rT3化學發(fā)光免疫檢測試劑盒及其檢測方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及體外診斷檢測技術領域，特別是涉及一種rT3(反三碘甲狀腺原氨酸） 化學發(fā)光免疫檢測試劑盒及其檢測方法和應用。
【背景技術】
[0002] 反三碘甲狀腺原氨酸（rT3)又稱3,3 '，5 '-三碘甲腺原氨酸，是正常人血清中 存在的一種甲狀腺激素，是T4(甲狀腺素）在肝、腎、垂體及心肌等組織中，經5-脫碘酶脫 去酪氨酸環(huán)上的一個碘而生成的。rT3在體內降解速度較快，其半壽期為30-60分鐘。它 在血液中含量甚微，生物活性很低，但在不同的生理及病理狀況下，血清含量有顯著區(qū)別， 因此，測定血清中rT3水平在臨床上仍有一定意義。例如：妊娠時，臍血及羊水rT3含量較 高，能反映胎兒甲狀腺功能狀態(tài)?？傮w來說，血清中rT3濃度男女間無差異，從兒童到40歲 之間隨年齡增長呈下降趨勢，而40歲以后又隨年齡增長呈上升趨勢。
[0003] 具體來說，當rT3增高或降低，有助于以下幾種情況的判斷：
[0004] A，甲狀腺功能亢進或減退癥：甲亢時rT3升高，而且比T3，T4靈敏。當用抗甲狀腺 藥物治療時，Τ3降低較快，而rT3下降緩慢，當Τ3和rT3都正常，表示用藥適當；若rT3和 T4均低于正常，則表示用藥過量。rT3的降低對于輕型或亞臨床型甲狀腺功能減退的判斷 有非常重要的意義。
[0005] B，甲狀腺疾病：急性心肌梗塞，肝硬變、糖尿病、尿素癥、腦血管病、胃癌等類疾病 還可出現T3下降，故顯示出T3/rT3比值降低。
[0006] C.替代治療的觀察：甲狀腺機能減退癥服用甲狀腺素替代治療后，rT3、T3均升高 提示用量過大，而甲狀腺功能減退癥在使用抗甲亢藥物后出現rT3下降，則提示藥物用量 過大，故rT3測定可用于監(jiān)測用藥。
[0007] D.藥物引起的高rT3現象：使用乙胺碘呋酮、糖皮質激素、丙基硫氧嘧啶、心得胺 等藥物可出現高rT3現象，故rT3還可用于監(jiān)測上述藥物的使用。
[0008] 目前，臨床上測定血清反三碘甲狀腺原氨酸（rT3)的方法主要有放射性免疫法、 酶聯免疫法等，而放射性免疫法及酶聯免疫法存在諸多不足。如：傳統的放射性免疫法或酶 聯免疫法方法檢測時間長，同時主要依靠純手工加樣等系列繁瑣操作，效率低，容易導致實 驗結果誤差大；由于酶促反應不夠徹底，且易受外部干擾因素影響，如溫度、時間及材料濃 度影響，因此檢測時特異性低，靈敏度差，檢測范圍窄。并且，放射性免疫法還存在放射性污 染、標記物半衰期短、對操作者具有放射性損傷等缺陷。

【發(fā)明內容】

[0009] 基于此，本發(fā)明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種rT3化學發(fā)光免疫檢 測試劑盒，該化學發(fā)光免疫檢測試劑盒是將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術與高特異性 的免疫反應相結合，具有靈敏度高，特異性好和檢測范圍寬的優(yōu)點。
[0010] 為實現上述目的，本發(fā)明采取以下技術方案：
[0011] 一種rT3化學發(fā)光免疫檢測試劑盒，包括以下組分：
[0012] 1)標記物體系：包括直接連接或間接連接標記示蹤物的反三碘甲狀腺原氨酸抗 原或抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體；
[0013] 2)磁性微球體系：包括相應的直接連接或間接連接抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體 或反三碘甲狀腺原氨酸抗原的磁性微球。
[0014] 并且，當標記物體系包括直接連接或間接連接標記示蹤物的反三碘甲狀腺原氨酸 抗原，則磁性微球體系包括直接連接或間接連接抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體的磁性微球； 當標記物體系包括直接連接或間接連接標記示蹤物的抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體，則磁性 微球體系包括直接連接或間接連接反三碘甲狀腺原氨酸抗原的磁性微球。
[0015] 上述"直接連接"為直接結合的連接，上述"間接連接"為通過生物素和鏈霉親和 素，或異硫氰酸熒光素和抗異硫氰酸熒光素抗體等能夠相互結合的搭橋物以間接結合的方 式連接。
[0016] 本發(fā)明提供了一種rT3化學發(fā)光免疫檢測試劑盒，利用化學發(fā)光免疫的方法來檢 測rT3,具有靈敏度高，特異性好和檢測范圍寬的優(yōu)點，并且，本發(fā)明中的試劑盒，以磁性微 球作為檢測中的固相體系，既能在與待測物反應時均勻的懸浮于反應體系中，與待測物更 好的結合，又能在分離時外加磁場即可方便的實現分離，具有操作方便的特點。更為重要的 是，該檢測試劑盒能與常規(guī)技術中的化學發(fā)光分析儀配合使用，實現全自動化檢測，避免了 人為因素可能導致的實驗誤差，并提高了分析效率。
[0017] 在其中一個實施例中，所述2)磁性微球體系中，所述間接連接抗反三碘甲狀腺原 氨酸抗體的磁性微球由生物素標記的抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體，和鏈霉親和素包被的磁 性微球組成；或所述間接連接抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體的磁性微球由異硫氰酸熒光素標 記的抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體，和抗異硫氰酸熒光素抗體包被的磁性微球組成。
[0018] 在其中一個實施例中，所述2)磁性微球體系中，所述間接連接反三碘甲狀腺原氨 酸抗原的磁性微球由異硫氰酸熒光素標記的反三碘甲狀腺原氨酸抗原，和抗異硫氰酸熒光 素抗體包被的磁性微球組成；或所述間接連接反三碘甲狀腺原氨酸抗原的磁性微球由生物 素標記的反三碘甲狀腺原氨酸抗原，和鏈霉親和素包被的磁性微球組成。
[0019] 在其中一個實施例中，所述1)標記物體系中，所述間接連接標記示蹤物的反三碘 甲狀腺原氨酸抗原由生物素標記的反三碘甲狀腺原氨酸抗原，和鏈霉親和素標記的標記示 蹤物組成；或所述間接連接標記示蹤物的反三碘甲狀腺原氨酸抗原由異硫氰酸熒光素標記 的反三碘甲狀腺原氨酸抗原，和抗異硫氰酸熒光素抗體標記的標記示蹤物組成。
[0020] 在其中一個實施例中，所述1)標記物體系中，所述間接連接標記示蹤物的抗反三 碘甲狀腺原氨酸抗體由生物素標記的抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體，和鏈霉親和素標記的標 記示蹤物組成；或所述間接連接標記示蹤物的抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體由異硫氰酸熒光 素標記的反三碘甲狀腺原氨酸抗原，和抗異硫氰酸熒光素抗體標記的標記示蹤物組成。
[0021] 上述抗異硫氰酸熒光素抗體既可以為單克隆抗體，也可以為多克隆抗體。
[0022] 上述方案豐富了檢測所使用的標記物體系和磁性微球體系，可根據不同需求靈活 選擇。例如可以在磁性微球體系中直接將反三碘甲狀腺原氨酸抗原（或抗反三碘甲狀腺原 氨酸抗體）連接磁性微球，也可以通過上述的間接搭橋方式連接反三碘甲狀腺原氨酸抗原 (或抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體）和磁性微球。同樣，可以在標記物體系中將標記示蹤物 直接連接抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體（或反三碘甲狀腺原氨酸抗原），也可以通過上述的 間接搭橋方式連接標記示蹤物和抗反三碘甲狀腺原氨酸抗體（或反三碘甲狀腺原氨酸抗 原）。并且，上述磁性微球體系和標記物體系中采用何種連接方式（直接連接或間接連接） 并無相互影響或限定，既可在磁性微球體系和標記物體系中同時采用直接連接方式或同時 采用間接連接方式，也可磁性微球體系選用直接連接，標記物體系采用間接連接，或者磁性 微球體系選用間接連接，標記物體系采用直接連接?？梢岳斫獾?，上述間接搭橋連接方式還 可采用其它間接標記體系進行間接連接。
[0023] 上述標記示蹤物包括以下幾種：1、化學發(fā)光免疫分析使用的能夠直接發(fā)光的標記 物，如魯米諾及其衍生物、異魯米諾或其衍生物、叮啶酯等；2、化學發(fā)光酶免疫分析使用的 配合相應底物可以發(fā)光的標記物，如堿性磷酸酶或過氧化物酶等。
[0024] 在其中一個實施例中，所述標記示蹤物為發(fā)光標記物，選自：金剛烷、魯米諾及其 衍生物、異魯米諾及其衍生物、叮啶酯。優(yōu)選N-(4-氨基丁基）-N-乙基異魯米諾（ABEI)，與 上述發(fā)光標記物配合的底物包括H 2O2-微過氧化物酶、H2O2-過氧化氫酶、H2O 2-乳過氧化物 酶、H2O2-次氯血紅素、H2O 2-氯化血紅素、次氯酸鹽-CoCl2、過硫酸鹽、過氧化鉀、高碘酸鈉、 H2O2-K3Fe (CN)6、黃嘌呤-次黃嘌呤氧化酶、叔丁醇鉀中的至少一種。
[0025] 上述發(fā)光標記物是指在發(fā)光反應中參與能量轉移并最終以發(fā)射光子的形式釋放 能量的化合物，該化合物能夠經催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發(fā)態(tài)的中間體， 當這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時，同時發(fā)射出光子（hM)。
[0026] 在其中一個實施例中，所述標記示蹤物