足。
【附圖說(shuō)明】
[0018]圖1是本發(fā)明實(shí)施例1-6的拉曼圖。
[0019]圖2是本發(fā)明實(shí)施例1-6的H1-Ti標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0020]圖3是本發(fā)明實(shí)施例1和例7-11的拉曼圖。
[0021]圖4是本發(fā)明實(shí)施例1和例7-11的H1-Ti標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022]為了使本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)、發(fā)明目的及方案的優(yōu)點(diǎn)更加直觀，結(jié)合以下具體的實(shí)施例子，對(duì)本發(fā)明方案作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。以下的實(shí)施例子是在本發(fā)明的方案下實(shí)施，且本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
[0023]實(shí)施例1
[0024]在室溫和常壓條件下將未浸泡的骨粉樣品，設(shè)置拉曼檢測(cè)條件:掃描范圍3000-500cm_1,曝光時(shí)間l_2s，曝光次數(shù)30-60次，背景曝光次數(shù)512次，激光780nm，光闌50，光柵400刻線/mm。采集樣品1_0的拉曼圖譜，測(cè)得樣品1_0在960CHT1吸收峰峰高值
H1-Q0
[0025]實(shí)施例2
[0026]在室溫和常壓條件下將3.7224g的乙二胺四乙酸二鈉溶于10ml模擬體液中，可以加熱加快溶解，用磁力攪拌器進(jìn)行5min的充分?jǐn)嚢瑁辉谑覝睾统簵l件下將0.2g的疊氮化鈉溶解于上述溶液中。磁力攪拌器充分?jǐn)嚢瑁汞B氮化鈉盡可能均勻分散在體系中。將Ig骨粉浸泡在配置好的0.1mol溶液中I周時(shí)間。設(shè)置拉曼檢測(cè)條件:掃描范圍βΟΟΟ-δΟΟαιΓ1，曝光時(shí)間l_2s，曝光次數(shù)30-60次，背景曝光次數(shù)512次，激光780nm，光闌50，光柵400刻線/mm。采集樣品1-1的拉曼圖譜，測(cè)得樣品1_1在960(^_1吸收峰峰高值!11_1。
[0027]實(shí)施例3
[0028]在室溫和常壓條件下將3.7224g的乙二胺四乙酸二鈉溶于10ml模擬體液中，可以加熱加快溶解，用磁力攪拌器進(jìn)行5min的充分?jǐn)嚢瑁辉谑覝睾统簵l件下將0.2g的疊氮化鈉溶解于上述溶液中。磁力攪拌器充分?jǐn)嚢?，使疊氮化鈉盡可能均勻分散在體系中。將Ig骨粉浸泡在配置好的0.1mol溶液中2周時(shí)間。設(shè)置拉曼檢測(cè)條件:掃描范圍βΟΟΟ-δΟΟαιΓ1，曝光時(shí)間l_2s，曝光次數(shù)30-60次，背景曝光次數(shù)512次，激光780nm，光闌50，光柵400刻線/mm。采集樣品1-1的拉曼圖譜，測(cè)得樣品1_1在960(^_1吸收峰峰高值!11_2。
[0029]實(shí)施例4
[0030]在室溫和常壓條件下將3.7224g的乙二胺四乙酸二鈉溶于10ml模擬體液中，可以加熱加快溶解，用磁力攪拌器進(jìn)行5min的充分?jǐn)嚢?；在室溫和常壓條件下將0.2g的疊氮化鈉溶解于上述溶液中。磁力攪拌器充分?jǐn)嚢?，使疊氮化鈉盡可能均勻分散在體系中。將Ig骨粉浸泡在配置好的0.1mol溶液中3周時(shí)間。設(shè)置拉曼檢測(cè)條件:掃描范圍βΟΟΟ-δΟΟαιΓ1，曝光時(shí)間l_2s，曝光次數(shù)30-60次，背景曝光次數(shù)512次，激光780nm，光闌50，光柵400刻線/mm。采集樣品1-1的拉曼圖譜，測(cè)得樣品1_1在960(^_1吸收峰峰高值!11_3。
[0031]實(shí)施例5
[0032]在室溫和常壓條件下將3.7224g的乙