一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法，屬于紡織材料檢驗技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前纖維定性使用的國內(nèi)標(biāo)準很多，標(biāo)準FZ/T01057. 1-2007規(guī)定紡織纖維 鑒別試驗方法的一些共同性的技術(shù)要求，給出了纖維鑒別試驗的一般性程序。FZ/ T01057. 2-2007是根據(jù)纖維燃燒時的氣味、殘留物的狀態(tài)來分辯的。FZ/T01057. 3-2007根 據(jù)纖維的外觀形態(tài)包括縱向和橫向形態(tài)來分辯的。FZ/T01057. 4-2007根據(jù)纖維在不同溶液 中的溶解性來分辯的。FZ/T01057. 5-2007根據(jù)纖維的染色性來分辯的。FZ/T01057. 6-2007 根據(jù)不同的纖維其熔點不同來分辯的。FZ/T01057. 7-2007根據(jù)不同的纖維的密度不同來分 辯的。GB/T16988-1997標(biāo)準給出了各種毛纖維的縱向形態(tài)，通過在顯微鏡下觀察其鱗片的 大小、厚度、密度、條干均勻度等加以區(qū)分。此外，還有SN/T相關(guān)標(biāo)準中對新型纖維的定性 檢測方法。除了以上的標(biāo)準方法外，還有一種非常規(guī)的纖維定性方法，就是手感目測法。然 而隨著紡織面料的纖維組分越來越多，由原來的單、雙組分向多組分發(fā)展、由交織向混紡發(fā) 展。鑒別纖維成分的難度相應(yīng)提高。因此，需要增加新的纖維鑒別手段、加強纖維檢驗技術(shù) 領(lǐng)域中新的檢測方案的制定方能跟上紡織品發(fā)展的趨勢。
[0003] 采用生物化學(xué)與分子生物學(xué)中最新發(fā)展起來的一種測定蛋白質(zhì)的方法一一考馬 斯亮藍法對蛋白質(zhì)纖維中的蛋白質(zhì)進行定性檢測，考馬斯亮藍法是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié) 合的原理設(shè)計的?？捡R斯亮藍G-250是一種有機染料，在游離狀態(tài)下呈紅色，在稀酸溶液中 與蛋白質(zhì)的堿性氨基酸和芳香族氨基酸殘基結(jié)合后變成藍色，其最大吸收波長從465nm變 成595nm，蛋白質(zhì)在1~1000 μ g范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下的吸光度與 蛋白質(zhì)含量成正比，故可用于蛋白質(zhì)的定性與定量測定。該方法具有靈敏度高、測定快速、 簡便，干擾物質(zhì)少等突出優(yōu)點，是鑒別纖維中是否含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)纖維方法的新突破。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在提供一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法。
[0005] 本發(fā)明所采用的定性檢測技術(shù)方案為：
[0006] 步驟1 :考馬斯亮藍G-250溶液的制備。
[0007] 精密稱取考馬斯亮藍6-25〇1〇〇.〇〇11^，加入95%乙醇5〇1^，再加入1〇〇1^85%0￥/ V)磷酸，用蒸餾水稀釋定容至lOOOmL。
[0008] 步驟2 :纖維樣品洛液的制備。
[0009] ①精密稱取待測纖維樣品X g于試管中，于20°C時用l.Omol/L次氯酸鈉 y mL將 樣品溶解。
[0010] ②將溶解樣品包含未溶解纖維一同置于離心機中進行離心，速度設(shè)定為4000r/ min，時間為10min。待離心完畢后，用移液器移取z mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸餾水 至刻度，混合均勻。
[0011] ③從容量瓶中分別取出1.0 mL的樣品于另外4個試管中，分別加入5. OmL考馬斯 亮藍溶液，混勻。
[0012] 步驟3 :樣品中蛋白質(zhì)的定性鑒別。
[0013] ①任取其中2個試管于2~30min內(nèi)觀察溶液顏色變化，如果考馬斯亮藍溶液由 紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色，說明纖維中可能含有蛋白質(zhì)，如果顏色轉(zhuǎn)化不明顯，也不能說明纖維中不 含蛋白質(zhì)，均需進行進一步分光光度測試。
[0014] ②將剩余2個試管中的溶液以空白試劑為參照，分別測定其最大吸收波長Xmax。 如果最大吸收波長是595nm或在其附近，那么結(jié)合考馬斯亮藍溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色的顯 色現(xiàn)象，在排除干擾物的前提下說明該纖維中含有蛋白質(zhì)。還可以根據(jù)最大吸收波長下的 吸光度值以及待測溶液的稀釋倍數(shù)推斷蛋白質(zhì)含量的高低。
[0015] 測試完畢，對結(jié)果進行記錄、分析。
[0016] 發(fā)明中分光光度測試所用的比色皿應(yīng)該是塑料或玻璃的，用前應(yīng)保證清洗干凈， 禁止使用石英比色皿。
[0017] 發(fā)明中考馬斯亮藍法鑒別纖維中是否含有蛋白質(zhì)，比其他方法靈敏度高，抗干擾 小，但檢測仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定、如Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS)等，因 此，被測纖維樣品應(yīng)先充分皂洗、水洗后再進行溶解測試。
[0018] 發(fā)明中利用蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250間的快速顯色反應(yīng)及蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物 在595nm具有最大吸收波長的特點，建立了蛋白質(zhì)的光學(xué)分析技術(shù)，對纖維進行是否含有 蛋白質(zhì)的定性鑒別。測定過程簡單快速，2min即可產(chǎn)生顯色反應(yīng)，30min完成測試。
【具體實施方式】
[0019] 以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進一步描述，這些實施例只為清楚公開本發(fā)明，但 本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此。
[0020] 實施例1 :對已知蛋白質(zhì)纖維一一羊毛進行測試。
[0021] 按照技術(shù)方案中步驟1制備好考馬斯亮藍G-250溶液；精密稱取待測纖維樣品 〇. Ig于試管中，于20°c時用1.0 mol/L次氯酸鈉 IOmL將樣品溶解；將溶解樣品包含未溶解 纖維一同置于離心機中進行離心，速度設(shè)定為4000r/min，時間為lOmin，待離心完畢后，用 移液器移取1.0 mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混合均勻；從容量瓶中分別取 出ImL的樣品于另外4個試管中，分別加入5mL考馬斯亮藍溶液，混勻；其中2個試管，2min 后顏色發(fā)生顯著變化，由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色；另外2個試管中的溶液經(jīng)分光光度儀測試，最大 吸收波長都是595nm。結(jié)合顯色反應(yīng)與分光光度測試結(jié)果說明該纖維中含有蛋白質(zhì)，通過最 大吸收波長下的吸光度值和待測液稀釋倍數(shù)說明該纖維中的蛋白質(zhì)含量高，這與羊毛纖維 含有蛋白質(zhì)的性質(zhì)相吻合。
[0022] 實施例2 :對已知蛋白質(zhì)纖維一一蠶絲進行測試。
[0023] 采用實施例1中的測試過程，對蠶絲進行測試。2min后顯色反應(yīng)非常明顯，最大吸 收波長都是594nm。結(jié)合顯色反應(yīng)與分光光度測試結(jié)果說明該纖維中含有蛋白質(zhì)，通過最大 吸收波長下的吸光度值和待測液稀釋倍數(shù)說明該纖維中的蛋白質(zhì)含量高，這與蠶絲纖維含 有蛋白質(zhì)的性質(zhì)相吻合。
[0024] 實施例3 :對已知再生蛋白質(zhì)纖維一一牛奶蛋白纖維進行測試。
[0025] 按照技術(shù)方案中步驟1制備好考馬斯亮藍G-250溶液；精密稱取待測纖維樣品 0. 2g于試管中，于20°C時用1.0 mol/L次氯酸鈉 IOmL將樣品溶解；將溶解樣品包含未溶解 纖維一同置于離心機中進行離心，速度設(shè)定為4000r/min，時間為lOmin，待離心完畢后，用 移液器移取2. OmL上清液于50mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混合均勻；從容量瓶中分別取 出ImL的樣品于另外4個試管中，分別加入5mL考馬斯亮藍溶液，混勻；其中2個試管，2min 后顏色發(fā)生顯著變化，由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色；另外2個試管中的溶液經(jīng)分光光度儀進行測試， 最大吸收波長都是594nm。結(jié)合顯色反應(yīng)與分光光度測試結(jié)果說明該纖維中含有蛋白質(zhì)，通 過最大吸收波長下的吸光度值和待測液稀釋倍數(shù)說明該纖維中的蛋白質(zhì)含量較高，這與牛 奶蛋白纖維含有蛋白質(zhì)的性質(zhì)相吻合。
[0026] 實施例4 :對已知再生蛋白質(zhì)纖維一一大豆蛋白纖維進行測試。
[0027] 采用實施例3中的測試過程，對大豆蛋白纖維進行測試。2min后顯色反應(yīng)非常明 顯，最大吸收波長都是593nm。結(jié)合顯色反應(yīng)與分光光度測試結(jié)果說明該纖維中含有蛋白 質(zhì)，通過最大吸收波長下的吸光度值和待測液稀釋倍數(shù)說明該纖維中的蛋白質(zhì)含量較高， 這與大豆蛋白纖維含有蛋白質(zhì)的性質(zhì)相吻合。
[0028] 實施例5 :對已知纖維素纖維--棉進行測試。
[0029] 按照技術(shù)方案中步驟1制備好考馬斯亮藍G-250溶液；精密稱取待測纖維樣品 〇. 6g于試管中，于20°C時用1.0 mol/L次氯酸鈉 IOmL將樣品溶解；將溶解樣品包含未溶解 纖維一同置于離心機中進行離心，速度設(shè)定為4000r/min，時間為10min，待離心完畢后，用 移液器移取5mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混合均勻；從容量瓶中分別取出 ImL的樣品于另外4個試管中，分別加入5mL考馬斯亮藍溶液，混勻；其中2個試管，觀察顏 色變化，紅色變淡，藍色不是非常明顯；另外2個試管中的溶液經(jīng)分光光度儀進行測試，最 大吸收波長都是595nm。通過分光光度測試結(jié)果說明該纖維中含有蛋白質(zhì)，但是顯色不明 顯，結(jié)合最大吸收波長下的吸光度值和待測液稀釋倍數(shù)分析說明該纖維中的蛋白質(zhì)含量很 低，這與棉纖維所含蛋白質(zhì)非常少的性質(zhì)相吻合。
[0030] 實施例6 :對已知纖維素纖維一一麻進行測試。
[0031] 采用實施例5中的測試過程，對麻纖維進行測試。2~30min內(nèi)顯色不明顯，測試 兩個試樣最大吸收波長都是595nm，但吸光度值很低，峰很平緩。說明該纖維中蛋白質(zhì)含量 很低，這與麻纖維所含蛋白質(zhì)非常少的性質(zhì)相吻合。
[0032] 實施例7-10 :對已知合成纖維進行測試。
[0033] 采用實施例5中的測試過程對幾種典型合成纖維進行測試，測試現(xiàn)象與結(jié)果列于 表1中。
[0034] 表1幾種合成纖維的測試情況
[0035]
【主權(quán)項】
1. 一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法，其特征在于將考馬斯亮藍法應(yīng)用到纖維中蛋白 質(zhì)的定性檢測中，檢測過程包括： 步驟1 :考馬斯亮藍G-250溶液的制備； 步驟2 :纖維樣品溶液的制備； 步驟3 :樣品中蛋白質(zhì)的定性鑒別。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法，其特征在于所述考馬斯亮 藍定性檢測法不僅適用于檢測參絲、羊毛、再生蛋白質(zhì)纖維等蛋白質(zhì)纖維，所有纖維均可作 為檢測對象。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法，其特征在于所述制備纖維 樣品溶液所用的溶劑為I.Omol/L次氯酸鈉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法，其特征在于所述樣品中蛋 白質(zhì)的定性鑒別是通過顯色反應(yīng)現(xiàn)象與分光光度測試結(jié)果進行分析鑒別。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述樣品中蛋白質(zhì)的定性鑒別，其特征在于所述顯色反應(yīng)現(xiàn)象是觀 察待測溶液顏色在2~30min內(nèi)是否發(fā)生由紅至藍的變化。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述樣品中蛋白質(zhì)的定性鑒別，其特征在于所述分光光度測試是測 試待測溶液的最大吸收波長Xmax是否為595nm或接近595nm。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種纖維中蛋白質(zhì)的快速鑒別方法。將考馬斯亮藍法應(yīng)用到纖維中蛋白質(zhì)的定性檢測中，利用蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250間的快速顯色反應(yīng)及蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm具有最大吸收波長的特點，對纖維進行是否含有蛋白質(zhì)進行定性鑒別。檢測步驟包括制備考馬斯亮藍溶液，制備纖維樣品溶液，樣品中蛋白質(zhì)的定性鑒別。檢測過程簡單快速，2min即可產(chǎn)生顯色反應(yīng)，繼而進行分光光度測試，30min完成測試。
【IPC分類】G01N21-78
【公開號】CN104730069
【申請?zhí)枴緾N201510107580
【發(fā)明人】吳煥嶺, 朱馴, 王嵐, 金紹娣
【申請人】鹽城工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年3月7日